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为了分析有丝分裂过程中细胞结构的分析,需要纳米分辨率来可视化纺锤体中微管的组织。在这里,我们提出了一种详细的方案,可用于在培养物中生长的细胞中整个有丝分裂纺锤体的3D重建。为此,我们将富含有丝分裂阶段的哺乳动物细胞附着在蓝宝石盘上。我们的协议进一步涉及通过高压冻结,冻结固定和树脂嵌入的冷冻污染。然后,我们使用荧光光学显微镜在树脂包裹的样品中选择有丝分裂细胞。接下来是大规模电子断层扫描,以重建3D中所选的有丝分裂纺锤体。然后,生成和缝合的电子断层图用于半自动分段微管,以进行纺锤体组织的随后定量分析。因此,通过提供详细的相关光和电子显微镜(CLEM)方法,我们为细胞生物学家提供了一种工具集来简化纺锤体微管的3D可视化和分析(http://kiewisz.shinyapps.io/asga)。此外,我们指的是一个最近启动的平台,该平台允许交互式显示3D重建有丝分裂纺锤体(https://cfci.shinyapps.io/asga_3dviewer/)。
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1单元IBD,CEMAD,遥远地区,国际医学和Gasstranterology,医学科学和Chirurgic Sciences,资助大学政策“ A. irccs,L。Go A. Gief 8,00168罗马,意大利; latusloris@gmail.com(l.r.l.r.l );光泽。 ); wortsy.betoty@nats。 ); syllable.pecer@polyclines.it(S.P. ); pgpuca@gpoke.com(p.p. ); helis.sscouvotonum@polyclinicles.it(E.S. ); giveElele.napoliaum@polyclinical.it(D.N. );给它。 ); Anony.gsbarrinium@nats.it(A.G.)2医学和艾滋病科学系,“ G。 公告” Chieti-Pescara大学,66100 Chiets,意大利3号高级研究与技术中心(CAST),” G。 公告” Chieti-pescara大学,66100个Chiets,意大利4药物和traslational Schools,大学,Caree Custerms,L。Go F. F. F. F. Little 1,0016 Rome,0016 Rome,0016 Rome,0016 Rome,0016 Romes(Gg。 ); Youth.camcrat@nat.it(G.C。) <2 5 5微生物学,大学政策基金会‘A. ICCS,Caree Sacred University,意大利罗马00168; gianluca.perty@polyclinical。 ); maurice.sanguines@polyclinicles.it(M.S. ); light.mafes@polyclinical.it(l.m.)1单元IBD,CEMAD,遥远地区,国际医学和Gasstranterology,医学科学和Chirurgic Sciences,资助大学政策“ A.irccs,L。Go A. Gief 8,00168罗马,意大利; latusloris@gmail.com(l.r.l.r.l);光泽。); wortsy.betoty@nats。); syllable.pecer@polyclines.it(S.P.); pgpuca@gpoke.com(p.p.); helis.sscouvotonum@polyclinicles.it(E.S.); giveElele.napoliaum@polyclinical.it(D.N.);给它。); Anony.gsbarrinium@nats.it(A.G.)2医学和艾滋病科学系,“ G。公告” Chieti-Pescara大学,66100 Chiets,意大利3号高级研究与技术中心(CAST),” G。公告” Chieti-pescara大学,66100个Chiets,意大利4药物和traslational Schools,大学,Caree Custerms,L。Go F. F. F. F. Little 1,0016 Rome,0016 Rome,0016 Rome,0016 Rome,0016 Romes(Gg。); Youth.camcrat@nat.it(G.C。)<2 5 5微生物学,大学政策基金会‘A.ICCS,Caree Sacred University,意大利罗马00168; gianluca.perty@polyclinical。); maurice.sanguines@polyclinicles.it(M.S.); light.mafes@polyclinical.it(l.m.)6人类微生物组的单位,班比诺GESù儿童医院,IRCCS,00168,意大利罗马; federica.delchierico@opbg.net 7卫生科,大学生命科学系和公共卫生,Cattolica del Sacro Cuore大学,意大利00168,意大利00168; andreaposcia@yahoo.com 8 UOC ISP预防和监视感染和慢性疾病,预防局,地方卫生局(ASUR-AV2),60035 JESI,意大利90035 9 UOC DI GASTROENTEROLOGIA,FONDAZIONE POLICINICO INRICOTIOGemelli” IRCCS, L. Go A. Gemelli 8, 00168 Rome, Italy 10 Unit of Microbiomics and Unit of Human Microbiome, Bambino Ges ù Children's Hospital, IRCCS, 00168 Rome, Italy; lorenza.putignani@opbg.net 11 IBD Center, IRCCS Humanitas Research Hospital, Rozzano, 20089 Milan,意大利; Alessandro.armuzzi@unicatt.it *通信:franco.scaldaferri@policlinicogemelli.it或franco.scaldaferri@unicatt.it
简介:出生的孩子(副总裁)仍然有神经发育障碍的风险。大脑生长和损伤的模式,以及如何缓解VP婴儿的发育风险的早期神经瘤疗法如何保持不足。方法:这是对妊娠32周之前/之前出生的VP婴儿的前瞻性队列研究。该研究将在III级NICU中招募n = 75个连续出生的VP婴儿。暴露的婴儿将根据注册早期脑磁共振成像(MRI)的神经损伤程度分为两组(第1组:低风险,n = 25或第2组:高风险,n = 25)。婴儿中的在不明显的伤害下定义为脑室内出血,随着扩张,中度或重度白质损伤或小脑出血而受到神经发育的影响,可以利用更多的NICU感官体验(感觉),同时获得了更多的NICU SENSIDENT(同时),同时获得了更多的NICUS型群体(同时)支持(Sense-Plus)。 特定年龄的,量身定制的感官体验将由婴儿的NICU员工的教练提供促进的,优先的,优先。 暴露组中的 VP婴儿将每2周从入学人数到期限等效,以监测脑生长和损伤的演变。 将与参考组(第3组:n = 25)进行比较,即 VP婴儿的家庭在有意义的最初入学率下降,随后出于其他目的而经历了术语等效的大脑MRI。在不明显的伤害下定义为脑室内出血,随着扩张,中度或重度白质损伤或小脑出血而受到神经发育的影响,可以利用更多的NICU感官体验(感觉),同时获得了更多的NICU SENSIDENT(同时),同时获得了更多的NICUS型群体(同时)支持(Sense-Plus)。特定年龄的,量身定制的感官体验将由婴儿的NICU员工的教练提供促进的,优先的,优先。VP婴儿将每2周从入学人数到期限等效,以监测脑生长和损伤的演变。将与参考组(第3组:n = 25)进行比较,即VP婴儿的家庭在有意义的最初入学率下降,随后出于其他目的而经历了术语等效的大脑MRI。这项研究的主要目的是与接受护理标准的VP婴儿相比,接受了基于NICU的神经多性干预措施的VP婴儿的学期等效脑生长和发育表征。次要目的包括定义与Total