A部分 - 生物素化模板是通过质粒或合成DNA构建体中靶序列的PCR扩增产生的。此过程使用T7启动子上游至少30-100个碱基对的生物素化正向引物和非生物素化的反向引物。在设计QPCR分析以评估模板浸出时,T7启动子和正向引物之间的距离更大。另外,可以使用Biotin-DUTP在5'悬垂序列中通过填充填充物进行生物素化,这取决于正确的质粒设计。然后将生物素化模板直接固定到dynabeads
摘要:土壤盐分抑制作物发芽和幼苗生长,导致作物立地不均、生长不均匀、产量低下。本研究旨在评估接种从盐渍土中分离的植物生长促进细菌 (PGPB) 菌株 (E1 和 T7) 的十字花科种子的早期耐盐性。在对照和盐度条件下培养未接种和接种的 Lobularia maritima、Sinapis alba 和 Brassica napus 种子,首先在琼脂平板中评估每种盐的发芽抑制浓度,然后在用含有 0 或 75 mM NaCl 的水灌溉的土壤中培养。我们的结果表明,T7 是唯一能够在盐渍条件下增加 L. maritima 发芽的菌株。然而,接种 T7 的 L. maritima 和 S. alba 植物以及接种 E1 的 B. napus 植物的茎生物量、根长和分枝数均有所增加。同时,这些幼苗表现出较少的氧化损伤和更强的平衡植物活性氧生成的能力。这项研究表明,用耐盐 PGPB 菌株接种种子是一种适合在早期阶段改善盐度负面影响的策略。尽管如此,观察到的特定植物-宿主相互作用凸显了针对特定不利环境条件建立定制的 PGPB-作物关联的必要性。
摘要:对肿瘤细胞的选择性不佳是抗肿瘤药物阿霉素(DOX)临床应用中的主要缺点。肽 - 药物结合物(PDC)通过用肽配体修饰抗肿瘤药物构建的肽配体对肿瘤细胞中某些过表达的受体具有很高的亲和力,从而越来越多地评估其肿瘤选择性药物递送的可能性。然而,由天然L-配置氨基酸组成的肽配体具有易于酶促降解和生物稳定性不足的缺陷。在这项研究中,设计和合成了两个新的PDC(L T7-SS-DOX和D T7- SS-DOX),通过结合转铁蛋白受体(TFR)肽配体L T7(HAIYPRH)及其retro-Inverso Inverso Analog DT7(Hrpyiah),并通过Dox a Diss a Diss nongulfide ncterulfide nicker inclulffide ncterne合成。与游离DOX相比,两个结合物对TFR过表达的肿瘤细胞表现出靶向的抗增生作用,对TFR低表达的正常细胞的毒性很少。此外,与L T7-SS-Dox相比,D T7-SS-dox结合物具有更高的血清稳定性,更持续减少的药物释放特性和更强的体外抗脂肪性活性。总而言之,抗肿瘤药物与D T7肽配体的偶联可以用作进一步发展稳定和有效的PDC的有前途的策略,并有可能促进TFR靶向的药物递送。
pis:A。PAPA(PSI/UNI PISA),P。Stooffer(UZH/PSI),P。Schmidt-Wellenburg(PSI),A。Signer(PSI/UZH)连接的项目:T1,A A A。
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简介 墨西哥利什曼原虫是一种可感染人类的单细胞真核生物,是引起利什曼病的物种之一。由于其毒性较低(引起皮肤利什曼病而非内脏利什曼病)并且能够在适当的无菌培养中容易分化为无鞭毛体形式,它通常被用作分子细胞生物学的模型利什曼原虫物种。我们之前曾描述过表达 Cas9 和 T7 RNA 聚合酶的转基因墨西哥利什曼原虫 MNYC/BZ/62/M379 的生成,该菌株可进行快速反向遗传修饰 1 。由于这不是参考基因组菌株(参考基因组菌株为 MHOM/GT/2001/U1103) 2 并且可能在实验室培养和/或 Cas9 或 T7 表达的选择压力下积累了突变,因此我们对这种广泛使用的菌株的基因组进行了测序,作为设计反向遗传策略的高质量参考。
图1。PSUPER-BRG1 siRNA表达质粒的序列分析。(a)大写字母指示DNA插入物的顺序,下部案例字母表示来自psuper载体的侧翼序列。打开箭头标记倒重复序列。一个BSMB I识别站点(盒装)将裂解在中间的“环”区域内用箭头指示的位置。填充箭头指示使用T7和T3引物进行测序反应的方向。(b)使用T7和T3-primers的未消除PSUPER-BRG1质粒的DNA测序色谱图。(c)用BSMB I消化后PSUPER-BRG1质粒的DNA测序色谱图(d)DNA二级结构预计会在siRNA编码区域内发生,这是由于倒置重复序列的序列互补性。测序反应过早终止的位置用开放箭头指示。实心箭头表示用BSMB I消化后的模板末端测序反应的径流终止。
测试完成的结果T1-海拔模拟通道T2-热测试通道T3-振动Pass T4-冲击通道T5-外部短路通行T6-撞击/压碎通行证* T7- t7-付费通行证T8-强制放电通行证*
