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案例研究具有IPSC衍生的基因组的可比性...
不包括可比性：•HPC过程中的指标，释放和稳定性（变化的上游）•对可比性演示批次（NA - 实验室产生）未执行的某些测试（*）•DP稳定性未执行可比性（但包括每年的稳定性1批次）
通过引入造血祖细胞的无馈膨胀步骤
EB培养基是基于Stapel培养基（31，32）（表1）。要生成EB，使用细胞释放缓冲液（1/1000 EDTA/PBS）将IPSC细胞145酶脱离，并通过使用EB介质（表1）吸管以147天0-1（表2）来收集细胞146的团块146。通过70 µm大小的滤网将收集的细胞团过滤到50ml 148无菌管中。通过10ML血清学移液移除细胞团，并将其轻轻添加到超低149附件培养皿中（Sigma Aldrich，CAT＃CLS3261），在37°C下保持在37°C，将5％CO2 150放置在轨道振荡器上（Scientififix，CAT＃NBT-101SRC）旋转32rpm。每100mm 151盘，将2至3×10 6个细胞用于EB形成。媒体更改策略，包括152个分化因子的细节，如表2所述。为了在EB组153步骤中提高细胞活力，将0.2 nm岩石抑制剂Y-27632（Stemcell Technologies，＃72307）添加到媒体154天0-1中，并从那时起停产。从第7天开始，IPSC衍生的造血细胞开始从胚胎体作为悬浮细胞出现。156
人类IPSC衍生的类器官系统，用于建模髓磷脂破坏和修复
此预印本的版权持有人（本版本发布于2024年5月20日。; https：//doi.org/10.1101/2024.05.19.594912 doi：biorxiv Preprint
健康对照人IPSC线，男性，SCTI004-A
这些IPSC及其修改（包括但不限于衍生物或差异化的后代）不得用于货币化或商业化目的，包括无限制，用于或以诸如蜂窝疗法的制造或其他属性或其他属性增长或其他产生的销售或其他销售的销售，或者其他疗法的制造，或者以其他疗法的制造，或其他销售，或其他销售。为了清楚起见，这些IPSC及其修饰（包括但不限于衍生物或分化后代）不得用于筛选化合物，抗体，蛋白质或肽，但对于目标发现，目标验证，目标验证或分析的目的除外，如果这些活动以及此类活动的结果不进一步用于单位化或商业化。
人类IPSC衍生的前脑神经元前体细胞
人类IPSC衍生的前脑神经元前体细胞是由人类诱导的多能干细胞（IPSC）系，健康对照的人IPSC线，女性，SCTI003-A（目录＃200-0511），使用STEMDIFF™SMADI NEURAL诱导KIT（目录和Catalog with newur＃08581），并使用STEMDIFF™SMADIFIFF™ ＃08600）。应使用STEMDIFF™前脑神经元成熟试剂盒（目录＃08605）融化和成熟的人类IPSC衍生的前脑神经元前体细胞，这将导致高度纯的前脑型神经元（≥80％IIIβ-iiβ-β-型β-三级型neurons; <15％s100berys; <15％s100beyt;这些神经元具有功能性，可以长期保持培养。它们是用于建模人类神经系统发育和疾病，药物筛查，毒性测试和细胞疗法验证的多功能工具。
具有可靠突触的人IPSC衍生的神经元和突触前动作电位
致谢作者要感谢Claudia Binder的专家技术援助和医学博士。Aida Salameh为培养基的表征提供了帮助。这项工作得到了欧洲研究委员会的赠款（ERC合并赠款865634“ Presynplast” S.H.和ERC Advanced Grant 884281“ Synapse -Build”给V.H.），Deutsche Forschungsgemeinschaft（DFG，德国研究基金会；研究单位Synabs HA6386/9-2和HA6386/10-2 to S.H.;德国卓越策略 - Exc- 2049 - 390688087 to V.H.; Neuronex2/ha2686/19-1 to V.H.;研究单位Synabs GE2519/8-2和GE2519/9-2至C.G.; KFO 5001/KI1460/9-1，SPP 2205/KI1460/7-1和KI1460/5-1 to R.J.K.）。
动态电刺激促进了HIPSC-CM分化和功能
