XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemQPCR
在近乎异构的易感和抗性番茄线中，对参考基因进行定量实时PCR研究的选择和验证，并感染了Geminivivirus tomato tomato tomato curly卷曲特技病毒
定量实时PCR（QPCR）是一种敏感且常用的基因表达分析技术，并提供了对生物系统的见解。成功的QPCR需要使用适当的参考基因来进行数据归一化。在本研究中，我们旨在识别和评估近乎异构抗性（R）和易感的（S）番茄线中最佳的参考基因感染了begomovirus番茄卷曲卷曲特技病毒（TOCSV）。十个候选参考基因，即Actin7（ACT），β-6微管蛋白（TUB），ubiqui-3（UBI），网格蛋白辅助络合物中等亚基（CAC），植物苯乙烯去饱和酶（PDS），表达蛋白质（Exp），表达蛋白（Exp），糖 - 3-氢酶（Gap）dehyhydyhyhyhyhyhyhyhyhyhyddroplhats gaplospy（Gap）（Gap）（Gap）（Gap）（磷酸化磷酸化酶（Gap））（Gaps）（磷酸化磷酸化酶（Gap））（Gaps）（磷酸化磷酸化酶（Gap））（磷酸化磷酸化酶（Gap））（磷酸化磷酸磷酶）选择磷酸贝素转移酶样蛋白（APT1），TAP42相互作用蛋白（TIP41）和伸长因子1-α（EF1α）（EF1α），并评估其在耐药性和易感番茄叶中使用分析性工具，Normfin-der，Normfin-der，BestEpeper和Reffinder和Reffindine的耐药性和敏感番茄叶片中的表达能力。在将参考基因从大多数到最不稳定进行排名之后，结果表明，在S系中，ACT，EXP和EF1α的组合以及R在R线中的TIP41，APT1和ACT的组合适用于QPCR归一化。此外，为了验证已鉴定的参考基因，超级氧化物歧化酶（SOD），热休克蛋白70（HSP70）和谷胱甘肽-S-转移酶（GST）的选择是作为TAR-获取归一化的。与最稳定的基因相比，针对最稳定的参考基因进行标准化时，靶基因的相对表达变化。这些结果强调了在QPCR研究中仔细选择参考基因以进行准确正常的重要性。
验证国际空间站的智能样品集中器用于低生物质水样品的微生物监测
国际空间站（ISS）上的微生物监测对于使宇航员保持健康至关重要。当前的实践涉及基于文化的方法，但是国家航空航天局（NASA）的未来指令将需要使用基于分子的方法，例如定量PCR（QPCR）。但是，为了成功，可靠地检测到5 3 10 4菌落形成单元（CFU）的允许极限，每升在ISS上使用QPCR在ISS上的饮用水中，必须首先进行水浓度。本报告介绍了NASA赞助的小型企业研究计划的验证研究，以开发与ISS上使用的微重力兼容，自动化的水集中器，该研究已被命名为ISS智能样本集中器（ISSC）。将ISSC的效率和可重复性与地面自动化水集中器和标准Millipore手动过滤进行比较。使用10 4 CFU/L的鞘氨拟母型Paucimobilis，Ralstonia pickettii和Cupriavidus basilensis和混合微生物群落，我们通过培养和QPCR表明，ISSC是可比较的，即使不是更好，如果不是更好，可以从大量的水中恢复和浓缩细菌，具有良好的水，可恢复能力。
LightCycler® 多重 DNA 主控
2. 如何使用本产品................................................................................................................................................5 2.1. 开始之前....................................................................................................................................................................5 样品材料...................................................................................................................................................................................5 对照反应...................................................................................................................................................................................5 引物...................................................................................................................................................................................................5 