血液中的抽象钾浓度对于患有慢性肾脏疾病的大量患者群体起着至关重要的作用。连续监测血钾对于降低相关风险至关重要。基于家庭护理的小型测量套件将提高患者安全性并降低医疗费用。当前,离子选择电极(ISE)正在进化用于血液钾监测的应用。常规ISE是电位计量学或导电测量值。常规ISE需要一个参考电极来比较离子浓度的变化。这些参考电极由于不适当的填充溶液,连接堵塞和泄漏而随时间漂移,因此限制了传感器的寿命。在本文中,我们使用基于阻抗的测量来开发了一种无参考的固态ISE,以感知钾离子以克服漂移问题。使用阻抗测量评估钾选择性膜上钾选择性膜的灵敏度和选择性。开发的ISE在钾溶液(KCL)中以各种浓度扫描。另外,通过将电极存储在1 mM KCl溶液中40天来评估所提出的钾选择性电极的寿命。因此,微型钾选择性电极可以帮助那些需要连续监测血液钾水平的患者。
细胞,并重悬于裂解中(20 mM Tris,500 mM NaCl和10 mM Imidazole,pH 8.0),并补充了“完整的蛋白酶抑制剂鸡尾酒”(Merck,CAT,CAT#11697498001)。重悬于重悬酶后,苯并酶核酸酶(默克,CAT#E1014-5KU,每40 ml裂解物10μl)和溶菌酶(默克,CAT#10837059001,1 mg/ml裂解物),并加入冰上30分钟。细胞在Avestin乳液C-5均质器(15-20 kpsi)上被破坏,并通过离心(15,000 g,4°C,15分钟)去除不溶性细胞碎片。在10°C下进行所有随后的色谱步骤。清除的裂解物被加载在5 ml Histrap FF柱上(Cytiva,Cat#17525501)。将树脂用10列的洗涤液(裂解效果)洗涤(但使用20 mM咪唑)洗涤,并用10列的洗脱体洗脱蛋白(裂解效果,但用250毫米咪唑)洗脱。馏分合并,并在透析中稀释至25 mL(250 mM KCl,20 mM HEPES和1 mM DTT和1 mM EDTT和1 mM EDTA,pH 8.0)。使用透析膜管透析在10°C下透析,使用分子量切割为6-8 kDa(光谱/POR标准级再生纤维素,宽23毫米)的透析膜管。1-2小时后,将透析液替换,透析继续过夜。第二天,将透析样品在10 mM HEPE(pH 8)中稀释了两倍(pH 8),并立即加载在5 mL HITRAP肝素HP柱(Cytiva,CAT,CAT#17040601)上,并用Bu效率a(20 mM Hepes,150 mm Hepes,150 mm KCl,pH 8.0)。关注的分数被汇总并上升。将树脂用2柱体积洗涤,并使用bu虫B(20 mM Hepes,2m kcl,pH 8.0)的线性梯度在12柱体积上洗脱蛋白质。含量为2 mL;通过在120 mL SuperDex200凝胶滤光管(Cytiva#28989335)上注射上浓缩样品,以50 mM磷酸钠,300 mM NaCl,300 mM NaCl,0.1 mm EDTA,pH 7.5 AS分离bu e e e e e e e e e e o 进行了最终的色谱步骤。进行了最终的色谱步骤。
产品名称:BamHI-HF® 产品编号:R3136L 浓度:20,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 1 小时内消化 rCutSmart™ 缓冲液中的 1 µg Lambda DNA 所需的酶量,总反应体积为 50 µl。 包装批号:10274361 有效期:06/2026 储存温度:-20°C 储存条件:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、200 µg/ml rAlbumin(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-R3136S/L/V v2.0
产品名称:Deep Vent® (exo-) DNA 聚合酶 产品编号:M0259L 浓度:2,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 75°C 下 30 分钟内将 10 nmol dNTP 掺入酸不溶性物质的酶量。 包装批号:10270956 到期日:09/2026 存储温度:-20°C 存储条件:10 mM Tris-HCl、100 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、0.1 % Triton®X-100、50 % 甘油,(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-M0259S/L v2.0
产品名称:HinfI 产品编号:R0155M 浓度:50,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 1 小时内消化 rCutSmart 缓冲液中的 1 µg Lambda DNA 所需的酶量,总反应量为 50 µl。 包装批号:10272606 有效期:01/2027 储存温度:-20°C 储存条件:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、200 µg/ml rAlbumin(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-R0155T/M v2.0
