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对人工智能的看法（AI）对审计师的使用...
背景：间质干细胞衍生的外泌体（MSC-EXO）具有治疗潜力。然而，尚未阐明MSC -EXO对H 2 O 2引起的损伤后人类原代黑素细胞生存和黑色素发生的影响。因此，我们研究了MSC -EXO对人类原发性黑色素细胞的H 2 O 2生存的影响及其在体外的增殖，凋亡，衰老和黑色素发生的影响。方法：通过顺序离心从人MSC制备MSC-EXO，并以透射电子显微镜，Western blot和纳米颗粒跟踪分析为特征。人类原发性黑色素细胞分离并用不同浓度的MSC-EXO处理，然后暴露于H 2 O 2。此外，通过CCK-8，流式细胞仪，Western Blot，L-DOPA染色，酪氨酸酶活性，酪氨酸酶活性和RT-QPCR测试了使用MSC-EXO预处理对黑素细胞增殖，凋亡，衰老和黑色素生成的影响。结果：使用较低剂量的MSC -EXO保护人类原代黑素细胞免受H 2 O 2触发的凋亡的预处理，而较高剂量的MSC -EXO的预处理增强了H 2 O 2 O 2诱导的黑色素细胞细胞的细胞凋亡。Compared with the untreated control, pretreatment with a lower dose (1 µg/mL) of MSC-Exo enhanced the proliferation of melanocytes, abrogated the H 2 O 2 -increased p53, p21, IL-1β, IL-6 and IL-8 expression and partially rescued the H 2 O 2 -decreased L-dopa staining reaction, tyrosinase activity, MITF and黑素细胞中的TRP1表达。MSC-EXO可能是白癜风的有前途的治疗策略。结论：我们的发现表明，使用低剂量的MSC -EXO治疗可以通过改善H 2 O 2诱导的黑素细胞的凋亡和黑素细胞衰老来促进人类原发性黑素细胞的增殖和黑色素发生。关键词：间充质干细胞衍生的外泌体，黑素细胞，凋亡，增殖，衰老
肌营养不良蛋白DP71剪接变体的表达在啮齿动物脑发育期间受到时间调节
摘要肌营养不良蛋白DP71是大脑中Duchenne肌肉营养不良（DMD）基因的主要产物，其在DMD患者和小鼠模型中的丧失会导致认知障碍。dp71表示为一系列蛋白质，该蛋白质是由外显子71至74和78的替代剪接产生的，该蛋白在主DP71D和DP71F组中分类为包含特定C端端的dp71d和DP71F组。但是，尚不清楚每个同工型在大脑发育的不同细胞类型，大脑区域和/或阶段中是否具有特定的作用。在本研究中，我们表征了胎儿（E10.5，E15.5）和产后（P1，P7，P14，P14，P21和P60）小鼠和大鼠脑发育期间DP71同工型的表达。我们通过RT-PCR和在全脑和不同大脑结构中的样品中的RT-PCR和克隆测定方法很好地量化了几个DP71转录本的表达。检测到以下DP71转录本：DP71D，DP71D ∆71，DP71D ∆74，DP71D ∆71,74，DP71D ∆71d ∆71-74，DP71F，DP71F，DP71F，DP71F，DP71F ∆71，DP71F ∆1F ∆1F ∆1FΔ74，dpp0071,71,71,71,71,71,007,71,00f ∆71,了Δ71-74。我们发现DP71F同工型是在E10.5（> 80％）中表达的主要转录物，而其表达则逐渐降低并被DP71D组的同工型从E15.5到产后和成年年龄所代替。第三代纳米孔测序证实了这一主要发现。此外，我们发现特定DP71同工型的表达水平随产后阶段和大脑结构的函数而变化。我们的结果表明，DP71同工型在胚胎和产后脑发育过程中具有不同的和互补的作用，很可能参与了不同细胞类型的各种成熟过程。
在衰老小胶质细胞中提高NAD，这是一个有用的策略。
