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改造 Cas12a 核酸酶变体，增强基因组编辑特异性
AU：请确认所有标题级别均正确显示：成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)-Cas12a 系统是基因编辑的强大工具；然而，crRNA-DNA 错配可能会引起不必要的切割事件，尤其是在 PAM 的远端。为了最大限度地减少这种限制，我们通过修改与靶 DNA 和 crRNA 链相互作用的氨基酸残基，设计了一种携带突变 S186A/R301A/T315A/Q1014A/K414A 的超保真 AsCas12a 变体（称为 HyperFi-As）。HyperFi-As 保留了与人类细胞中的野生型 AsCas12a (AsCas12aWT) 相当的靶向活性。我们证明 HyperFi-As 显著降低了人类细胞中的脱靶效应，并且与野生型相比，HyperFi-As 对 PAM 远端区域位置的错配容忍度明显较低。此外，采用改进的适当恒定力单分子 DNA 解拉链分析来评估 CRISPR/Cas 核糖核蛋白 (RNP) 复合物的稳定性和瞬态阶段。在 DNA-Cas12a-crRNA 复合物的解体过程中敏感地检测到了多种状态。在脱靶 DNA 底物上，与 AsCas12aWT 相比，HyperFi-As-crRNA 更难维持 R 环复合物状态，这可以准确解释为什么 HyperFi-As 在人类细胞中具有较低的脱靶效应。我们的研究结果提供了一种具有低脱靶效应的新型 AsCas12a 变体，尤其能够处理 PAM 远端区域的高脱靶。在单分子水平上，我们还揭示了 AsCas12a 变体在脱靶位点的行为方式，而用于评估 CRISPR/Cas RNP 复合物多种状态的解压缩分析可能对深入了解 CRISPR/Cas 的行为方式以及将来如何对其进行工程改造大有帮助。
突变的水生膜蛋白蛋白中的非共价π相互作用：QM/mm和局部振动模式研究
摘要：蛋白质动力学和功能与发生的能量流有很强的联系。肌红蛋白（MB）及其突变是研究分子水平上振动能传递（VET）过程的理想系统。使用色氨酸（TRP）探针在不同的MB位置引入的抗stokes紫外线共振拉曼研究通过氨基酸替代提出，这表明兽医的量取决于相对于血红素组的TRP探针的位置。受到这项实验工作的启发，我们探索了非共价π相互作用的强度，以及最初由局部振动模式分析（LMA）与铁在Aquotem-MB中结合的轴向和远端配体的共价相互作用，最初是由Konkoli和Cremer开发的。研究了两组非共价相互作用：（1）水配体和TRP环之间的相互作用，以及（2）TRP与血红素基团的卟啉环之间的相互作用。我们通过特殊的局部模式力常数评估了这些非共价相互作用的强度。使用气相和QM/MM计算，研究了基态下的各种TRP模型的水结合的水结合的MB蛋白（总共6个）。我们的结果揭示了兽医确实取决于TRP探针相对于血红素组的位置，也取决于远端组氨酸的互变异群的性质。他们提供了有关如何评估利用LMA的蛋白质中非共价π相互作用以及如何使用这些数据探索兽医的新准则，更通常是蛋白质动力学和功能。1 - 3■引言肌球蛋白（MB）是球蛋白超级家族的杰出成员，在心脏和骨骼肌的众多生理功能中具有重要作用，对于脊椎动物，它负责氧气的储存。
内在体感反馈支持运动控制和学习操作人造身体部位
