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肌遗传学寡脱氧核苷酸诱导鼠多能干细胞的心肌分化
1林申大学科学技术研究生院农业部，8304 Minami-Minowa，Kami-Ina，Nagano，Nagano 399-4598，日本； 19as101k@shinshu-u.ac.jp（M.I.）; shimot@shinshu-u.ac.jp（T.S.）2个蜂窝和分子生物技术研究所，美国国家先进工业科学技术研究所，中部5-41，1-1-1 Higashi，Tsukuba，Tsukuba 305-8565，日本伊巴拉基； y-nihashi@aist.go.jp 3 Shizuoka大学药学学院分子医学系，日本Shizuoka 422-8526，Suruga-Ku 52-1 Yada，52-1 Yada； y.sunagawa@u-shizuoka-ken.ac.jp（y.s.）; morimoto@u-shizuoka-ken.ac.jp（t.m。）4农业学院农业和生命科学系，新月大学，8304 Minami-Minowa，Kami-Ina，Nagano，Nagano 399-4598，日本； koume@shinshu-u.ac.jp（k.u. ）; kagami@shinshu-u.ac.jp（H.K.） 5生物医学科学研究所生物分子创新系，新月大学8304 Minami-Minowa，Kami-Ina，Nagano，Nagano 399-4598，日本 *通信：4农业学院农业和生命科学系，新月大学，8304 Minami-Minowa，Kami-Ina，Nagano，Nagano 399-4598，日本； koume@shinshu-u.ac.jp（k.u.）; kagami@shinshu-u.ac.jp（H.K.）5生物医学科学研究所生物分子创新系，新月大学8304 Minami-Minowa，Kami-Ina，Nagano，Nagano 399-4598，日本 *通信：
Mixl1激活人类诱导多能干细胞的内胚层分化
In the present study, we investigated the propensity of endoderm differentiation of eleven lines 44 of four sets of hiPSCs, each of which was derived from an independent cellular source, by 45 tracking the differentiation from pluripotent cells to definitive endoderm (DE), hepatocytes and 46 intestinal organoids (hIO).我们表明，在这些HIPSC中，早期激活和高水平的47 Mixl1活性与内胚层分化的倾向增强有关。在48个小鼠胚胎中，Mixl1在原始条纹中表达，并且在49胃期间的新生中胚层表达，表达持续存在于早期 - 粒石阶段胚胎28,29的原始条纹中。50 Mixl1功能的丧失与DE的缺乏以及在原始条纹30处出现后不久的51个中胚层的局部隔离有关。在小鼠胚胎52干细胞中，混合1的功能的丧失导致侧向中胚层组织53和造血谱系31的效率微不足道，而本构型混合L1活性则促进了54 FOXA2+/ECAD+ DE细胞的分化。在小鼠层状干细胞中，在55个分化的早期阶段激活MixL1与有效的内胚层分化28相关。对分子56 DE分化属性的分析表明，HIPSC 57分化的早期Mixl1的活性促进了MicroPATTERNS中FOXA2+/SOX17+ DE细胞的分化33。61我们58进一步表明，HIPSC中Mixl1的增强表达增强了内胚层倾向，59为如何重新连接谱系倾向提供了新的学习，以生成拟合拟合的方法，以生成拟合的60多能干细胞以进行翻译。
诱导多能干细胞的新兴作用作为产卵性细胞免疫疗法
简单摘要：使用专门的免疫细胞（例如嵌合抗原受体T-细胞（CAR-TS），肿瘤插入淋巴细胞（TILS）和病毒 - 培养基 - 遗传 - 塞子菌（Virus-Specifififififififififif）），采用了一种创新的细胞疗法（ACT）来打击癌症和传染病的创新方法。这种疗法是为每个患者单独制造的，可能会受到细胞质量差的负面影响，这些疗法通常会受到先前治疗，年龄和复杂制造的损害。为了克服这一点，该领域正在评估创建“拟合”供体的细胞疗法的潜力，以提供现成的治疗选择。诱导的多能细胞（IPSC）具有可再生的特征，并为现成的治疗提供了解决方案。iPSC可以用作无限的来源，用于推导不同的免疫细胞，包括天然杀伤（NK）细胞和T细胞。IPSC可以进一步修改并使用不同的行为。在这篇综述中，我们描述了从IPSC产生此类细胞疗法的方法，并讨论了当前的进步和挑战，重点是CAR-T/NK-，TIL-和VST疗法。
鉴定多能胚胎干细胞生物学的钥匙细胞 - 细胞相互作用