在神经退行性疾病和衰老中，小胶质细胞，脑免疫细胞获得了疾病相关的小胶质细胞特征，这些特征可能有利于早期疾病状态的组织修复，但是在晚期，在晚期恢复了脑稳态的能力，并保护神经元，并保护神经元，并因细胞死亡而保护神经元。衰老的小胶质细胞表现出与分泌相关的衰老表型，并且代谢受损，而NAD耗竭，该表型在基因组完整性和细胞代谢中起着核心作用。新兴证据强调了衰老和神经退行性疾病中NAD的较低水平，因此Sirtuins的活性受损。在这项研究中，我们研究了小胶质细胞中衰老过程中发生的变化，开发了一种慢性暴露（长达30天）的体外模型至高铁浓度。最初，铁处理会诱导小胶质细胞增殖，增强吞噬作用，并提高NAD水平表明小胶质细胞激活。经过30天的治疗后，小胶质细胞获得了一种胶状表型，其特征是以增殖停滞，吞噬作用降低，SASP标记的上调，EVS产生显着增加。生化，转录组和代谢组分析显示，铁处理的小胶质细胞中NAD和NADPH含量的水平降低，与CD38的表达增加（主要NAD摄入酶）的表达增加。此外，与对照小胶质细胞相比，在老年/衰老细胞中下调的Sirtuin 6的水平和活性大大降低。。衰老的小胶质细胞与健康的小胶质细胞诱导的健康细胞中的衰老特征共培养，这表明Saßgal和P21阳性细胞的显着增加以及NAD水平降低了。结论是NAD的提升可能代表了一种有用的策略，可以抵消衰老和衰老对健康小胶质细胞的传播。
研究论文比较神经母细胞瘤细胞中 RIST 分子靶向方案中的 mTOR 抑制剂雷帕霉素和 Torin-2
复发或难治性高危神经母细胞瘤患者的预后仍然不容乐观，迫切需要新的治疗方案。RIST 治疗方案采用多模式节拍疗法设计，结合分子靶向药物（雷帕霉素和达沙替尼）和化疗主干（伊立替康和替莫唑胺），目前正在 II 期临床试验（NCT01467986）中验证。随着新型、更有效的 ATP 竞争性 mTOR 抑制剂的出现，我们期望改进 RIST 联合疗法。通过比较 Torin-1、Torin-2、AZD3147 和 PP242 的 IC 50 值，我们确定只有 Torin-2 抑制了在纳摩尔浓度下测试的所有三种 MycN 扩增神经母细胞瘤细胞系的细胞活力。两种 mTOR 抑制剂的单独治疗诱导了显著的 G 1 细胞周期停滞，与达沙替尼联合治疗降低了细胞周期调节剂细胞周期蛋白 D1 的表达或增加了细胞周期抑制剂 p21 的表达。两种 mTOR 抑制剂的组合指数表明与达沙替尼具有协同作用。有趣的是，与雷帕霉素相比，与 Torin-2 联合治疗可产生更广泛的 mTOR 通路抑制，这表现为 AKT（Thr308、Ser473）、4E-BP（Ser65）和 S6K（Thr389）磷酸化降低。此外，在改良的多模态 RIST 方案中用 Torin-2 替代雷帕霉素可降低细胞活力并诱导细胞凋亡，尽管所用的 Torin-2 药物浓度明显较低。纳摩尔浓度的功效可显著降低与雷帕霉素相关的不必要的免疫抑制。然而，目前我们不能排除 Torin-2 因其在更复杂系统中的效力而增加毒性的可能性。尽管如此，我们的结果表明，在 RIST 方案中加入 Torin-2 作为雷帕霉素的替代品可能是一种有效的选择，可以在复发或治疗难治性高危神经母细胞瘤的前瞻性临床试验中进行评估。
ASHG 2023 全体会议摘要
使用 CRISPR/Cas9 进行神经遗传疾病的基因编辑面临难以穿过血脑屏障、渗透性有限和治疗窗口狭窄的挑战。虽然改良的腺相关病毒 (AAV) 克服了其中一些障碍，但由于 Cas9 蛋白的长期存在，它们的免疫原性和更高的脱靶效应风险限制了它们对人类神经遗传疾病的转化价值。为了解决这个问题，我们开发了一种创新的非病毒递送工具，使用与 Cas9 蛋白和 sgRNA 结合的化学修饰核糖核蛋白 (RNP) (cRNP-Cas9/sgRNA，cRNPcg)。由于其尺寸小 (12um)，cRNPcg 能够有效渗透到大脑中的神经元细胞中，而瞬时 Cas9 蛋白大大降低了脱靶效应的风险。我们在体外和体内测试了 cRNPcg 对 Angelman 综合征 (AS) 的疗效，这是一种由神经元和母体特异性 UBE3A 基因表达缺陷引起的神经发育障碍。父系染色体中 UBE3A 的抑制表达由父系表达的非编码 UBE3A 反义转录本 (UBE3A-ATS) 介导。