仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2022,2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明,否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。eppendorf是Eppendorf AG的商标。agilent,Tapestation和Screentape是Agilent Technologies,Inc。Taqman是Roche Molecular Systems,Inc。的商标。APN-8148723 0724
©2024 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。除非另有说明,所有商标均为 Thermo Fisher Scientific 及其子公司的财产。TaqMan 是 Roche Molecular Systems, Inc. 的商标,经许可和授权使用。IDT 和 gBlocks 是 Integrated DNA Technologies, Inc. 的商标。Twist Bioscience 是 Twist Bioscience Corporation 的商标。ZeptoMetrix 是 ZeptoMetrix Corporation 的商标。
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明,否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems,Inc。的商标。ext6771 0424
支原体Synoviae(MS)是家禽行业中经济上重要的病原体。疫苗接种是预防和控制MS感染的有效方法。目前可获得两种活体减毒MS疫苗,即温度敏感的MS-H疫苗菌株和NAD独立的MS1疫苗菌株。疫苗菌株与野生型(WT)菌株的分化对于监测MS感染至关重要,尤其是在疫苗接种后。在这项研究中,我们开发了一种Taqman双链实时聚合酶链反应(PCR)方法,以鉴定来自WT菌株的MS1疫苗菌株。该方法是特异性的,并且没有与其他禽病原体交叉反应。灵敏度分析表明,在双工实时PCR中,探针或混合模板和纯模板之间没有抑制作用。与基于熔体的不匹配扩增突变测定(MAMA)相比,我们的方法更敏感和快速。总而言之,Taqman双工实时PCR方法是单个反应中WT-MS和MS1疫苗菌株的诊断和分化的有用方法。
Applied Biosystems QuantStudio TM 5 Real-Time PCR System 鑑別試驗用 5 µM 引子 F .......................................................................................... 1.0 µL 5 µM 引子 R ......................................................................................... 1.0 µL 3.3 µM 探針 P ........................................................................................................................................................................................................................................... ............................................................................................... 20.0 µL 註 3 : Real-time PCR 溶液應於冰浴中配製。 2.6.检体DNA溶液之制备2.6.1。分离菌株之dna
使用 Prime Script 逆转录酶(Takara,日本)进行逆转录反应。使用 FastStart Essential DNA Probes Master(瑞士罗氏公司)和 QuantStudio 3 实时 PCR 系统(赛默飞世尔科技)进行定量 PCR(qPCR)。将每个基因的 mRNA 表达水平标准化为 Actb mRNA 的值。TaqMan 引物对和探针的序列描述如下:Actb:5'-FAMCCTGGCCTCACTGTCCACCTTCCA-TAMRA-3'(探针),5'- CCTGAGCGCAAGTACTCTGTGT-3'(正向引物),5'-CTGCTTGCTGATCCACATCTG-3'(反向引物); P2ry12:5'-/56-FAM/CCATGGATG/ZEN/TGCCTGGTGTCAACA/3IABkFQ/-3'(探针),5'- CCAGTCTGCAAGTTCCACTAAC-3'(正向引物),5'-GAGAAGGTGGTATTGGCTGAG-3'(反向引物);Igf1:5'-/56-FAM/TCCGGAAGC/ZEN/AACACTCACATCCACAA/3IABkFQ/-3'(探针),5'-
图 1. 两种 iPSC 系的干细胞表征示例。(A)TaqMan hPSC Scorecard Panel 将样本的基因表达谱与参考集的基因表达谱进行比较(分别为彩色点和灰色箱线图)。该检测使用超过 90 个基因和 13 个 PSC 的静态数据库进行比较。(B)PluriTest 检测使用微阵列数据根据多能性评分(反映多能性程度)和新颖性评分(反映分化程度)确认多能性标记表达。该检测使用超过 36,000 个转录本和超过 450 种细胞和组织类型的流体参考集进行比较。(C)KaryoStat+ 检测提供全基因组覆盖,可准确检测拷贝数变化和基因组畸变。
对 15 只确诊为 fHCM 的猫(11 只雄性,4 只雌性;平均年龄 8.93 岁)和 31 只对照猫(16 只幼年对照猫(8 只雄性,8 只雌性;平均年龄 1.5 岁)和 15 只成年对照猫(10 只雄性,5 只雌性))的心脏进行 RT-PCR,检测一系列表明心肌细胞功能适应和改变的标志物,在我们最近对第 1 组的 RNA 测序研究中检测到了这些标志物的上调。对于每个基因,建立了基于 TaqMan 的两步 RT-qPCR 方案。统计分析包括 Shapiro-Wilk 检验以检查正态性,以及对数变换以满足正态性假设。建立了包括组别和性别的主效应及其相互作用的方差分析模型。如果组别和性别的相互作用的 F 检验显著,则进行 Tukey 事后检验以进行成对比较。
图 1. 质粒 QC 工作流程说明。从过夜细菌培养物开始,可使用 KingFisher 系统纯化 DNA。为了精确测定数量,在进行后续步骤之前,通过限制性消化将纯化的 DNA 线性化。对于无液滴数字 PCR (dPCR) 定量,将线性化的 DNA 与 Applied Biosystems ™ TaqMan ™ 检测试剂混合,装入 Applied Biosystems ™ QuantStudio ™ Absolute Q ™ MAP16 板中,并在 QuantStudio Absolute Q 数字 PCR 系统上运行。为了验证质粒序列,使用 Applied Biosystems ™ BigDye ™ Terminator 循环测序试剂盒对线性化的 DNA 进行循环测序。然后在 CE 和分析之前使用 Applied Biosystems ™ BigDye XTerminator ™ 纯化试剂盒清理反应物。或者,使用 Applied Biosystems ™ BigDye ™ 直接循环测序试剂盒对 DNA 进行扩增和测序。在 CE 和分析之前,使用 BigDye XTerminator 纯化试剂盒清理这些反应。