成功地,我们使用LFB开发了整个安装染色方案,以染色斑马鱼模型髓鞘和神经细胞。我们已经优化了LFB在整个生物体中穿透中枢神经系统的细胞成分。我们开发的染色方法成功地突出了斑马鱼发育中的大脑的神经解剖学。使用斑马鱼幼虫的LFB髓磷脂染色程序的流程图如图1所示。此外,我们的修改协议还达到了斑马鱼大脑结构的整个固定染色,而无需构成样品结构。我们在斑马鱼标本中使用了4%的常规固定剂(常规固定剂)。在固定过程之前,用蛋白酶K处理斑马鱼样品。蛋白酶K处理可显着改善污渍渗透到整个固定标本中。之后,蛋白酶K处理斑马鱼在4°C下放置在固定剂中过夜。对于其他透化,我们使用Triton X-100洗涤剂来改善染色渗透,而不会影响固定样品的结构形态。在使用卢克索快蓝色和甲三角紫的斑马鱼标本的染色过程中显示(图2)。
在凝胶制备过程中,使用浓度为 1.5% 的 TBE 缓冲液 (Tris-Borate-EDTA) 琼脂糖作为核酸电泳的基质。采用了两种不同的方法,以适应染色技术。为了使用 GelRed® 进行电泳后染色,在不添加任何类型的染料的情况下制备凝胶,然后将染料与浓度为 1:9 的上样缓冲液混合。使用该混合物将样品上样到琼脂糖凝胶中,使用 2ul 缓冲液 + GelRed® 和 6ul 扩增的 PCR 产物。然而,为了染色预电泳凝胶,通过预染色将溴化乙锭掺入琼脂糖中。这是通过在融化后将 0.5 μg/mL 的 EtBR 添加到 100 mL 琼脂糖中来实现的。在这两种方法中,电泳技术都是在以下条件下进行的
摘要:开发了评估黑虎虾(Penaeus monodon)免疫刺激剂功效的新方法。试验虾饲喂 2% 或 4% 酵母提取物 (YE) 涂层饲料,而对照组饲喂无涂层饲料。喂养 4 周后,对单只虾进行总血细胞计数 (THC)、颗粒血细胞 (GH) 数量和细菌清除率评估。对于血细胞计数,在室温下用 50% 乙醇中的 1.2% 玫瑰红对福尔马林固定的血淋巴染色 20 分钟。一部分混合物用血细胞计数器进行 THC 计数,一部分涂在显微镜载玻片上晾干,然后用苏木精复染进行 GH 计数。通过这种技术,可以获得高质量的涂片以进行准确的分类计数。细菌清除试验用于评估体液和细胞防御机制的总体效果。每只虾肌肉注射 1 × 10 8 个哈维氏弧菌,注射后 0、15、30 和 60 分钟收集抗凝血淋巴,在 TCBS 琼脂上进行四次滴数计数(20 µl)。饲喂 4% YE 的虾的总血细胞计数显著高于(p < 0.05)饲喂无涂层饲料的虾。饲喂 YE 的虾的颗粒细胞百分比和细菌清除率高于饲喂对照饲料的虾。这两种方法可以简单快速地比较虾组抗菌防御能力的差异。
中性粒细胞广泛分为常规中性粒细胞(PMN)和低密度粒细胞(LDGS)。ldgs在产生中性粒细胞外陷阱(NETS)时比PMN更好,这可能有助于自身免疫性疾病的病理。我们假设LDG和PMN在支持净产生的不受限制的NE水平上有所不同。在这里,我们表明牛皮癣的个体含有较高水平的LDG,与PMN相比,LDGS对其抑制剂SLPI显示出更高的NE染色和较低的染色。血液来源的LDG和PMN之间的异质性有些让人联想到在牛皮癣皮肤中观察到的NE和SLPI染色模式的差异。LDG和PMN中NE和SLPI的独特染色不是由于其蛋白质水平的差异而引起的,也不表现在LDG中NE的较高的总蛋白水解活性中。相反,它可能取决于这些蛋白质的不同胞质螯合。LDG和PMN中NE和SLPI的分歧,与这些细胞对皮肤化学诱导剂的迁移反应的改变相吻合。总体上,差异性NE和SLPI染色确定了循环和皮肤纤维膜中性粒细胞的共同属性,这可能引导二粒粒细胞迁移到不同的皮肤区域并确定LDGS介导的皮肤病理学的定位。
材料和方法:本研究使用 14 个月大的新西兰兔的脑组织。将脑组织横向切片,以使其适合组织学程序。为此,将脑组织放在毫米纸上,切成三等份。将获得的样本从同一侧从头到尾切成 10μm 厚,并用六种染色方法对载玻片进行染色。通过显微镜将每张载玻片拍摄为 jpeg 格式。将获得的切片图像传输到 Image J 程序以估计其面积。使用李克特量表调查染色方法是否适合确定脑中灰质和白质以及细胞群的边界。作为这些程序的结果,获得的数据的统计结果以表格和图形呈现。
