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Epetraborole的体外活性，一种新型细菌亮氨基...
美国估计有200,000例NTM肺部疾病患者，许多人仍未诊断。案件数量估计每年增加8％。在美国诊断出患有NTM肺部疾病的大约55,000例患者中，大约44,000名患者患有MAC引起的肺部疾病，其中约35％患有治疗难治性的MAC肺疾病。由于需要多种药物方案的长期治疗，因此很难治疗这些感染。这种必需的治疗过程构成了患者不遵守，费用，潜在的药物相互作用，副作用和/或不良事件的挑战，耐药性的发展，劣质结果以及复发或再感染。eBO是一种含硼的，口服可用的小分子抑制剂的细菌亮氨基-TRNA合成酶，这是蛋白质合成1中必不可少的酶（图1）。EBO证明了针对NTM 2的有效活性。在这项研究中，我们评估了精选培养条件对EBO对MAC分离株的MIC测定的影响，以及阳离子调整后的Mueller Hinton Broth（CAMHB）对51个MAC分离株的影响。
开发体内和体外模型的痤疮逆转
基础层的另一个关键成分是黑色素，它会产生黑色素，保护人体免受紫外线的侵害，并给皮肤和/或其附属物（头发，羽毛，鳞片）的色素沉着。在人类中，黑素细胞位于基础层的干细胞之间，它们通常小于基础干细胞，但具有广泛的细胞质树突，延伸到颗粒层。每平方英尺的皮肤有大约1500个黑素细胞，与基础层干细胞的比例为1:10。人们可能认为皮肤色素沉着与黑素密度有关，但实际上与黑素细胞活性有关4,5。黑色素细胞的主要作用是黑色素或黑色素发生的产生，黑色素生成是eumelanin是人类中最丰富成员的色素蛋白家族。黑色素发生发生在黑色素体中，黑色素细胞的高度专业细胞器具有酸性内部。它始于氨基酸酪氨酸，该氨基酸酪氨酸被黑素细胞特异性酶转化为多季季酮：酪氨酸酶6。一旦Eumelanin成熟，它就会包装在黑色素体内。它们通过黑色素细胞细胞质扩展向上传播，直到它们被颗粒层7的角质形成细胞释放并占据。
鼻腔给药的体外解剖模型
摘要：几十年来，鼻腔给药一直用于治疗局部作用疾病。鼻子也是全身循环和中枢神经系统 (CNS) 的门户。在 SARS-CoV2 时代，用于接种疫苗和预防呼吸道疾病的鼻腔喷雾剂的开发正在增加。随着鼻腔给药应用数量的不断增长，鼻腔靶向区域沉积的作用已成为鼻腔药物开发的一个因素。鼻腔模型等体外工具有助于促进配方和产品开发。鼻腔沉积已被证明与药代动力学结果有关。了解复杂的鼻腔解剖结构和个体间差异可以更好地了解药物的沉积位置。鼻腔模型是人类鼻腔的复制品，已从尸体模型演变为复杂的 3D 打印复制品。它们可以分割成感兴趣的区域以量化沉积，并且已经使用不同的技术来量化沉积。将鼻腔模型程序纳入开发中有助于区分配方或物理形式，例如鼻腔粉末和液体。鼻腔模型还可以帮助制定患者使用说明，以确保药物沉积在目标沉积部位。但是，无论使用哪种技术，都应验证这种体外工具，以确保结果反映体内情况。计算机模拟、CFD 模拟或其他新发展在未来可能通过适当的验证，为当前的建模提供更多方法，尽管鼻腔解剖结构的复杂性和广泛变异性仍将是一个挑战。尽管如此，鼻腔解剖模型将成为提高对鼻腔药物输送理解的有效工具。
DNT 体外电池（SACATM 2024 演示）
披露：本研究由美国环境保护署资助。我没有利益冲突需要声明。这只是一个科学演示。本演示中提供的部分或全部数据可能是初步的，可能会发生变化。本演示不代表 EPA 政策，提及的产品或商品名不构成使用或认可的建议。请勿引用或引述本演示。照片由 CCTE 的 Thresa Freudenrich 拍摄
体外 CRISPR/CasRx 介导的 RNA 编辑方法
与使用 CRISPR/Cas 系统进行 DNA 操作不同，关于基于 CRISPR/Cas 的 RNA 修饰的文献严重缺乏。最近，科学家对 Cas13 酶进行了表征，并证明可编程 RNA 编辑在效率和特异性方面优于现有的 RNA 靶向方法（Abudayyeh 等人，2017 年；Cox 等人，2017 年；Liu 等人，2017 年；Konermann 等人，2018 年）。据报道，由于缺乏基因组改变，CRISPR/Cas13 也比现有的 CRISPR/Cas 系统更安全。2018 年，最小的 RNA 靶向 Cas 核酸酶 Cas13d 被描述。在 Cas13d 家族中，来自 Ruminococcus flavifaciens 的 CasRx（也称为 RfxCas13d）具有最高的 RNA 裂解活性和在人类细胞中的特异性。CasRx 的 RNA 靶向也比短发夹 RNA (shRNA) 干扰效果更好。重要的是，Cas13d 核酸酶可以处理 CRISPR 阵列，从而实现多重靶向（Konermann 等人，2018 年）。