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大规模基因组和转录组测序分析揭示了植物中高活性腺嘌呤碱基编辑器诱导的突变景观
摘要背景：利用最近开发的 tRNA 腺苷脱氨酶 (TadA8e 和 TadA9) 改造的高活性腺嘌呤碱基编辑器 (ABE) 表现出强大的碱基编辑活性，但引发了人们对脱靶效应的担忧。结果：在本研究中，我们对 ABE8e 和 ABE9 诱导的水稻 DNA 和 RNA 突变进行了全面评估。对用四种 ABE（包括 SpCas9n-TadA8e、SpCas9n-TadA9、SpCas9n-NG-TadA8e 和 SpCas9n-NG-TadA9）转化的植物进行全基因组测序分析表明，含有 TadA9 的 ABE 导致更多数量的脱靶 A 到 G (A>G) 单核苷酸变体 (SNV)，而含有 CRISPR/SpCas9n-NG 的 ABE 导致水稻基因组中脱靶 SNV 总数更高。对携带 ABE 的 T-DNA 的分析表明，在 T-DNA 整合到植物基因组之前和/或之后可以引入靶向突变，在 ABE 整合到基因组之后会形成更多的脱靶 A>G SNV。此外，我们在 ABE 表达高的植物中检测到脱靶 A>G RNA 突变，但在 ABE 表达低的植物中未检测到。脱靶 A>G RNA 突变倾向于聚集，而脱靶 A>G DNA 突变很少聚集。结论：我们的研究结果表明 Cas 蛋白、TadA 变体、ABE 的时间表达和 ABE 的表达水平对水稻中的 ABE 特异性有影响，这为了解 ABE 的特异性提供了见解，并提出了除改造 TadA 变体之外增加 ABE 特异性的其他方法。
核酸
为了使DNA形成双链结构，重复或与RNA相互作用，碱基必须能够在一致的paxern中连接，以维持DNA序列。这涉及所谓的互补碱配对。嘌呤必须始终与嘧啶搭配，以维持相互间隔的两个分子之间的操作/mal距离。The complementary base pairing that occurs is: • The purine adenine (A) always pairs with the pyrimidine thymine (T) by forming two hydrogen bonds • The purine guanine (G) always pairs with the pyrimidine cytosine (C) by forming three hydrogen bonds • In an RNA sequence, the base thymine is replaced by uracil (U), and so this pairs with adenine 反而。
腺嘌呤碱基编辑能够在相关的体外和体内模型中持续降低两种主要的 HBV 标志物 HBsAg 和 HBV DNA
图 1. (A) 起始 DNA 序列，其中包含目标碱基对 (A:T)。(B) 腺嘌呤碱基编辑器 (ABE) 由进化的 TadA* 脱氨酶 (淡紫色) 和部分失活的 CRISPR-Cas 酶 (灰色) 组成。碱基编辑器与与向导 RNA (洋红色) 互补的目标序列结合，并暴露一段单链 DNA。(C) 脱氨酶将目标腺嘌呤转化为肌苷 (DNA 聚合酶将其读取为鸟嘌呤)，Cas 酶切口 (▲) 另一条链。(D) 切口链被修复，完成从 A:T 到 G:C 碱基对的转换。
衍生物分光光度计测定奎宁，...
摘要。已使用“零交叉”测量方法在混合物中同时定量奎宁 - 腺嘌呤或奎宁 - 甲基丙二酰胺盐酸盐的同时定量。在有4.3 µg/ml腺嘌呤的存在下，奎宁和腺嘌呤的第一衍生光谱允许在9.0 µg/ml quinine的情况下测定奎宁（1.5–17.9 µg/ml）。在二元二元 - 氯丙胺盐酸盐的二元混合物中，喹氨酸和甲基丙二酰胺盐酸盐的第一个衍生光谱允许在5.4 µG/ml甲基甲基盐水中测定奎宁（11.95–95.62 µg/ml），并在5.4 µg/ml的米尔酯中测定（1.34–21.52 µg/ml），存在29.88 µg/ml的奎宁。对所提供的实际数据进行了统计审查，以对推荐方法进行批判性评估。关键词：奎宁，腺嘌呤，甲氧氯普胺盐酸盐，二元混合物，同时测定，衍生分光光度法
沃森和克里克的DNA模型
胸腺嘧啶和鸟嘌呤与胞嘧啶配对。腺嘌呤和胸腺嘧啶是互补碱基对。同样，胞嘧啶和鸟嘌呤也是互补碱基对。DNA的这一特性称为互补性。DNA分子中腺嘌呤的数量等于胸腺嘧啶，鸟嘌呤的数量等于胞嘧啶。腺嘌呤和胸腺嘧啶通过两个氢键连接，胞嘧啶和鸟嘌呤通过三个氢键连接。一条多核苷酸链的碱基序列决定了另一条链的碱基序列。因此，这两条链被认为是互补的。 这两条链本质上是反向平行的。一条链有3个碳
6.1核酸的结构和DNA的复制
不用担心 - 您不期望您知道构成DNA，RNA或AMP，ADP和ATP的核苷酸的结构公式（如上图所示）！您只需要学习由它们组成的不同基团（磷酸基团，戊糖糖和氮基）。请记住，腺嘌呤是氮基碱，而腺苷是核苷（碱 - 腺嘌呤 - 附着在五糖糖上）。