摘要 目的 人们投入了大量资源，通过提供非自然形式的体感反馈来增强假肢的控制和可用性。在本文中，我们研究了远程控制假肢的身体部位的内在体感信息是否可以被运动系统利用来支持控制和技能学习。 方法 在安慰剂对照设计中，我们使用局部麻醉来减弱大脚趾的体感输入，同时参与者学习通过压力传感器操作脚趾控制的手动佩戴的机器人额外手指。将运动学习结果与接受假麻醉的对照组进行比较，并在三种不同的任务场景中进行量化：与生物手指隔离操作、同步协调操作和协作操作。 主要结果 两组都能够学会操作机器人额外手指，大概是因为视觉反馈和其他相关的感官提示非常丰富。重要的是，远端身体控制器提供的位移体感提示有助于获得独立的机器人手指运动、保持和转移同步手部机器人协调技能以及在认知负荷下的表现。当任务涉及与生物手指的密切协作时，脚趾麻醉不会损害运动表现，这表明运动系统可以通过动态整合来自多个甚至远端身体部位的任务内在体感信号来弥补感觉反馈差距。意义总之，我们的研究结果表明，除了人工刺激之外，还有多种自然途径可以提供内在替代体感信息来支持对人造身体部位的运动控制。
大脑分支血管周围空间间质液淋巴流动的新机制
普渡大学，2023 年 1 月 27 日 摘要 目的。基于血管周围空间的解剖学和力学，探索脑间质组织液流动的生物物理学，以便更好地了解淋巴液流动的发生方式。方法。在可快速计算的、分支的、多尺度的脑组织几何模型中研究心脏频率下的液体流动动力学。这些模型由混合的穿透动脉和静脉树提供。它们包括颅内压和血管内压的脉动变化、脑组织的弹性扩张以及沿 Virchow-Robin 空间轴的脑脊液流动阻力的非线性变化。在笔记本电脑上计算由此产生的动脉周围和静脉周围压力的变化以及由此产生的从小动脉到小静脉血管周围空间的间质液批量流量。结果。在典型的生理条件下，较小的远端动脉周围分支和静脉周围分支之间会产生约 0.5 mmHg 的时间平均正压。根据组织几何形状和液压阻力，产生的流量足以每 1 到 10 小时更新一次间质液。增加血管周围空间的径向宽度会降低这种效果。计算出的整个大脑的平均淋巴流量与蛛网膜绒毛测量到的新脑脊液产生量相似。结论。当适当考虑血管周围树的分支结构时，它们的经典解剖结构具有令人惊讶的新兴特性。在动脉周围和静脉周围空间较小的远端分支之间可以发生具有生物学意义的平流量。关键词。平流、阿尔茨海默病、淀粉样蛋白、生物物理学、血脑屏障、体积流量、脑脊液、循环、细胞外、液压、颅内压、血管周围泵送、通透性、软脑膜、脉动、蛛网膜下腔、Virchow-Robin 腔、废物。
内源性钙蛋白酶抑制剂calpastatin减弱了鼠鼠bar综合征的轴突变性
图1内源性HCAST表达可保护急性离体损伤模型中的轴突完整性。三角形（TS）的神经肌肉制剂（WT，n = 3）和Hcast（n = 3）小鼠用抗绞中AB（AGAB）在体内进行内部化研究（A，B），以及（损伤）或没有（对照）正常人（nHs）（nhs）的position（Corsem and Huspect）（CORCE）（CORCE）（cosect）（conterum and）（nhs），以供应（nhs），以供应（nhs），以供介绍。a）WT和Hcast TS运动神经末端（MNT）在37 C下孵育60分钟时，表面AGAB显着降低，而不是0分钟。（b）在用Triton X-100通透性后，在60分钟组中，MNT的总AGAB强度在两种基因型中都恢复正常，这表明AGAB内在化。（c）与对照相比，受伤的WT和Hcast TS的MNT的补体（绿色，E）强度显着增加。（d）神经丝（NF-H，洋红色，E）与对照相比，受伤的WT组织中MNT处的免疫染色强度显着降低，但受到Hcast受伤组织的对照水平的保护。（e）远端神经染色的说明性图像。btx（星号，橙色）和髓磷脂碱性蛋白（MBP，箭头，橙色）分别用于识别Ranvier（Nor）的Mnt和远端节点。虚线的大纲表示没有NF-H染色的位置。比例尺=5μm。 dotplots =平均±S.E.M.在比较治疗效果的数据上进行了未配对的一尾t检验（A，B＆C）； *表示p <.05。双向方差分析比较治疗（对照与损伤）或基因型（WT vs Hcast），然后对D.的数据进行了Tukey的事后多重比较测试。 * p <.05，***表示p <.001
covid-19-vaccine-janssen-epar-crisk-Management-plan_en.pdf