上下文细胞间交流对于多细胞生物的发展和维护至关重要。最近的研究强调了哺乳动物胚胎中胚外细胞（滋养剂和低纤维细胞）和多能胚胎细胞（epiblast）之间通信的重要性[1,2,3]。具体而言，由小细胞产生的细胞外基质在控制多脂蛋白层状干细胞的细胞增殖中起关键作用。我们对猪胚胎干细胞的研究已经证实了细胞外基质在影响调节层细胞多能性的信号通路和转录因子中的重要性[4]。我们最原始的观察结果之一依赖于四叠蛋白CD9，CD81和CD63表达的检测主要是在滋养剂中（未发表）。这些四翼烷蛋白是细胞外囊泡（EV）的已知标记，它们是各种细胞类型的小脂质囊泡[5]。evs参与将信号蛋白，细胞因子和转录因子转运到受体细胞，影响各种过程，包括免疫反应，肿瘤进展和胚胎发育[6,7]。尽管已经在小鼠胚胎中研究了胚胎和胚外细胞之间的EV介导的细胞对细胞通信，但焦点主要是由小鼠多能干细胞分泌的电动汽车[8,9]。这项研究旨在研究EVS在促进交流和影响这些细胞类型的生物学的促进性滋养剂细胞和多能细胞分泌的电动汽车的作用。这项研究由ANR STEM4PIGS（2025-2028）资助，并将支持从2025年9月开始的博士生。
建立 GPR146 敲除人类诱导多能干细胞系 (ITXi001-A-1)
动脉粥样硬化性心血管疾病 (ASCVD) 仍然是全球最大的死亡原因 2 。血脂异常是与 ASCVD 发展有关的一个关键的可改变的因果风险因素。最近，G 蛋白偶联受体家族的成员 G 蛋白偶联受体 146 (GPR146) 被证明是血浆胆固醇的调节剂 3,4 。GPR146 在小鼠体内的肝脏抑制已显示出良好的特性，它对高胆固醇血症和动脉粥样硬化具有保护作用，这种作用独立于低密度脂蛋白受体 (LDLR) 通路 3 。为了更好地理解所涉及的生物学机制，我们开发了一种先进的基因工程人类诱导多能干细胞 (hiPSC) 模型，该模型因 GPR146 而无效。 GPR146 -/- 细胞系 (ITXi001-A-1) 源自我们实验室先前从尿液祖细胞 (ITXi001-A) 1 中重新编程的对照 hiPSC 的基因组版本。基因组版本使用 Alt-R™ CRISPR-Cas9 系统 (Integrated DNA Technologies) 进行，针对两个等位基因上的 GPR146 外显子 2。ITXi001-A-1 是通过挑选单个菌落建立的，其基因型通过 PCR 筛选 (图 1A - 上图和下图) 并通过 Sanger 测序确认 (图 1B)。我们进一步表明，GPR146 基因的遗传版本不会诱导基因组的脱靶版本（筛选 10 个预测位点 - （补充文件 3A）），也不会诱导 ITXi001-A-1 细胞的基因组完整性（分析 24 个拷贝数变异）（补充文件 1）。我们验证了 ITXi001-A-1 细胞不含支原体（补充文件 3B），并且它们与最初采集的尿液细胞来自同一个体（16 个 STR 的亲子鉴定 - 补充文件 2）。总体而言，ITXi001-A-1 细胞呈现：I- 与 ITXi001-A 细胞相比具有相似的形态（图 1C）II- 多能性标志物的阳性表达（通过 OCT3/4 和 TRA-1–60 的免疫荧光染色检测）（图 1D）。 III- 多能性细胞表面标志表达阳性（流式细胞术检测 SSEA-4 和 TRA1-60）（图 1E）。IV- 多能性标志物的表达水平与 ITXi001-A 细胞相同（NANOG、POU5F1 和 SOX2 - 通过 RT-qPCR 测量）（图 1F）。V- 具有优异的分化为中胚层、内胚层和外胚层的能力（通过 SOX17 和 FOXA2（中胚层）；T(TBXT) 和 HAND1（内胚层）以及 PAX6 和 SOX1（外胚层）的 RT-qPCR 评估，与 ITXi001-A 细胞相似）（图 1G）。
利用 CRISPR 在人类诱导性多能干细胞中进行有效的双等位基因标记
注：同源臂位于敲入位点上游和下游约 500–1,000 bp 处。图 1 C 为 SIN3A 示例的供体载体示意图。为选取基因组区域作为同源臂，我们使用 Primer-BLAST ( https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/ ) 设计了两对引物，分别位于 SIN3A 终止密码子上游 500–1,000 bp 处和下游 500–1,000 bp 处。也可以使用其他程序设计引物。正向和反向引物之间的区域用作同源臂。我们选择 SIN3A 终止密码子上游 501 bp 序列作为左同源臂（图 2 A 和 2B 中的 SIN3A 左），并选择 SIN3A 终止密码子下游 612 bp 序列作为右同源臂（图 2 A 和 2B 中的 SIN3A 右）。
从人多能干细胞中产生3D富集腺体器官
眼表面（眼表面）由角膜和结膜组成，泪液层的存在对于眼表面的体内平衡性是造成的。泪液层主要通过泪腺的泪液和粘蛋白分泌来维持，但是当泪腺受到自身免疫性疾病（例如Sjögren's综合征）的损伤时，Ocular表面会变干，导致严重干眼。我们的研究小组以前已经成功地从人IPS细胞中产生了角膜和结膜，但是尚未报道lim腺的产生。指出角膜，结苏和泪腺具有相同的发育起源，因此我们应用了先前用于诱导角膜和结膜的二维眼器官（命名为Seam），并新试图诱使富集心腺。首先，我们发现泪腺样细胞簇出现在IPS细胞衍生的接缝中，并通过在Matrigel中进行3D培养物，成功地产生了3D泪腺类器官。
人类多能干细胞的碱基编辑用于模拟长 QT 综合征
规则，必须为20nt+PAM形式，突变位点在sgRNA编辑窗口2-8内，获得符合基因编辑条件的治疗靶点。为避免基因编辑过程中的旁观者编辑，我们建议仅对sgRNA编辑窗口2-8内的一个突变位点进行编辑。其他数据库如ClinVar（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/）也是推荐的。