目前,使用猪污染的食物成分和或加工食品已成为当前的关注和加强问题。这种情况鼓励开发准确的方法,以特别检测猪污染的存在。本研究使用两种样品:(1)新鲜猪肉作为阳性内部控制和(2)用猪肉(碎肉,肉丸,咸牛肉和香肠)制成的加工肉类产品,这些产品使用DNA标记进行了测试。使用猪肉处理的样品是确定加工对DNA片段的影响,并在所使用的检测过程中测试提取方法的刚性。本研究旨在使用定量聚合酶链反应(QPCR)方法检测猪DNA片段。研究首先使用RNA提取试剂盒,DNA提取试剂盒和盐提取方法提取新鲜的猪肉和加工产品,然后使用分光光度计测量DNA/RNA的纯度和浓度。RNA提取物被转化为互补DNA(cDNA),并与使用QPCR分析的DNA提取物(SUS SCROFA)。结果表明,获得的RNA和DNA提取物的浓度为71.1-296,025 ng/ul,纯度不同。在CT 23-28 ng/ul范围内,所有加工产品和阳性内部的样品都是放大的对照,在这种情况下,肉的加工不会影响分析的加工产品的DNA,因此可以检测到DNA片段。关键字:beta aktin,循环阈值,新鲜猪肉,DNA猪肉,qpcrqPCR DNA在工作时间上比cDNA qPCR更有效,因为它不需要RNA的转录阶段。
Duchenne肌肉营养不良(DMD)是一种X连锁疾病,是由DMD基因突变引起的,导致逐渐浪费肌肉和无力。目前无法治愈DMD。BL10-MDX小鼠是临床前DMD研究中最常用的模型,但与DMD患者相比,它表现出温和的疾病表型,从而限制了研究的可转换性。较新的D2-MDX小鼠在很小的时候就具有更严重的表型,并且可以更好地概括人类疾病。将这些小鼠模型与定量RT-PCR,稳定且可靠的参考基因进行比较是必不可少的。We aimed to evaluate the stability and reliability of a panel of nine candidate reference genes ( Actb, Ap3d1, Gapdh, Hmbs, Htatsf1, Pak1ip1, Rpl13a, Sdha and Zfp91 ) in the gastrocnemius, diaphragm and heart of mice from both strains and their corresponding wild types aged 4 to 52 weeks.使用Genorm,最佳门将,三角肌和Normfinder分析数据。我们发现HTATSF1,PAK1IP1和ZFP91是合适的参考基因,用于在营养不良和健康小鼠中基因表达的标准化,无论组织类型或年龄如何。在我们的手中,ACTB,GAPDH和RPL13A不适合作为参考基因,表现出组织,年龄或疾病特定的表达变化。这项研究强调了选择合适的参考基因的重要性,因为它们的稳定性在特定的实验设置之间可能有所不同。
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2025 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明,否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems,Inc。的商标。飞-9785824 0225
描述各种方法用于实时PCR(定量PCR或QPCR)数据的统计分析和图形表示。'rtpcr'负责基于多达两个参考基因的实时PCR数据的扩增效率计算,统计分析和图形表示。通过考虑放大效率值的考虑,“ RTPCR”是由Ganger等人描述的一般计算方法开发的。(2017)和Taylor等。(2019),涵盖了livak和pfaffl方法。基于实验条件,“ RTPCR”包装的功能使用t检验(用于具有两级因子的实验),方差分析(ANOVA),协方差分析(ANCOVA)分析(ANCOVA)或重复测量数据分析以计算到calcu- colcu- flta delta delta delta delta delta ct方法(delta cta)或dela dela dela dela(re)(re)(re)。该功能进一步提供了平均值的标准误差和置信度间,采用统计平均比较并具有重要意义。为了促进功能应用,使用了不同的数据集作为示例,并解释了输出。“ RT- PCR”软件包还使用各种控制参数提供条形图。“ rtpcr”包装是用户友好且易于使用的,并提供了用于分析实时PCR数据的适用资源。