通过反义寡核苷酸 (ASO) 灭活 UBE3A-ATS 在正在进行的 1/2 期临床试验中显示出积极的临床效果。然而，ASO 的短暂作用需要每月鞘内注射，这对作为标准临床治疗方法提出了挑战。我们设计的 cRNPcg 系统可选择性地灭活 Ube3a-ATS 表达，并可能通过单次治疗实现永久性治疗效果。使用 Ube3a-YFP 报告小鼠，我们观察到高基因编辑效率（>75% 靶向细胞）和广泛的脑渗透。我们给新生儿 (P1-2) 和 P21 AS Ube3 a m-/p+ 模型鞘内注射了 cRNPcg，观察到 Ube3a-ATS 显著降低，并且 Ube3a 重新激活至正常水平的 30%，遍及皮质、海马和小脑。因此，这种治疗显著改善了多个行为领域，包括运动功能、焦虑样行为、学习和记忆，并且还延长了成年 AS Ube3 a m-/p+ 小鼠化学诱发的肌阵挛和强直性癫痫发作的潜伏期。重要的是，我们没有观察到与 cRNPcg 相关的任何急性或慢性毒性。此外，我们发现 cRNPcg 有效地重新激活了 AS 患者 hIPSC 衍生的神经祖细胞中父系染色体上的 UBE3A 表达，这些神经祖细胞存在 15q11-q13 的大量母系缺失。总之，我们的结果表明，cRNPcg 是一个将 CRISPR/Cas9 基因编辑传递到大脑的创新平台，具有广泛的应用和治疗许多其他神经遗传疾病的潜力。
RAD50 下调对 rucaparib 和阿霉素联合使用的协同作用 RAD50 下调对 rucaparib 和阿霉素联合使用的协同作用
摘要 目的：MRN（MRE11-RAD50-NBS1）蛋白复合物作为DNA损伤传感器发挥作用，在协调DNA双链断裂修复中起着至关重要的作用。尽管已经证明功能失调的MRN活性会使癌细胞对某些DNA损伤剂或PARP抑制剂敏感，但RAD50对鲁卡帕尼和阿霉素治疗的功能意义尚未研究。本研究的目的是研究RAD50缺陷的癌细胞对鲁卡帕尼和阿霉素组合的反应。材料和方法：本研究使用人骨骨肉瘤上皮细胞（U2OS）来评估RAD50表达水平的治疗潜力。应用RNA干扰技术来沉默RAD50 mRNA活性的表达。使用qRT-PCR技术来研究相关基因的mRNA表达水平。进行蛋白质印迹分析以评估相关蛋白质的表达水平。进行克隆存活试验以分析 RAD50 缺失对鲁卡帕尼和阿霉素联合治疗的影响。结果：RAD50 敲低导致 MRE11 和 NBS1 蛋白水平显着下降，但不影响 mRNA 和蛋白质水平上的 p53 和 p21 表达。此外，RAD50 缺失的细胞对急性阿霉素治疗的 DNA 损伤反应激活受损。我们最终表明，当与 PARP 抑制剂鲁卡帕尼联合使用时，RAD50 耗竭会增加阿霉素的细胞毒性。结论：总之，我们的临床前研究结果表明，RAD50 表达水平可以作为评估涉及 PARP 抑制剂的精准癌症治疗的预测生物标志物。关键词：RAD50、MRN 复合物、鲁卡帕尼、阿霉素。 ÖZ Amaç：MRN (MRE11-RAD50-NBS1) 蛋白质复合物与 DNA 传感器相连，并与同源物重新组合，并与 DNA 相匹配。 Fonksiyonel olmayan MRN 激活 kanser hücrelerini DNA'ya zarar veren ajanlara veya PARP 抑制剂 karşı duyarlı hale getirdiği gösterilmiş olsa da、RAD50'nin rucaparib ve doksorubisin tedavileri üzerindeki fonksiyonel önemi henüz araştırılmamıştır。但是，RAD50 缺陷可能与 rucaparib 和 doksorubisin 组合在一起。
抽象程序