产品名称:T4 DNA 连接酶 产品编号:M0202S 浓度:400,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 20 µl 总反应体积中,16°C 下 30 分钟内使 6 µg Lambda-HindIII DNA 连接率达到 50% 所需的酶量。 包装批号:10270901 有效期:01/2027 存储温度:-20°C 存储条件:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50 % 甘油,(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-M0202S/L v1.0
产品名称:XhoI 产品编号:R0146S 浓度:20,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 1 小时内消化 rCutSmart 缓冲液中的 1 µg Lambda DNA(HindIII 消化)片段所需的酶量,总反应体积为 50 µl。 包装批号:10269860 有效期:05/2026 储存温度:-20°C 储存条件:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、200 µg/ml rAlbumin(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-R0146S/L/E v3.0
产品名称:BamHI-HF® 产品编号:R3136L 浓度:20,000 U/ml 单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 1 小时内消化 rCutSmart™ 缓冲液中的 1 µg Lambda DNA 所需的酶量,总反应体积为 50 µl。 包装批号:10274361 有效期:06/2026 储存温度:-20°C 储存条件:10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油、200 µg/ml rAlbumin(pH 7.4 @ 25°C) 规格版本:PS-R3136S/L/V v2.0
1. 将 5 ml 血液收集到含有 EDTA 的真空采血管 (Becton Dickinson) 中并混合。2. 用溶液 1 (10 mM Tris pH 7.6;10 mM KCl;10 mM MgCl2) 定容至 10 ml。3. 加入 120 μl Nonidet P40 (BDH) 以裂解细胞。颠倒几次以充分混合。4. 以 2000 rpm 的速度旋转核沉淀 10 分钟。5. 倒出上清液,不要移出沉淀。沉淀可以冷冻保存。6. 将沉淀轻轻地重新悬浮在 800 μl 溶液 2 (10 mM Tris pH 7.6;10 mM KCl;10 mM MgCl2;0.5 M NaCl;0.5% SDS;2 mM EDTA) 中。溶液 2 会裂解细胞核,所以要小心不要剪切 DNA。转移到 1.5 ml 的微量离心管中。7. 加入 400 μl 蒸馏苯酚(饱和于 1 M Tris pH 8.0)并混匀。8. 以 12000 rpm 的速度离心 1 分钟。将上层相转移到干净的微量离心管中。不要担心转移少量界面。9. 加入 200 μl 苯酚和 200 μl 氯仿:异戊醇(24:1)。颠倒混匀。10. 以 12000 rpm 的速度旋转 1 分钟。将上层相转移到干净的微量离心管中。11. 加入 700 μl 氯仿:异戊醇并按上述方法提取。12. 将上层水相转移到一个小的干净容器中。避免去除界面。加入 2 倍体积的冰冷乙醇并混合以沉淀 DNA*。 13. 使用密封的吸液管尖端将 DNA 纤维转移到含有 1 ml 70% 乙醇的微量离心管中。充分混合以清洗 DNA。14. 全速旋转 5 分钟。倒掉乙醇并在真空吸尘器中干燥沉淀物。在 65°C 的无菌水中重新悬浮 DNA。不要过度干燥基因组 DNA,否则将很难重新悬浮。
1包括在新加坡,马来西亚,越南和澳大利亚以及Urbanfox的Keppel Logistics业务。2不包括停产的操作。3这个$ 2.19的数字被四舍五入到最近的两个小数点;根据(i)公司宣布的股息现金同等金额为3,845,164,646.11,根据(ii)在记录日期1,751,959,918 KCL股票(不包括股份股票)时,计算出的股息现金同等金额。4是由拟议中的组合产生的,基于截至2023年2月28日,拟议组合的资产和负债的价值(作为处置组),在完成之日以损益确认的损益的收益约为33亿美元。,处置的收益需要调整公司在组合完成之前的某些支出,以对Keppel O&M的任何报销,以获取某些支出,这与Keppel O&M向Asset Co售出的资产相关的资产在此范围内超过了一致的支出。