探针...................................................................................................................................................................................................5 Mg 2+ 浓度....................................................................................................................................................................................5 一般注意事项...................................................................................................................................................................5 注意事项...................................................................................................................................................................................5 2.2.协议................................................................................................................................................................................................................ 6 LightCycler ® PRO、LightCycler ® 480 和 LightCycler ® 96 系统协议........................................................................ 6 LightCycler ® PRO 系统（多孔板 96 或 384）的使用协议......................................................................... 6 LightCycler ® 480 仪器 II（多孔板 96 或 384）的使用协议......................................................................... 7 LightCycler ® 96 仪器的使用协议.........................................................................................................................10 LightCycler ® PRO、LightCycler ® 480 和 LightCycler ® 96 仪器的 qPCR 反应设置.............................................................................................11 LightCycler ® 2.0 仪器的使用协议.........................................................................................................................12 LightCycler ® 2.0 仪器的 qPCR 反应设置仪器.................................................................................................15
QuantStudio Absolute Q 数字 PCR 系统
图 1. 数字 PCR 工作流程概述。对于 QuantStudio Absolute Q 系统，dPCR 反应混合物的制备与 qPCR 反应混合物的制备几乎相同。dPCR 和 qPCR 之间的两个主要区别是：(i) 将批量反应混合物分离成数千个单独的微反应，以及 (ii) 基于终点的检测，将微反应分类为目标的阳性或阴性，从而通过应用泊松统计实现直接目标量化。对于 QuantStudio Absolute Q 系统，仪器会自动将反应混合物分离到微室中，进行热循环并收集荧光信号，所有步骤之间都无需用户干预。
对整合过程控制的海洋样品的细菌DNA提取方法的评估
