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开发用于高内涵筛选的 CRISPR/Cas9 介导荧光报告基因人类多能干细胞系
摘要：应用 CRISPR/Cas9 系统将荧光蛋白敲入人类多能干细胞 (hPSC) 中的内源性目的基因，有可能促进基于 hPSC 的疾病建模、药物筛选和移植疗法优化。为了评估荧光报告 hPSC 系用于高内涵筛选方法的能力，我们将 EGFP 靶向内源性 OCT4 基因座。产生的 hPSC–OCT4–EGFP 系表达与多能性标记物一致的 EGFP，并且可以适应多孔格式以进行高内涵筛选 (HCS) 活动。然而，在长期培养后，hPSC 暂时失去了 EGFP 表达。或者，通过将 EGFP 敲入 AAVS1 基因座，我们建立了稳定且一致的 EGFP 表达 hPSC–AAVS1–EGFP 系，该系在体外造血和神经分化期间保持 EGFP 表达。因此，hPSC–AAVS1–EGFP 衍生的感觉神经元可适应高内涵筛选平台，该平台可应用于高通量小分子筛选和药物发现活动。我们的观察结果与最近的发现一致，表明在 OCT4 基因座进行 CRISPR/Cas9 基因组编辑后会出现高频率的靶向复杂性。相反，我们证明 AAVS1 基因座是 hPSC 中的安全基因组位置，具有高基因表达，不会影响 hPSC 质量和分化。我们的研究结果表明，应应用 CRISPR/Cas9 整合的 AAVS1 系统来生成稳定的报告 hPSC 系以用于长期 HCS 方法，并且它们强调了仔细评估和选择应用的报告细胞系以用于 HCS 目的的重要性。
（DNA-结合蛋白Pull-down） 货号
NCOA3是通过ESRRB招募到目标基因座的ERRE的。（a）使用先前描述的野生型（WT）或ERRE突变序列的DNA下拉测定法（Feng et al。2009）或Nanog（van den Berg等人 2008）。 生物素化探针（40–50-50碱基对[BP]）与来自Flag-EsRRB和NCOA3转染的COS-1细胞的提取物一起孵育，并在链霉亲蛋白珠上回收，并通过Western Blotting可视化与DNA相关的蛋白质。 （b）ESRRB，KLF4，NANOG和SOX2 ERRES的ESRRB和NCOA3富集水平以及一个基因（Inter。） 通过CHIP和QPCR评估的ESC中的控制区域，并相对于输入表示。 数据是三个生物学重复的平均6 SEM。 （c）ESRRB耗竭后的候选基因座的NCOA3和ESRRB富集水平相对于输入表示。 在每个实验中，富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100％。 数据是至少两个独立实验的平均6 SD。 B和C中的虚线表示对照IgG（Santa Cruz Biotechnology）的背景富集。 （d）蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。 请注意，此时NCOA3和OCT4级别不变。 （E）使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析，该探针还包含相邻的OCT – SOX位点（Van Den Berg等人 2008），并从NCOA3，OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。2009）或Nanog（van den Berg等人2008）。 生物素化探针（40–50-50碱基对[BP]）与来自Flag-EsRRB和NCOA3转染的COS-1细胞的提取物一起孵育，并在链霉亲蛋白珠上回收，并通过Western Blotting可视化与DNA相关的蛋白质。 （b）ESRRB，KLF4，NANOG和SOX2 ERRES的ESRRB和NCOA3富集水平以及一个基因（Inter。） 通过CHIP和QPCR评估的ESC中的控制区域，并相对于输入表示。 数据是三个生物学重复的平均6 SEM。 （c）ESRRB耗竭后的候选基因座的NCOA3和ESRRB富集水平相对于输入表示。 在每个实验中，富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100％。 数据是至少两个独立实验的平均6 SD。 B和C中的虚线表示对照IgG（Santa Cruz Biotechnology）的背景富集。 （d）蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。 请注意，此时NCOA3和OCT4级别不变。 （E）使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析，该探针还包含相邻的OCT – SOX位点（Van Den Berg等人 2008），并从NCOA3，OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。2008）。生物素化探针（40–50-50碱基对[BP]）与来自Flag-EsRRB和NCOA3转染的COS-1细胞的提取物一起孵育，并在链霉亲蛋白珠上回收，并通过Western Blotting可视化与DNA相关的蛋白质。