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价格 B0202S—T4 DNA 连接酶反应缓冲液 29.00 美元 27.84 美元 M0319L—耐热 5' App DNA/RNA 连接酶 336.00 美元 322.56 美元 E2610L—5' DNA 腺苷酸化试剂盒 50 次反应 563.00 美元 540.48 美元 M0486L—模板转换 RT 酶混合物 236.00 美元 226.56 美元 E5520S—NEBuilder HiFi DNA 组装克隆试剂盒 212.00 美元 203.52 美元 M0271L—快速加载 Taq 2X 预混液 277.00 美元 265.92 美元 R0176S--DpnI 77.00 美元 73.92 美元 N4040S—M13mp18 单链 DNA 50.00 美元$48.00 M2401S—ET SSB $190.00 $182.40 C3019H—10-beta 感受态大肠杆菌 (H. Eff) $269.00 $258.24 R0507S--ApaLI $77.00 $73.92 E2610S--5' DNA 腺苷酸化试剂盒 10 次反应 $140.00 $134.40 M0251S—T7 RNA 聚合酶 $75.00 $72.00 R0630S--AsiSI $80.00 $76.80 M0492L—Q5 高保真 2X 预混液 $868.00 $833.28 R3133M—SpeI-HF $331.00 $317.76 C3040H—NEB 稳定感受态大肠杆菌 381.00 美元 365.76 美元 M0530S—Phusion 高保真 DNA 聚合酶 131.00 美元 125.76 美元 E5360S—NEBExpress 无细胞大肠杆菌蛋白质合成系统 244.00 美元 234.24 美元 E2621S—NEBuilder HiFi DNA 组装主混合物 180.00 美元 172.80 美元 您可以随时通过 stockroom@utexas.edu 联系我们，查看任何特定商品的价格。
NAR突破性文章-Lirias
An enzymatic method has been successfully es- tablished enabling the generation of partially base- modified RNA (previously named RZA) constructs, in which all G residues were replaced by isomorphic fluorescent thienoguanosine ( th G) analogs, as well as fully modified RZA featuring th G, 5-bromocytosine, 7- deazaadenine and 5-氯酸。被发现的Extigive RZA的转录效率从使用各种T7 RNA聚合酶变体中受益。此外，可以通过TAQ DNA聚合酶以及其他三个基型型核苷酸将D Th G掺入PCR产物中。值得注意的是，在体外CRISPR- CAS9裂解测定中，获得的RNA产物以及与5-溴细胞的RNA产物一起与天然SGRNA一样有效地发挥作用。n 1-甲基丙啶也被证明是尿苷的忠实非典型的肠道构造，当掺入SGRNA时，可以指导Cas9核酸酶切割。7-二氮嘌呤的CAS9失活表明，在SGRNA和PAM位点，嘌呤的7-氮原子的重要性对于实现了有效的Cas9裂解。与SGRNA-蛋白质和PAM的显着性讨论了这项研究的其他方面 - 蛋白相互作用，这些相互作用并未由Cas9 – Sgrna -DNA复杂晶体结构突出显示。这些发现 -
工程化蛋氨酸腺苷转移酶级联用于活细胞中单个 DNA 甲基化的代谢标记
摘要：甲基化是一种广泛存在的天然修饰，具有多种调节和结构功能，由大量 S -腺苷-L -蛋氨酸 (AdoMet) 依赖性甲基转移酶 (MTases) 进行。AdoMet 辅因子由多聚体蛋氨酸腺苷转移酶 (MAT) 家族从 L -蛋氨酸 (Met) 和 ATP 产生。为了推进机制和功能研究，已经开发出重新利用 MAT 和 MTase 反应以接受来自相应前体的可转移基团的扩展版本的策略。在这里，我们使用结构引导的小鼠 MAT2A 工程，以便从合成的蛋氨酸类似物 S -(6-叠氮己-2-炔基)-L -同型半胱氨酸 (N 3 -Met) 生物催化生产扩展的 AdoMet 类似物 Ado-6-叠氮化物。三种工程化的 MAT2A 变体表现出对延伸类似物的催化能力，并且在没有和存在竞争性 Met 的情况下，都支持与 M. Taq I 和小鼠 DNMT1 的工程化变体在级联反应中进行 DNA 衍生化。然后，我们使用 CRISPR-Cas 基因组编辑将两种工程化变体作为 MAT2A-DNMT1 级联安装在小鼠胚胎干细胞中。所得细胞系在暴露于 N 3 -Met 且存在生理水平的 Met 时，保持正常的活力和 DNA 甲基化水平，并显示出 Dnmt1 依赖的 DNA 修饰和延伸叠氮化物标签。这首次展示了一种用于生物合成生产延伸 AdoMet 类似物的遗传稳定系统，该系统能够在活哺乳动物细胞中对 DNMT 特异性甲基化组进行轻度代谢标记。■ 简介