要通过分子方法研究海洋环境中的微生物群落，重要的是要以足够的量和纯度提取DNA。样品中抑制剂的存在可能导致虚假的阴性结果或信息丢失，但可以通过实验中的过程控制来突出显示。我们比较了海洋样品上的七种细菌DNA提取方法：鱼皮，g和胆量，软体动物肉，浮游植物和浮游动物。在一半的样品中添加了一个过程控制（单核细胞增生李斯特菌）。比较了DNA提取方法的性能，以产生针对细菌TUF基因和过程控制Hlya基因的QPCR扩增的更纯和浓缩的DNA。通过分光光度法测定测定DNA的纯度和浓度。结果表明，使用PowerBiofilm和Purelink微生物组试剂盒获得了最高纯度和浓度DNA。QPCR数据证实了这些试剂盒以更高的扩增效率产生了更好的细菌DNA纯度和浓度。在某些样品中，通过靶向Hlya基因的QPCR检测到抑制剂的存在，表明样品是被抑制剂污染的异质性。DNA提取物适用于海洋环境中的遗传下游应用。
通过农杆菌介导的基因转移获得的编辑植物的分子表征综合方法
摘要 农杆菌介导的基因转移——实际上是基因改造植物最常用的方法——可能导致植物基因组中整合多个 T-DNA 拷贝，以及形成由改造细胞和野生型细胞组成的嵌合组织。因此，对转化株系进行分子表征是一种很好的做法，可以选出最好的株系进行进一步研究。如今，有几种定量和半定量技术可用于估计转基因植物中 T-DNA 的拷贝数 (CN)。在本研究中，我们比较了基于 (1) 实时聚合酶链式反应 (qPCR)、(2) 液滴数字 PCR (ddPCR) 和 (3) 下一代测序 (NGS) 的三种方法，对葡萄编辑株系进行分子表征。这些株系含有通过 CRISPR/Cas9 技术获得的敲除突变，该突变与植物对两种重要的葡萄霉菌病的易感性有关。根据我们的结果，qPCR 和 ddPCR 的输出在准确性方面基本一致，尤其是对于低 CN 值，而 ddPCR 的结果比 qPCR 更精确。关于 NGS 分析，用这种方法检测到的 CN 通常与 qPCR 和 ddPCR 计算的 CN 不一致，并且 NGS 无法区分十个品系中的三个的整合点。尽管如此，NGS 方法可以肯定地识别 T-DNA 截断或串联/倒置重复的存在，从而提供有关转基因整合资产的独特和相关信息。此外，Cas9 和单向导 RNA (sgRNA) 的表达分析以及靶位点的测序增加了与 CN 数据相关的新信息。这项工作通过报告葡萄编辑品系的实际案例研究，探讨了最先进的诊断技术在早期选择合适的转基因材料方面的优缺点。结果可能对开发新转基因品系的科学家和负责转基因控制的实验室都感兴趣。
1型糖尿病的儿童和青少年的地中海饮食依从性和血糖控制介导的植物免疫
了解CNC@PDA@Zn 2+诱导的NSLTP2定位变化的功能意义，我们测试了NSLTP2的抗病毒功能。虽然NBLTP1在TMV感染中的作用得到很好的特征，但我们系统地探索了NSLTP2在TMV感染中的作用。应力表达分析表明，在2 dpi的接种叶中，NSLTP2的表达与TMV-GFP显着增加，其表达在6 dpi的全身性叶片中也显着升高（图S7），这表明NSLTP2在抗病毒防御中的潜在作用。接下来，我们利用烟草病毒（TRV） - 介导的基因沉默来分析NSLTP2在TMV抗性中的作用。随后，本尼亚氏菌叶具有TRV1 + TRV2（TRV：00）或TRV1 + TRV2：NSLTP2：NSLTP2（TRV：NSLTP2）12天，RT- qPCR分析显示，NSLTP2在TRV中的NSLTP2表达显着 5b）。 然后，我们用TMV-GFP机械地接种了第6和7叶，并观察到在2、4和6 DPI下紫外线下的GFP运动以跟踪TMV分布。 如图所示 5A，在接种叶片的接种叶片中观察到GFP荧光信号，而QPCR分析表明，沉默的植物中TMV-GFP核酸水平明显高于对照组（图5b）。然后，我们用TMV-GFP机械地接种了第6和7叶，并观察到在2、4和6 DPI下紫外线下的GFP运动以跟踪TMV分布。如图5A，在接种叶片的接种叶片中观察到GFP荧光信号，而QPCR分析表明，沉默的植物中TMV-GFP核酸水平明显高于对照组（图5C）。 在4 DPI时，GFP信号出现在沉默的植物的全身叶子中，而在控制植物的全身叶子中未检测到GFP信号。病毒核酸的QPCR分析产生了相似的结果（图 5d）。 5e）。5C）。在4 DPI时，GFP信号出现在沉默的植物的全身叶子中，而在控制植物的全身叶子中未检测到GFP信号。病毒核酸的QPCR分析产生了相似的结果（图5d）。5e）。通过6 DPI，GFP信号在沉默的植物中更为明显，TMV-GFP在其全身叶片中显着积累（图这些结果表明NSLTP2沉默促进了TMV-GFP感染。随后，我们比较了
验证验证 - pcr--gay-for-for-for-tection-and-...
摘要：枯萎综合征（WS）是一种严重的影响鲍鱼haliotis spp。的疾病，是由细胞内人力体类似生物体（WS -RLO）感染引起的。疾病的诊断通常依赖于组织学检查和分子方法的组合（原位杂交，标准PCR和序列分析）。但是，这些技术仅提供对细菌负荷的半定量评估。我们创建了一个实时定量PCR（QPCR）测定法，以根据16S rDNA基因拷贝数识别和枚举鲍鱼组织，粪便和海水样品中WS-RLO的细菌载荷。旨在检测WS-RLO DNA的QPCR分析是根据世界动物健康组织设定的标准验证的。从纯化的质粒稀释液中得出的标准曲线是在7个浓度对数中线性的，效率为90.2％至97.4％。每个反应的检测极限为3个基因拷贝。诊断灵敏度为100％，特异性为99.8％。QPCR分析是巨大的，其高度可重复性和可重现性证明了这一点。这项研究首次表明可以在鲍鱼组织，粪便和海水样品中检测和定量WS-RLO DNA。在各种材料中检测和量化RLO基因拷贝拷贝的能力将使我们能够更好地了解养殖和自然环境中的传输动力学。