机构名称：
¥ 1.0
1. 将 5 ml 血液收集到含有 EDTA 的真空采血管 (Becton Dickinson) 中并混合。2. 用溶液 1 (10 mM Tris pH 7.6；10 mM KCl；10 mM MgCl2) 定容至 10 ml。3. 加入 120 μl Nonidet P40 (BDH) 以裂解细胞。颠倒几次以充分混合。4. 以 2000 rpm 的速度旋转核沉淀 10 分钟。5. 倒出上清液，不要移出沉淀。沉淀可以冷冻保存。6. 将沉淀轻轻地重新悬浮在 800 μl 溶液 2 (10 mM Tris pH 7.6；10 mM KCl；10 mM MgCl2；0.5 M NaCl；0.5% SDS；2 mM EDTA) 中。溶液 2 会裂解细胞核，所以要小心不要剪切 DNA。转移到 1.5 ml 的微量离心管中。7. 加入 400 μl 蒸馏苯酚（饱和于 1 M Tris pH 8.0）并混匀。8. 以 12000 rpm 的速度离心 1 分钟。将上层相转移到干净的微量离心管中。不要担心转移少量界面。9. 加入 200 μl 苯酚和 200 μl 氯仿：异戊醇（24:1）。颠倒混匀。10. 以 12000 rpm 的速度旋转 1 分钟。将上层相转移到干净的微量离心管中。11. 加入 700 μl 氯仿：异戊醇并按上述方法提取。12. 将上层水相转移到一个小的干净容器中。避免去除界面。加入 2 倍体积的冰冷乙醇并混合以沉淀 DNA*。 13. 使用密封的吸液管尖端将 DNA 纤维转移到含有 1 ml 70% 乙醇的微量离心管中。充分混合以清洗 DNA。14. 全速旋转 5 分钟。倒掉乙醇并在真空吸尘器中干燥沉淀物。在 65°C 的无菌水中重新悬浮 DNA。不要过度干燥基因组 DNA，否则将很难重新悬浮。
一种快速提取基因组 DNA 的方法
主要关键词
相关文件推荐