以及美登素衍生药物
针对癌细胞上过度表达的受体的抗体药物偶联物治疗已在多种癌症的临床应用中得到充分证实，然而，经常发生的耐药性促使人们开发新药。我们最近研究了一种药物偶联物，它由针对人类表皮生长因子受体 2 (HER2) 的亲和体分子组成，与白蛋白结合域 (ABD) 融合以延长半衰期，并装载有细胞毒性美登素衍生物 DM1。在本研究中，我们通过将 DM1 与作为药物偶联物的奥瑞他汀 MMAE 和 MMAF 进行比较，研究了细胞毒性有效载荷对结合特性、细胞毒性和生物分布的影响。所有构建体都具有与 HER2、人类和小鼠白蛋白的特异性和高亲和力结合，值在低至亚 nM 范围内。Z HER2 -ABD-mcMMAF 对几种 HER2 过度表达细胞系表现出最强的细胞毒性作用。在一项实验性治疗研究中，以 2.9 mg/kg 剂量使用 MMAF 为基础的结合物，使 50% 携带 HER2 过度表达 SKOV3 肿瘤的 BALB/c nu/nu 小鼠的肿瘤完全消退，而相同剂量的 Z HER2 -ABD-mcDM1 仅提供中等抗肿瘤效果。与非靶向 Z Taq -ABD-mcMMAF 对照的比较表明了 HER2 靶向特异性。总之，体外强效细胞毒性、体内正常器官最小吸收量和有效递送至肿瘤相结合，使 Z HER2 -ABD- mcMMAF 具有优越的抗肿瘤效果，同时保持了良好的毒性特征，未观察到不良反应。
引文：Pietra D、Brisci A、Rumi E、Boggi S、Elena C、Pietrelli A、Bordoni R、Ferrari M、Passamonti F、De Bellis G、Cremonesi L 和 Cazzola M. Dee
对于 HRM 检测，采用补充表 S1 中报告的优化内含子引物。PCR 在 20 μ L 中进行，其中包含 100 ng DNA、0.5 单位 HotStart Taq 聚合酶以及 1x 缓冲液（Qiagen，德国希尔登）、1.5 mM MgCl 2、800 μ M dNTP、300 nM 每种引物和 1x EvaGreen（Idaho Technologies，犹他州盐湖城）作为插入染料。循环和 HRM 分析在 Rotor-Gene ™ 6000 实时分析仪上进行，采用以下热方案：95°C 持续 15 分钟（一个循环）；95°C 持续 30 秒，55°C 持续 30 秒，72°C 持续 30 秒（50 个循环）；72°C 持续 10 分钟（一个循环）；熔化温度从 85°C 升至 95°C，每秒上升 0.1°C。使用相关的 Rotor-Gene ™ 6000 系列软件 (v1.7.87) 分析数据。标准化条在前导范围的 88°C 和 88.5°C 之间，在尾随范围的 92.5°C 和 93°C 之间，置信阈值为 90%：如果 HRM 图超出了指定参考基因型的置信范围，则软件会将样本识别为变异。图 S1A 显示了健康受试者和 3 名 MPN 患者的 DNA 样本的 HRM 图谱，这些样本先前已通过微电子微芯片分析进行了基因分型（未显示数据）。患者 PV02_113 为 MPL (W515K) 纯合子（TGG>AAG 转换），其 HRM 曲线相对于野生型序列向左移向较低温度，这与纯合变体导致熔解温度 (Tm) 降低的预期一致。患者 PV04_494 为 MPL (W515A) 纯合子（TGG>GCG 转换）等位基因
TAQ-B DNA聚合酶
蛋白质的来源：一种重组大肠杆菌菌株，携带来自嗜热有机体Thermus aquaticus YT-1的TAQ DNA聚合酶基因。单位定义：1个单位定义为将在75°C的30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸 - 不溶性材料的酶。分子量：93,910 Daltons质量控制分析：使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，25 mM TAPS（pH 9.3），50 mM KCl，2.0mm MGCL2，1 mM DTT，3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。 在75°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。 A8.25-A8.26）。 蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。 通过浓缩和稀释酶溶液的SDS-PAGE评估物理纯度，然后进行银色染色检测。 通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。 单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。 