动态电刺激促进了HIPSC-CM分化和功能抽象的人类诱导的多能干细胞分化的心肌细胞（HIPSC-CMS）具有很大的潜力，可以解决心血管疾病，但由于其功能不成熟而受阻。在心脏病发生过程中测得的复杂电势表明，外源性电刺激在改善心脏分化和功能方面的潜力。在此，我们创建，验证和实施低成本的电刺激装置，以刺激心脏分化期间的hipsc。值得注意的是，我们的开源设备可以生成复杂的电刺激状态，这些刺激状态可能会随着时间的流逝而变化和脉冲持续时间。我们的结果表明，分化过程中的动态刺激提高了心脏分化效率，钙处理和流速性，并促进了与静态刺激或没有刺激控制的显着转录组途径富集。动态刺激可以通过肌节发育增强电化学耦合并促进心源途径的表达。我们预计可以生成更复杂的动态电刺激方案，以进一步优化HIPSC-CM功能和成熟度。简介
使用 iPSC 建模遗传性周围神经病的进展与挑战
遗传性周围神经病 (IPN) 是一组与各种基因突变有关的疾病，这些基因在周围神经的发育和功能中起着重要作用。在过去的 10 年里，通过细胞生物学研究和转基因苍蝇和啮齿动物模型，在识别轴突和髓鞘变性背后的分子疾病机制方面取得了重大进展，促进了有希望的治疗策略的发展。然而，迄今为止尚未出现临床治疗方法。缺乏治疗方法凸显了对更多生物学和临床相关模型的迫切需求，这些模型可以重现 IPN。对于神经发育和神经退行性疾病，患者特异性诱导多能干细胞 (iPSC) 是疾病建模和临床前研究的一个特别强大的平台。在这篇评论中，我们提供了不同体外人类细胞 IPN 模型的最新信息，包括传统的二维单一培养 iPSC 衍生物，以及使用微流体芯片、类器官和组装体的更复杂的人类 iPSC 系统的最新进展。
IPSC中使用CRISPR的高效精确基因组编辑方法
基因组编辑是生物技术领域中开发的最强大的工具之一。改变生物体的基因组的能力使科学家能够在更复杂的系统中研究挑战性的进化和药用问题1。全基因组关联研究（GWAS）产生了大量的单核苷酸多态性（SNP），与疾病风险增加相关的遗传变异2。基因编辑允许生产含有SNP的基因工程的同源线，这些细胞可能说明了这种遗传突变如何引起疾病。编辑水平从理论上简单的基因敲除到更复杂的编辑，例如完整的基因插入或点突变。尽管基因组编辑技术已经快速提高，但仍未解决的几个挑战3 - 5。群集定期间隔短的短质体重复序列（CRISPR）已成为动植物模型中基因组编辑的首选方法6。当前方法通常使用核酸酶变体Cas9和cas12a 6。CRISPR -CAS9和-CAS12A系统与指南RNA（GRNA）相互作用，该导向RNA（GRNA）由两个段组成：CRISPR RNA（CRRNA）指定基因组靶点位点和反式激活CRISPR RNA（TRACRRNA），这些crispr rna（tracrRNA）直接与CAS与CAS核蛋白结合以形成核糖核蛋白蛋白（RNP）7。与先前的基因改变技术相比，创新的CRISPR-CAS基因编辑技术更简单，更负担得起配置，从而导致了广泛的利用率2、8、9。我们假设我们可以通过抑制p53激活，从而提高编辑效率来改善细胞恢复。然而，尽管CRISPR-CAS编辑系统取得了重大进展，但迫切需要进一步的优化以提高效率和成功编辑的百分比，尤其是当多种风险变体与感兴趣的基因相关联时，就需要通过敲击多个遗传修饰的多种SNP产生具有不同SNP的多线。在这项研究中，我们旨在开发一种高效且易于适应的基因编辑方案，以克服目前限制细胞系中点突变效率的障碍。由于与CRISPR和单细胞克隆10相关的双链染色体断裂而引起的明显细胞死亡。另一方面，据报道，抑制相关激酶（岩石）或p53途径可通过预防细胞死亡8来提高编辑效率8。
IPSC重新编程的自动有效解决方案
使用标准制造商的建议制备了200μm的单层细胞阵列。用1％Geltrex™涂有6孔板的单个孔和CellRaft阵列（Gibco™Cat。编号A1413301）在37°C下过夜，准备细胞播种。在电穿孔之前，将成纤维细胞培养基分配到每个井/储层中。电穿孔后立即将电穿孔的成纤维细胞重悬于1ML的成纤维细胞培养基中，然后再滴入预先涂层的6孔板和蜂窝阵列中。在第一天，成纤维细胞培养基被补充的N2B27培养基取代，该培养基补充了新鲜的基本成纤维细胞生长因子（BFGF）（Thermo Scientific Cat。编号phg0264）。从D1-D15中，使用补充新鲜BFGF的N2B27培养基每隔一天进行一次完整的培养基变化。在D16上，N2B27培养基被Essential 8™培养基取代（Gibco Cat。编号A1517001），将细胞培养为IPSC。