开始之前 ................................................................................................ 7 工作流程示意图 ................................................................................ 7 推荐的检测布局 ................................................................................ 7 样品制备 .............................................................................................. 8 qPCR 检测准备 ................................................................................ 8 阳性对照(可选) ................................................................................ 9 推荐的 PCR 循环方案 ...................................................................... 9 数据收集 ............................................................................................. 9
定量聚合酶链反应(QPCR)提供了一种快速,自动化和强大的现场方法,用于量化肺炎乳杆菌在构建饮用水系统中,补充并有可能替代传统的基于文化的技术。然而,由于发现与可行,传染性细菌无关的基因组副本,它在评估人类健康风险中的应用使人们越来越多。本研究通过QPCR和基于培养的方法研究了肺炎乳杆菌测量的关系,旨在建立QPCR与培养的浓度比率,以告知相关的健康风险。合格的研究使用成对水样品中的分子和基于培养的方法收集了有关肺炎乳杆菌浓度的定量数据。我们开发了一个泊松对数正态比率模型和一个随机效应荟萃分析模型,以分析跨站点内部和跨站点的QPCR培养比的变化。在系统评价中的17项研究中,有7项,包括23个特定地点数据集,用于荟萃分析。我们的发现表明这些比率通常从1:1到100:1不等,在所有地点的比率接近1:1。因此,采用默认的1:1转换因子似乎是必要的,作为一种谨慎的方法,将QPCR浓度转换为可培养的浓度,以用于健康风险模型,例如量化微生物风险评估(QMRA)。如果这种方法可能过于保守,则可活力-QPCR可以提高基于QPCR的QMRA的准确性。标准化QPCR和基于培养的方法以及影响肺炎乳杆菌可培养性的特定地点环境因素将改善对两种方法之间关系的理解。此处介绍的比率模型超出了简单的相关性分析,从而促进了关系中时间和空间异质性的研究。该分析是QMRA和分子生物学整合的一步,针对肺炎乳杆菌的框架适用于在环境中监测的其他病原体。
定量聚合酶链反应(QPCR)提供了一种快速,自动化和强大的现场方法,用于量化肺炎乳杆菌在构建饮用水系统中,补充并有可能替代传统的基于文化的技术。然而,由于发现与可行,传染性细菌无关的基因组副本,它在评估人类健康风险中的应用使人们越来越多。本研究通过QPCR和基于培养的方法研究了肺炎乳杆菌测量的关系,旨在建立QPCR与培养的浓度比率,以告知相关的健康风险。合格的研究使用成对水样品中的分子和基于培养的方法收集了有关肺炎乳杆菌浓度的定量数据。我们开发了一个泊松对数正态比率模型和一个随机效应荟萃分析模型,以分析跨站点内部和跨站点的QPCR培养比的变化。在系统评价中的17项研究中,有7项,包括23个特定地点数据集,用于荟萃分析。我们的发现表明这些比率通常从1:1到100:1不等,在所有地点的比率接近1:1。因此,采用默认的1:1转换因子似乎是必要的,作为一种谨慎的方法,将QPCR浓度转换为可培养的浓度,以用于健康风险模型,例如量化微生物风险评估(QMRA)。如果这种方法可能过于保守,则可活力-QPCR可以提高基于QPCR的QMRA的准确性。标准化QPCR和基于培养的方法以及影响肺炎乳杆菌可培养性的特定地点环境因素将改善对两种方法之间关系的理解。此处介绍的比率模型超出了简单的相关性分析,从而促进了关系中时间和空间异质性的研究。该分析是QMRA和分子生物学整合的一步,针对肺炎乳杆菌的框架适用于在环境中监测的其他病原体。
储存和稳定性: qPCR 提取质控采用干冰运输。到货后储存于 -80°C 下,以获得最佳稳定性。应避免反复冻融循环。 运输过程中解冻不影响产品性能。每次解冻后应混合 / 平衡溶液以避免分相。 有效期: 在外包装盒标签上的有效期内,在推荐条件下储存并正确处理时,试剂盒可保持完整活性。 安全预防措施: 处理试剂前请阅读并理解 SDS (安全数据表)。首次发货时提供 SDS 的纸质版文件,此后可应要求提 供。 质控: Meridian 遵守 ISO 13485 质量管理体系运行。 qPCR 提取质控试剂及其组分在活性、持续合成能力、效 率、热激活、灵敏度、无核酸酶污染和无核酸污染等方面均经过广泛测试。 注: 仅供科研或进一步生产使用。
可风干血液直扩 RNA/DNA qPCR 预混液采用蓝冰运输。到货后储存于 -20°C 下,以获得 最佳稳定性。应避免反复冻融循环。运输过程中解冻不影响产品性能。每次解冻后应混合 / 平衡溶液 以避免分相。 有效期: 在外包装盒标签上的有效期内,在推荐条件下储存并正确处理时,试剂盒可保持完整活性。 安全预防措施: 处理试剂前请阅读并理解 SDS (安全数据表)。首次发货时提供 SDS 的纸质版文件,此后可应要求提 供。 质量控制: Meridian 遵守 ISO 13485 质量管理体系运行。 Air-Dryable