乳腺癌仍然是全球三重阴性乳腺癌（TNBC）女性中诊断得最多的癌症之一，占约15％至20％的癌症。TNBC的治疗具有挑战性，因为它对激素疗法没有反应，并且经常会产生对化学疗法的抵抗力。天然产品长期以来一直在传统医学中被用作改善健康和治疗疾病的补救措施。重要的是，它们在现代药物发现中具有关键作用。最近，人们对从天然来源寻找生物活性剂作为替代或互补方式的生物活性剂对常规治疗和合成药物的兴趣越来越多。特别是对于癌症的治疗，在全球范围内，发病率和死亡率一直在上升。Ziiphus nummularia是属于鼠李菜科的小灌木丛，已被广泛用于传统医学中，以治疗各种疾病。其传统的治疗用途可能归因于其在生物活性化合物中的丰富性及其药理学特性的丰富性，包括抗氧化剂，抗炎，抗癌性活动。然而，其植物化学组成或针对侵略性TNBC的化学预防作用仍在探索很差。在本研究中，制备了Z. Nummularia（Zne）叶片的乙醇提取物，并通过色谱分离。zne降低了MDA-MB-231细胞（TNBC细胞系）的生存能力，ZNE分数6（F6）表现出最强的活性。ZNE和F6富含植物化学物质，HPLC-PDA-MS/MS分析鉴定出了几种F6的化合物，其中F6特别富含咖啡因苯苯。ZNE和F6在DPPH分析中均显示出有效的抗氧化活性，但在MDA-MB-231细胞中促进了活性氧（ROS）的产生。抗氧化剂N-乙酰基半胱氨酸（NAC）钝化的作用。NAC还钝化了ZNE和F6诱导的TNBC细胞活力的降低。我们还证明了ZNE和F6在G1处诱导细胞周期停滞，并触发了凋亡和自噬介导的细胞死亡。这是通过Ki67和Bcl-2蛋白水平的降低以及p38，p21，p27，rb，caspase 3，bax和lc3b的增加证实的。ZNE和F6也抑制了转移相关的细胞过程。也就是说，ZNE和F6处理的MDA-MB-231细胞的细胞迁移，侵袭和对胶原蛋白的粘附降低。这得到了MMP-9和整联蛋白β1水平的降低支持。此外，ZNE和F6还减少了诱导型一氧化氮合酶（INOS）的产生，并抑制了摩擦内血管生成。还发现，通过抑制RAW 264.7巨噬细胞中LPS刺激的炎症反应，ZNE具有有效的抗炎特性。通过靶向NF-κB途径，它显着降低了iNOS，环氧合酶-2（COX-2）的mRNA和蛋白质表达。综上所述，我们的发现表明，Z. nummularia富含植物化学物质，可以减弱TNBC的恶性表型，并可能为发现新药铅的创新途径提供用于治疗TNBC和其他癌症的新药物。801
简单而强大的电转染方案，可在人类 B 细胞中实现有效的异位基因表达和基因组编辑
1. Zhao N、Qi J、Zeng Z、Parekh P、Chang CC、Tung CH 等。使用简单的阳离子聚合物纳米复合物转染难以转染的淋巴瘤/白血病细胞。《Journal of Controlled Release》。2012；159(1)：104-10。2. Meacham JM、Durvasula K、Degertekin FL、Fedorov AG。细胞内递送的物理方法。《Journal of Laboratory Automation》。2014 年 2 月；19(1)：1-18。3. Kaestner L、Scholz A、Lipp P。转染和基因递送的概念和技术方面。《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》。2015 年 3 月；25(6)：1171-6。4. Mosier DE。“逆转录病毒载体的安全注意事项：简要回顾”简介。《Applied Biosafety》。2016；9(2)：68-75。 5. Glover DJ、Lipps HJ、Jans DA。《面向人类安全、非病毒治疗性基因表达》。《自然遗传学评论》。2005 年 4 月 10 日；6(4)：299-310。6. Kim TK、Eberwine JH。《哺乳动物细胞转染：现在和未来》。《分析和生物分析化学》。2010 年；397(8)：3173-8。7. Rols MP。《电通透化：一种将治疗分子递送到细胞中的物理方法》。《生物化学与生物物理学报》（BBA）-生物膜。2006 年 3 月；1758(3)：423-8。8. Jordan ET、Collins M、Terefe J、Ugozzoli L、Rubio T。《优化原代细胞和其他难以转染的细胞中的电穿孔条件》。《生物分子技术杂志》。2008 年； 9. Chicaybam L、Barcelos C、Peixoto B、Carneiro M、Limia CG、Redondo P 等人。