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CRISPR-Cas12a 辅助 Amycolatopsis mediterranei 基因组编辑
Amycolatopsis mediterranei U32 是利福霉素 SV 的工业生产者，其衍生物长期以来一直是抗分枝杆菌的一线药物。为了对这种重要的工业菌株进行基因改造，过去几十年来人们付出了很多努力，我们实验室成功开发了一种基于同源重组的方法，但该方法需要使用抗生素抗性基因进行正向选择，并且不支持方便的无标记基因删除。在本研究中，我们利用成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 系统在 A. mediterranei U32 中建立了基因组编辑系统。具体来说，土拉弗朗西斯菌亚种。 novicida Cas12a (FnCas12a) 基因首先整合到 U32 基因组中，在 CRISPR RNA (crRNA) 的指导下产生靶向特异性双链 DNA (dsDNA) 断裂 (DSB)。然后，DSB 可以通过非同源 DNA 末端连接 (NHEJ) 系统或同源定向修复 (HDR) 途径修复，分别在靶基因中产生不准确或准确的突变。除了 A. mediterranei 之外，本研究还可能为 Amycolatopsis 属其他物种中 CRISPR 辅助基因组编辑系统的开发提供启示。
全球LRP调节蛋白来自Haloferax Mediterranei
Haloferax Mediterranei是一种在高盐环境中蓬勃发展的极端卤素古老的考古，由于其在极端盐度条件下繁荣发展，因此在生物技术和生化研究中引起了人们的关注。转录因子在调节各种细胞过程中必不可少，已成为理解其适应性的焦点。这项研究深入研究了LRP转录因子的作用，探索了其通过β-半乳糖苷酶测定的体内GLNA，NASABC和LRP基因启动子的调节。值得注意的是，我们的发现提出LRP是氮代谢的开创性转录调节剂。这项研究表明其在激活或抑制同化途径酶（GLNA和NASA）中的潜在作用。LRP与这些启动子之间的相互作用使用电泳迁移率转移测定法和差异扫描荧光法分析，这突出了L-谷氨酰胺在稳定LRP -DNA复合物中必不可少的作用。我们的研究发现，在存在L-谷氨酰胺的情况下，卤素LRP形成八接结构。该研究揭示了使用X射线晶体学作为同型二聚体的三维结构，通过小角度X射线散射在溶液中证实了该状态。这些发现阐明了驱动HFX的复杂分子机制。地中海尼的氮代谢，提供有关其基因表达调节的宝贵见解，并丰富我们对极端生物学的理解。
CRISPR/CAS9 基因编辑系统
CRISPR 基因座（源自英文“Clustered Regularly Interspaced Palindromic Repeats”，缩写为 CRISPR）于 1987 年由 Ishino 及其同事首次描述，当时他们正在研究大肠杆菌中参与碱性磷酸酶同工酶相互转化的 iap 基因。当时，由于DNA序列数据不足，技术也不像今天先进，研究人员无法预测这些序列的生物学功能。1993 年，CRISPR 基因座也在古菌（Haloferax mediterranei）中被观察到，随后在许多其他细菌的基因组中也被证实。在两个生命领域中同一基因位点的保存表明该区域很可能具有一定的重要性。然而，直到 2005 年，Mojica 及其合作者以及 Pourcel 及其合作者才独立报道间隔区中包含的序列与噬菌体、原噬菌体和质粒中发现的序列同源。以此方式证明，外源生物无法感染在 CRISPR 基因座中具有与
架子生命和微生物学特性（paracentrotus lividus）Roe
总结这项工作的目的是检查新鲜，巴勒莫（意大利西西里岛）由Paracent-Rotus lividus购买的耐用性和微生物所有者。21玻璃，其中每张玻璃杯中包含的大约50 g新鲜的Rogen玻璃，以评估冷却存储期间的耐用性。对样品进行了对颤音，气管，李斯特菌，沙门氏菌和梭状芽胞杆菌的细菌进行分析。感官接受记录长达72小时，之后观察到气味和强度损失。感觉专家主要与硫化氢的生长有关。在71.4％的样品中，能够通过基因型和表型颤音质属属。已确定。有几种弧菌物种，例如：静脉内分析（47％）； V. Harveyi（16％）； V. Mimicus和V. Mediterranei（10％）； V. Hepatarius（7％）； V. rotiferanus和V. diabolicus（5％）和V. ponticus（2％）。尽管孤立的弧菌部落很少是人类疾病的原因，但经常消费原始的Seeigel-Roges可能是关于中型安全的一些问题。李斯特菌属。和沙门氏菌属。未得到证明。
基因组编辑工具
瑞典皇家科学院决定将 2020 年诺贝尔化学奖授予 Emmanuelle Charpentier 和 Jennifer A. Doudna，以表彰他们开发了一种基因组编辑方法。引言 1953 年，JD Watson 和 FHC Crick 报告了 DNA 的分子结构 [1]。从那时起，科学家们就一直试图开发能够操纵细胞和生物遗传物质的技术。随着 RNA 引导的 CRISPR-Cas9 系统的发现，一种简单有效的基因组工程方法现已成为现实。这项技术的发展使科学家能够修改各种细胞和生物中的 DNA 序列。基因组操作不再是实验的瓶颈。如今，CRISPR-Cas9 技术被广泛应用于基础科学、生物技术和未来治疗学的开发 [2]。在原核生物中发现 CRISPR-Cas 系统。最终导致发现用于基因组编辑的强大的 CRISPR-Cas9 系统的工作始于鉴定细菌和古菌中存在的重复基因组结构。 1987 年，一份报告指出大肠杆菌基因组中存在一个不寻常的重复结构，该结构包含五个高度同源的 29 个碱基对 (bp) 序列，包括 14 bp 的二元对称序列，其间散布着 32 bp 的可变间隔序列 [3]。几年后，在嗜盐古菌 Haloferax mediterranei 的基因组中也发现了类似的重复结构，其中有 14 个几乎完全保守的 30 bp 序列，以规律的距离重复 [4]。后续的生物信息学分析表明，这些类型的重复在原核生物中很常见，且都具有相同的特殊特征：一个短的部分回文元素成簇出现，并被独特的恒定长度的中间序列隔开，这表明其起源于祖先并具有高度的生物学相关性 [5]。从此引入了术语 CRISPR，这是成簇的规律间隔的短回文重复序列的缩写 [6]。了解 CRISPR 功能的重要一步是鉴定出 CRISPR 相关 (cas) 基因，这是一组仅存在于含有 CRISPR 的原核生物中且始终位于 CRISPR 相邻位置的基因。鉴定出的 cas 基因编码的蛋白质具有解旋酶和核酸酶基序，表明其在 DNA 代谢或基因表达中发挥作用 [6]。与 CRISPR 的关联被用作定义特征，在接下来的几年中，描述了许多 Cas 蛋白亚家族 [7, 8]。CRISPR 位点的功能重要性一直难以捉摸，直到 2005 年，研究人员注意到独特的 CRISPR 序列来自可传播的遗传元件，例如噬菌体和质粒 [9-11]。携带这些特定序列的原核生物似乎可以免受感染，因为含有与间隔序列匹配的序列（称为原间隔序列）的质粒或病毒通常不存在于携带间隔序列的原核生物中 [9, 11]。这些相关发现表明 CRISPR 在原核生物防御入侵外来 DNA 方面发挥着作用，间隔序列被描述为“过去‘遗传攻击’的记忆” [10]。已经证明 CRISPR 转录成长 RNA