（b）ESRRB，KLF4，NANOG和SOX2 ERRES的ESRRB和NCOA3富集水平以及一个基因（Inter。）通过CHIP和QPCR评估的ESC中的控制区域，并相对于输入表示。数据是三个生物学重复的平均6 SEM。（c）ESRRB耗竭后的候选基因座的NCOA3和ESRRB富集水平相对于输入表示。在每个实验中，富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100％。 数据是至少两个独立实验的平均6 SD。 B和C中的虚线表示对照IgG（Santa Cruz Biotechnology）的背景富集。 （d）蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。 请注意，此时NCOA3和OCT4级别不变。 （E）使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析，该探针还包含相邻的OCT – SOX位点（Van Den Berg等人 2008），并从NCOA3，OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100％。数据是至少两个独立实验的平均6 SD。B和C中的虚线表示对照IgG（Santa Cruz Biotechnology）的背景富集。（d）蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。请注意，此时NCOA3和OCT4级别不变。（E）使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析，该探针还包含相邻的OCT – SOX位点（Van Den Berg等人2008），并从NCOA3，OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。
CRISPR/Cas9 介导的 ELANE 敲除可使原代造血干细胞和祖细胞以及诱导性多能干细胞中性粒细胞成熟
PRE CTGGGCTACACTGAGCACC TGACAGGTGGTGGCAATGCC OCT4 CCTCACTTCACTGCACTGTA CAGGTTTTCTTTCCCTAGCT SOX2 TTCACATGTCCCAGCACTACCAGA TCACATGTGTGAGAGGGGCAGTGTG C NANOG TCACACGGAGACTGTCTCTC GAACACAGTTCTGGTCTTCTG ABCG2 TACCTGTATAGTGTACTTCAT GGTCATGAGAAGTGTTGCTA chr12 位置 (24306644) TCTTCTTCAGGCTTTGCTTGCAGG GGTAGGAGTAGAAGGGTGGC OR2W4P GTGGGTTTCTCTGATCGTCCCA GGAAGAACTGTTCCTGGCTGC GPR107 CTGCCAAGCTGCTGTACTTCAA TCTTACGTGCTCCAAAGGCTGA BiP AGGACAAGAAGGAGGACGTGG GGTTGGAGGTGAGCTGGTTC Bcl-XL GGGTTCCCTTTCCTTCCATC AGTGGCCCCTAAATGGCTCT
论文胃癌干细胞对胃癌侵袭、迁移及血管生成的影响
目的：利用胃癌细胞株SGC7901和胃癌干细胞（CSC-G），探讨肿瘤干细胞在侵袭、转移及肿瘤血管生成中的作用。方法：RT-PCR和Western印迹法检测干细胞标志物（OCT4、SOX2、C-Myc、Klf4）的表达。体外球形克隆实验、平板克隆实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、耐药实验、划痕迁移实验、环状形成实验检测其增殖、迁移、侵袭能力、L-OHP和5-FU抗性、血管生成，小鼠成瘤实验检测其致瘤能力。结果：与SGC7901相比，CSC-G中Oct4、Sox2、Klf4、CD44 mRNA表达显著增高，E-cadherin mRNA相对表达量低于SGC7901，而c-Myc表达量无显著变化。CSC-G的增殖、耐药、迁移、侵袭能力显著增高，小鼠成瘤能力也显著增高。结论：CSC-G的增殖、耐药、迁移、侵袭、成瘤能力显著高于SGC7901，CSC-G在增殖、迁移、侵袭、成瘤过程中发挥重要作用。
通过将核糖核蛋白电穿孔到Zona-Intact牛胚胎
体细胞核转移或细胞质显微注射已用于产生基因组编辑的农场动物。但是，这些方法具有降低其效率的几个缺点。这项研究旨在开发电穿孔条件，使CRISPR/CAS9系统的传递到牛为有效的基因敲除。我们优化了电穿孔条件，以传递CAS9：SGRNA核糖核蛋白到牛合子，而不会损害胚胎发育。较高的电穿孔脉冲电压导致膜渗透性增加。但是，高于15 v/mm的电压降低了胚胎发育潜力。牛胚胎的Zona卵石不是有效的RNP电穿孔的障碍。使用针对最大膜通透性进行优化的参数，同时我们在靶向牛OCT4时达到了高基因编辑的速率，这导致100％评估的胚胎和预期在莫拉拉阶段对胚胎发育的预期停滞的100％蛋白质。总而言之，CAS9：SGRNA核糖核蛋白可以通过电穿孔到Zona-Intact牛合子的能力递送，从而导致有效的基因敲除。
回顾癌症干细胞标记的预后价值...