通过dapagliflozin抑制SGLT2可减少近端肾小管中肾小球滤液中葡萄糖的重吸收，并同时减少钠的重吸收，从而导致葡萄糖和渗透二尿液的尿液排泄。dapagliflozin因此增加了钠向远端小管的递送，从而增加了肾小管斜体的反馈并降低了倾斜度内压力。这与渗透性二尿作用相结合，导致体积超负荷，血压降低以及降低预紧和后负载，这可能对心脏重塑和舒张功能产生有益的影响，并保留肾功能。Dapagliflozin的心脏和肾脏益处不仅取决于降血糖效应，而不仅限于DAPA-HF，递送和DAPA-CKD研究中所证明的糖尿病患者。其他影响包括血细胞比容的增加和体重的减轻。
在坐骨神经损伤大鼠模型中，尿苷的再生作用中表观遗传机制的介导
在横切损伤中，外周神经的退化变化发生在损伤的两侧，从而观察到部分或完全的感觉/运动损失（8,22,43,47）。在周围神经损伤后，近端段发生退化性变化，远端段发生沃勒（Wallerian）变性（30）。病理生理的变化，例如凋亡，氧化应激，炎症，细胞外基质的破坏以及其他几个事件可能会使周围神经损伤（PNI）的损害程度恶化（29,48,49,49,52）；但是，这些复杂的过程在每个阶段都可以破坏以防止伤害后再生。尽管已经开发了针对这些过程的几种手术和医学方法，但可以保证PNI的功能恢复的治疗方法尚未发现（8,30,43,47）。
果蝇睾丸生态裂干细胞
图2：果蝇睾丸中的干细胞生态位。褐色：轮毂细胞HC。蓝色：种系干细胞GSC。绿色：囊肿干细胞CYSC。红色：区分生殖细胞。棕色：囊肿。利基位于睾丸管的远端。种系干细胞和囊肿干细胞已连接并增殖，并由几个组成“轮毂”的细胞锚定。区分时，一组一组分化的种系细胞与两个囊肿细胞形成复合物。囊肿充当区分生殖细胞的容器，该容器经历了细胞分裂，构成了囊肿中包含的精子祖细胞的包装。这种发展由持续细胞分裂的箭头指示（续）。
注意力调节同步神经元放电......
每只猴子都接受过触觉和视觉任务的训练，并在得到提示时在它们之间切换。视觉任务是一个变暗检测任务：计算机屏幕上出现三个白色方块，在随机间隔后，随机选择其中一个方块略微变暗。在视觉任务期间，触觉刺激持续不减，且与视觉刺激不一致。每只猴子执行不同的触觉任务。两只猴子辨别在远端指腹（15 毫米 s - 1 ）上扫描的凸起字母（6.0 毫米高），当手指上的字母与计算机屏幕上显示的目标字母匹配时按下按键 2 。触觉字母的高度接近人类的分辨率极限；猴子的表现与人类辨别相同字母的表现相同 2 。计算机屏幕上显示的目标字母很大（高 0.38 英寸），在触觉任务期间持续显示。对于猴子 M1，在研究一组神经元的试验中，目标字母保持不变（ ，45 分钟）。对于猴子 M2，目标字母在每次正确反应后随机变化（平均每三或四个字母变化一次；即大约每 7.5±10 秒）。猴子 M3 辨别连续呈现在远端指腹上的条（6.0 毫米长）是具有相同还是不同（90 8 ）的方向。所有三个触觉任务对人类来说都很难，但 M2 的任务尤其费力，因为触觉目标不断变化。猴子在所有任务中的反应大约有 90% 正确。每只猴子被提示每 7±8 分钟在触觉和视觉任务之间切换一次，同时从位于对侧 SII 皮质的多达七个微电极 3 进行单个单元记录，该区域已知受注意力影响 2,4,5 。
胆管癌 2020：机制和管理的下一个发展方向
胆管癌 (CCA) 是胆道系统中出现的一组多样化恶性肿瘤。根据解剖部位，CCA 分为三种亚型：肝内 (iCCA)、肝门部 (pCCA) 和远端 (dCCA) CCA 1、2（图 1）。值得注意的是，混合型 HCC-CCA 肿瘤被视为独立实体，是一种罕见的肝脏恶性肿瘤，兼具 iCCA 和 HCC 的特征，病程进展迅速，预后不良 3、4。iCCA 发生在二级胆管之上，而 pCCA 和 dCCA 之间的解剖学区别点是胆囊管的插入。pCCA 和 dCCA 也可以统称为“肝外”(eCCA) 5。在美国，pCCA 是最大的单一群体，约占所有 CCA 的 50–60%，其次是 dCCA