3D器官建模的新兴领域遇到了几个成像问题,尤其与染色过程中抗原检索和样品丢失有关。由于其紧凑的形状,几种抗体无法穿透完整的类器官或球体。可以通过石蜡包含在5μm处进行Orga-NOID的组织学来接近生物疾病。然而,为了充分理解器官行为,包括细胞组织,细胞外基质结构及其对处理的反应,3D成像是必不可少的。在这里,我们提出了一个简单的工作流程,允许(1)通过较高的步骤进行免疫染色,(2)预先确定器官的完整形状,((3)样品固定在焦平面中,可用于高分辨率/短工作距离镜头,以及(4)最小化珍贵材料损失的风险。
Figure 1 Sterilisation method for tools and media ……………………………………….. 1 Figure 2 Laminar Air Flow …………………………………………………………………… 4 Figure 3 Culture transfer technique (subculture) …………………………………….…….6图4划痕方法中的四个象限技术…………………………………………8图5媒体上细菌文化的特征…………………………………………………………………………………………………………………………10图6细菌的形状和排列…………………………………………………………………………。13图7简单的染色程序………………………………………………………………………………14 Figure 9 Negative staining with nigrosin: basil 1000x.……………………………….…… 15 Figure 10 Negative staining procedure …………………………………………..………… 16 Figure 11 Structure of actinomycete spores ….……………………….……………..…….19图12实验室培养基上的酵母菌菌落生长……。…………………………………………21图13(a)(a)八孢子虫酵母菌细胞的微观结构和(b)S。cerevisiae细胞形成由营养生殖产生的芽产生的芽………………………………
1。了解微生物学作为科学学科的范围和相关性。2。确定正确类型的显微镜和染色。3。获得有关微生物的各种分类的知识。4。研究微生物的形态和结构。5。熟悉各种灭菌技术。单元1:微生物学历史 - 微生物学的定义和范围;微生物学史;微生物生命的起源 - 自发产生的理论;安东·范·莱恩霍克(Anton Van Leewenhoek),路易·巴斯德(Louis Pasteur),罗伯特·科赫(Robert Koch),约瑟夫·李斯特(Joseph Lister),托马斯·J·伯里尔(Thomas J.内共生理论;微生物学与未来。单元2:显微镜和染色 - 显微镜 - 简单,化合物,暗场,相对比,荧光和电子显微镜;染色方法和原理 - 简单,差异(克染色)和特殊的染色技术(酸快速染色,孢子染色,胶囊染色,鞭毛染色,阴性染色,染色,代码颗粒的染色)。
1. 常见微生物实验室仪器的介绍、操作、注意事项和使用:(生物安全柜、高压灭菌器、培养箱、BOD 培养箱、热风炉、光学显微镜)。2. 不同培养基的制备和接种技术——营养琼脂、营养肉汤、麦康凯琼脂、EMB 琼脂、萨巴拉德氯霉素琼脂、YEPD 琼脂、BG-11。3. 在空气、土壤和水中取样并计数活体微生物。4. 通过划线法、涂布法、倾注平板法分离细菌纯培养物。5. 染色技术-[单染色、革兰氏染色、抗酸染色、荚膜染色、内孢子染色、负染色、真菌染色] 6. 用悬滴法观察细菌的运动性。7. 显微测量-千分尺(目镜和载物台)。
单位 - 3:微生物技术14 H培养基:细菌的营养需求,培养基的成分。天然和合成媒体,化学定义的培养基,复杂的培养基,选择性,差异和丰富的培养基。纯文化方法:细菌的隔离,培养,鉴定和保存以及伴侣稀释和镀铜方法(倒,散布,条纹)。厌氧菌的培养。纯文化的维护和保存/库存。染色和染色技术:染色原理,细菌染色技术 - 简单染色和差异染色(革兰氏染色和抗酸性染色)。类型的污渍简单污渍和差分污渍。细菌计数技术 - 板(菌落)计数和浊度法。