目标：宫颈癌的预后生物标志物被广泛研究，包括癌症干细胞（CSC）标记。但是，它们的意义仍然不确定。这项研究旨在确定宫颈癌干细胞（CCSC）标记在生存中的作用。材料和方法：我们进行了系统的综述和荟萃分析（Prospero CRD42021237072），该研究报告了CCSC标记作为基于PRISMA指南的预后预测指标。我们纳入了研究组织肿瘤中CCSC表达的关联与PubMed，EBSCO和Cochrane库数据库的总生存期（OS）或无病生存期（DFS）的关联的英文文章。根据纽卡斯尔 - 奥塔瓦质量评估量表分析了研究质量。结果：从413个出版物中，在包含和排除标准的研究选择后，包括22项研究。CCSC标记的高表达与差的OS和DF相关（HR = 1.05，95％CI：1.03 - 1.07，P <0.0001; HR = 1.31，95％CI：1.09 - 1.17，P <0.00001;分别分别）。Sub-analysis of individual CCSC markers indicated significant correlations between CD44 (HR= 1.14, 95% CI: 1.07 – 1.22, P 0.0001), SOX2 (HR= 1.58, 95% CI: 1.17 – 2.14, P 0.003), OCT4 (HR= 1.03, 95% CI: 1.01 – 1.06, P 0.008), ALDH1 （HR = 1.36，95％CI：1.13 - 1.64，P 0.001）和CD49F（HR = 3.02，95％CI：1.37 - 6.64，P 0.006），OS较差； OCT4（HR = 1.14，95％CI 1.06 - 1.22，p 0.0003），SOX2（HR = 1.11，95％CI：1.06 - 1.16，P <0.0001）和AldH1（HR = 1.22，95％CI：1.10 - 1.35，P 0.0002），较差DFS）。我们没有为MSI-1和CK17进行荟萃分析，因为只有一项研究研究了这些标记。结论：OCT4，SOX2和ALDH1的表达与宫颈癌组织中的OS和DFS差有关。这些标记可能具有预测生物标志物来预测不利生存的潜在作用。
罗布斯塔咖啡豆提取物作为免疫调节剂对
摘要 目的：分析罗布斯塔咖啡豆提取物 (RCBE) 对牙髓间充质干细胞 (DPSC) 培养物在分泌细胞因子、生长因子和细胞分化方面的影响。材料和方法：仅从人类前磨牙牙齿中培养 DPSC，以及从人类前磨牙牙齿中给予浓度为 0.0625%、0.125%、0.25% 和 0.5% 的 RCBE 培养 24 小时、48 小时和 72 小时的 DPSC。通过 ELISA 检查 DPSC 培养物的分泌蛋白质组中的 TNF-α、IFN-g、IGF 和 VEGF，检查 SOX2 和 Oct4，以及 Wnt 分化标志物。统计分析使用方差分析并继续使用 LSD。结果：在 0.25% RCBE 浓度下浸泡 72 小时后，TNF-α 和 IFN-γ 水平显著降低（p<0.05）。与其他组相比，在 0.25% RCBE 下，IGF 和 VEGF 生长因子水平增加，在 0.25% 浓度下浸泡 72 小时后，分化标志物 SOX2 和 Oct4 以及 Wnt 也增加（p<0.05）。结论：在 DPSCs 培养物中，给予浓度为 0.25% 的 RCBE 可以减少炎性细胞因子并增加生长因子和分化标志物。关键词：牙髓；间充质干细胞；分泌组；草药。
scopus
抽象的癌症干细胞（CSC）是造成肿瘤起源，转移，复发和对常规治疗的抗性的少量肿瘤细胞。因此，针对CSC的靶向对抗癌症至关重要。sf1是Clinacanthus nutans叶提取物的标准化部分，据报道表现出对宫颈癌细胞的有效和选择性抗塑性作用。在这项研究中，已经评估了SF1抑制宫颈癌干细胞的干性的潜力。SF1提取。siha细胞系在CSC条件的培养基（宫颈圈）中培养为球，并使用Ozblue细胞活力试剂盒确定SF1的IC50针对宫颈的IC50。使用流式细胞仪测定法评估了SF1对包括CD49F，CK17，SOX2，OCT4和Nanog在内的宫颈干标记的影响。使用球体形成测定法和异种移植小鼠模型评估了SF1对SF1的自我更新抑制作用和抗肿瘤的作用。本研究表明，在17.07 µg/ml的IC50处的SF1处理抑制了SIHA宫颈圈的体外和体内的增殖，自我更新和肿瘤性能力。在宫颈CSC中CK17，SOX2，CD49F和OCT4的表达降低表明SF1的抑制作用也与抑制干性标记物有关。这些结果表明，SF1对宫颈CSC具有抗肿瘤作用，并且可以被视为一种有前途的方法，用于开发靶向癌症的宫颈癌。©2024出版商大学马来西亚。保留所有权利。
使用Yamanaka因子诱导多能干细胞
抽象的胚胎干细胞具有无限制分裂的能力，并且是多发的，并且可以从三层新芽中区分细胞。高桥和山内卡（Yamanaka）在2006年的实验表明，可以通过添加一系列因子，即OCT4，SOX2，KLF4和C-MYC（Yamanaka因子）来获得诱导的多能干细胞（IPS细胞）。撰写本文评论的目的是回顾使用Yamanaka因素在获取社会研究细胞以造福临床使用的情况下的发展和挑战。文献搜索是通过在2006年至2019年浏览发表的期刊来进行的，该期刊讨论了与Yamanaka因素的产生社会研究细胞的生产。文献搜索结果表明，该因子是可以与染色质结合并导致染色质区域的先驱因子，并引起基因表达的激活或抑制。 C-MYC与参与细胞代谢，细胞周期法规和生物合成途径的基因结合。OCT4，SOX2和KLF4靶向编码发育和转录调节剂的基因。具有Yamanaka因子的体细胞诱导机制需要进一步搜索。到目前为止，社会研究细胞是由各种细胞产生的，并且有可能治疗各种疾病。来自社会研究细胞的临床试验已得到食品药品管理局（FDA）的批准。IPS细胞的应用具有许多障碍，例如效率低，高变异性和所使用的向量会导致突变。因此，为了获得有效，有效和安全的方法，需要进一步的研究与使用的方法相关。