随后对 CasRx 的研究表明，在各种动物模型中可以有效地敲低信使 RNA (mRNA)，并在植物中实现转基因表达（Mahas 等人，2019 年；Kushawah 等人，2020 年）。值得注意的是，使用 AAV 载体在新生血管性年龄相关性黄斑变性 (nAMD) 小鼠模型中证明了 CRISPR/CasRx 的治疗潜力。 CRISPR/CasRx 系统的递送成功抑制了血管内皮生长因子 (VEGF) 的 mRNA，这是致病性眼部血管生成的关键因素，并且随后显示出脉络膜新生血管 (CNV) 面积的减少，这是 nAMD 的标志 ( Zhou et al., 2020 )。这些研究表明 CRISPR/CasRx 系统的治疗潜力。在这里，我们描述了三种不同的方法来有效地进行 CRISPR/CasRx 介导的血管内皮生长因子 A (VEGFA) 的 RNA 敲低。我们通过靶向 VEGFA mRNA，使用不同形式的单向导 RNA (sgRNA) 检查了 CRISPR/CasRx 系统的 RNA 敲低效率。为了应用于治疗学开发，我们生成了由 CasRx 和单个前 sgRNA 或多个前 sgRNA（阵列）组成的一体化 AAV 构建体，以检查系统的 RNA 敲除效率。本文介绍了使用 CasRx 和向导 RNA 变体进行体外 RNA 编辑的指导手册。
Caco-2 和 MCF-7 细胞系体外研究
摘要：碳纳米材料近年来在生物医学领域引起越来越多的关注，被用作适用于医学治疗的药物纳米载体，因为它们的表面积大、细胞内化率高、优先在肿瘤中积累，使这些纳米材料能够优先将化疗药物运送到肿瘤部位，从而降低药物的毒副作用。然而，人们普遍担心碳纳米材料固有的细胞毒性，这一点至今仍存在争议，研究结果相互矛盾。我们在此研究了各种碳纳米材料在人上皮性结直肠腺癌 (Caco-2) 细胞和人乳腺癌 (MCF-7) 细胞中的体外毒性。使用 Pluronic F-127 分散剂系统地比较了碳纳米角 (CNH)、碳纳米管 (CNT)、碳纳米片 (CNP)、氧化石墨烯 (GO)、还原氧化石墨烯 (GO) 和纳米金刚石 (ND)。碳纳米材料处理后的细胞活力遵循 CNP < CNH < RGO < CNT < GO < ND 的顺序，对分裂更快的 Caco-2 细胞的影响更为明显。CNP 产生的活性氧 (ROS) 水平非常高。此外，还比较了这些材料作为纳米载体在阿霉素和喜树碱类抗癌药物输送领域的潜力。在所有情况下，碳纳米材料/药物复合物的抗癌活性都比游离药物有所提高，其效率在很大程度上取决于碳纳米材料的疏水性和表面化学性质。这些基础研究对于开发基于智能碳纳米材料的纳米载体的筛选和风险收益评估至关重要。
抗抑制素自由免疫对体外排卵的影响...
抑制素是一种二聚体糖蛋白，由𝛼和两个亚基组成。针对二聚体抑制素的免疫主要用于辅助生殖技术中以诱导超排卵。但免疫反应性的游离抑制素𝛼亚基的具体功能仍不清楚。在本研究中，使用针对游离抑制素𝛼亚基（Pro-𝛼 N-𝛼 C）的新型单克隆抗体进行了两项主要研究（第一项研究排卵，另一项研究受精）。排卵研究重复进行了 6 次，共涉及 48 只 4-6 周龄雌性 CD1 小鼠。在每个重复中，4 只对照小鼠接受 PMSG/hCG 治疗，4 只治疗小鼠接受含有 mAb-游离𝛼亚基的 PMSG/hCG。受精研究重复进行了 3 次，共涉及 22 只雌性 CD1 小鼠。在每个重复实验中，对照组和治疗组分别有 4、3 和 4 只小鼠。在这两项研究中，雌性小鼠腹膜内注射 50 单位/毫升孕马血清促性腺激素 (PMSG)，单独注射或与 400ug mAb-Free 𝛼 亚单位联合注射，然后在 48 小时后注射 50 单位/毫升人绒毛膜促性腺激素 (hCG)。注射后 17 小时，所有组的雌性小鼠都被处死，并从输卵管中收集排卵的卵母细胞。对于受精研究，使用雄性 CD1 小鼠的新鲜精子进行体外受精。结果表明，与对照组相比，游离抑制素 𝛼 亚基的中和显著降低了排卵率 47.29%，而与对照组相比，免疫中和显著提高了受精率 55.68%，囊胚发育率 43.85%。这项研究表明，与二聚体抑制素的免疫中和效果相反，针对游离抑制素 𝛼 亚基的免疫会减少排卵。作者假设游离 𝛼 亚基可能起到抑制素拮抗剂的作用，与抑制素竞争与其共受体的结合。关键词：激活素、β-聚糖、受精、免疫中和、抑制素、排卵
mRNA 体外选择的高通量测序...
诺贝尔化学奖。体外选择对物理生物化学特别有吸引力，因为它能够仔细控制选择环境，从而能够探测各种现象，包括分子相互作用、折叠行为和进化途径。在体外选择过程中，具有所需特性的功能分子从大量随机（或半随机）序列中分离出来。这是通过选择、扩增和诱变的迭代循环实现的，直到最终的池中富含表现出所需特性的变体（图 1）。虽然体外选择通常应用于核酸，但当与肽展示技术相结合时，可以识别感兴趣的功能肽。特别是，mRNA 展示被广泛用于此目的，这将是本期观点的重点。