一种用于哺乳动物细胞遗传改造的有效电穿孔方案。生物工程与生物技术前沿。2016；4：99。10. Machy P、Lewis F、McMillan L、Jonak ZL。通过电穿孔将基因从靶向脂质体转移到特定淋巴细胞。美国国家科学院院刊。2006；85(21)：8027-31。11. Maurisse R、De Semir D、Emamekhoo H、Bedayat B、Abdolmohammadi A、Parsi H 等人。将 DNA 转染到来自不同谱系的原代和转化哺乳动物细胞中的比较。BMC 生物技术。2010；10。 12. Gahn TA、Sugden B. 电穿孔显著、短暂抑制伯基特淋巴瘤细胞系中 Epstein-Barr 病毒潜伏膜蛋白基因的表达。J Virol。1993；67(11)：6379-86。13. Goldstein S、Fordis CM、Howard BH。电穿孔 G2/M 同步细胞并用丁酸钠处理后，转染效率提高，细胞存活率提高。Nucleic Acids Research。1989；17(10)：3959-71。14. Liew A、André FM、Lesueur LL、De Ménorval MA、O'Brien T、Mir LM。使用方波电脉冲对人类间充质干细胞进行可靠、高效、实用的电基因转移方法。人类基因治疗方法。2013 年 10 月；24(5)：289-97。 15. Kreiss P, Cameron B, Rangara R, Mailhe P, Aguerre-Charriol O, Airiau M 等。质粒 DNA 大小不影响脂质体的理化性质，但可调节基因转移效率。核酸研究。1999；27(19)：3792-8。16. Lesueur LL, Mir LM, André FM。克服体外原代细胞大质粒电转移的特殊毒性。分子疗法 - 核酸。2016；5：e291。17. Germini D、Saada YB、Tsfasman T、Osina K、Robin CC、Lomov N 等人。基于一步法 PCR 的检测方法用于评估基因组 DNA 编辑工具的效率和精度。分子疗法 - 方法与临床开发。2017 年 6 月；5（六月）：43-50。18. Georgakilas AG、Martin OA、Bonner WM。p21：双面基因组守护者。分子医学趋势。2017 年 4 月；23（4）：310-9。
海报会话-CS3
主持人标题p1 sara lumbreras一种支持传播扩展计划P2 Bruno boraretto的复杂网络方法的一种爆炸性同步的机制：拓扑结构P3雅各布计费的影响雅各布计费是一种概率的方法，一种通过迁移模式和跨性别分析的分析方式，通过脉动分析的and脉 - Zoequeal pep4 pectiantial-demantiant pece e and iantiant pera thistrianci Forces in Multipolar Social Systems P5 Irene Sendiña Nadal Anticipating explosive synchronization with ordinal methods P6 Federico Pablo-Martí BEACON-FCM: Behavioral Economics and Cognitive Network Mapping for Complex Analysis P7 Raul Toral Biased versus unbiased methods for stochastic simulations P8 Alvaro Corral Bifurcations at Finite Times: Universal Scaling Behavior P9 Bruno Boaretto Characterizing the混沌激光器通过使用序数分析和机器学习P10JoséManuelGalánOrdax合作动态在不必要的风险环境中的尖峰时间：一种基于代理的建模方法P11 LUIS IGNACIO DINISVIZCAIíno是否会关心非现实有效性？