双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。 双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，25 mM TAPS（pH 9.3），50 mM KCl，2.0mm MGCL2，1 mM DTT，3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。在75°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。A8.25-A8.26）。蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。物理纯度，然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。
碱基编辑酶 APOBEC3A 以低效率和高选择性催化 RNA 中的胞嘧啶脱氨
A3A 和 eA3A 表达。A3A 表达构建体 (Addgene #109231) 之前已有描述，可用于纯化 A3A 作为融合蛋白 (MBP-A3A-His)，可进一步加工以生成分离的 A3A 结构域。32,33 对于 eA3A (A3A-N57G)，N57G 突变是通过 Q5 定点诱变 (New England Biolabs, NEB) 引入的。A3A 和 eA3A 构建体的细菌表达之前已有详细描述。 33 将纯化的 MBP-A3A-His、MBP-eA3A-His 或分离的 A3A 在 50 mM Tris-Cl（pH 7.5）、50 mM NaCl、10% 甘油、0.5 mM DTT 和 0.01% Tween-20 中透析过夜，并使用 BSA 标准曲线确定蛋白质浓度。基于 SwaI 的脱氨酶对 ssDNA 和嵌合底物的活性。5'-荧光素 (FAM) 荧光标记的底物 S35-dC 或具有单个靶核糖胞嘧啶的匹配底物（在其他 DNA 骨架中）（S35-rC）由 Integrated DNA Technologies (IDT) 合成，以及相关产品对照（S35-dU 和 S35-rU）。在最佳 A3A 反应条件（最终为 20 mM 琥珀酸：NaH 2 PO 4：甘氨酸 (SPG) 缓冲液 pH 5.5，0.1% Tween-20）下，用 6 倍稀释的未标记 A3A（从 1 µM 到 4 pM）处理 100 µM 寡核苷酸。反应在 37 ˚C 下进行 30 分钟，然后终止（95 ˚C，10 分钟）。然后加入 200 nM 互补链并退火。加入 SwaI (NEB)，在室温下消化过夜。加入甲酰胺上样缓冲液，样品加热变性（95 ˚C，20 分钟），然后在 50 ˚C 下在 20% 变性 TBE/尿素聚丙烯酰胺凝胶上运行。使用 Typhoon 成像仪（GE Healthcare）上的 FAM 滤光片对凝胶进行成像。使用 ImageJ 中的面积量化工具进行定量分析。720 碱基对 ssDNA 底物的合成。为了生成 ssDNA，使用 720 bp gBlock 基因片段 (IDT) 作为模板 (补充图 2a)，并使用 Taq 聚合酶 (NEB) 进行扩增，采用指数后线性 (LATE) PCR 反应方案，该方案采用相对于磷酸化的反向引物过量的正向引物。32 对反应物进行纯化 (NucleoSpin、Fisher)，然后在 37 ˚C 下用 核酸外切酶处理 1 小时以降解磷酸化链，然后进行热失活 (90 ˚C，10 分钟)。然后将产物在 2% 琼脂糖凝胶上运行，并使用凝胶 DNA 回收试剂盒 (Zymoclean) 回收 ssDNA。通过乙醇沉淀进一步纯化 ssDNA，并使用 Qubit ® 荧光计 (ThermoFisher) 测量其浓度。对于一个重复，ssDNA 以大分子寡核苷酸 (IDT) 的形式获得，并通过乙醇沉淀进一步纯化。720 聚体 RNA 底物的合成。使用 720 bp 基因块 (IDT) dsDNA 作为模板，在推荐条件下使用 TranscriptAid Enzyme Mix (ThermoFisher) 通过体外转录生成 RNA，并在 37 ˚C 下孵育两小时。然后通过苯酚-氯仿提取和乙醇沉淀纯化 RNA。将样品重新悬浮在无核酸酶的水中，并进一步用 MspI、XbaI 和 AclI 限制性酶 (NEB) 处理以消化任何剩余的 DNA 模板。在 37 ˚C 下孵育 1 小时后，使用 RNA Clean and Concentrator-5 试剂盒 (Zymo Research) 纯化 RNA。为了进一步确保完全去除模板 DNA，在 37 ˚C 下用 DNase I (Ambion) 处理 RNA 30 分钟。重复纯化 (RNA Clean and Concentrator-5)，并使用 Qubit ® 荧光计测量纯化 RNA 的浓度。通过“预测二级结构网络”预测 720 聚体中几个中尺度区域的二级结构
安捷伦 2024 定价
价格 200123 TG1 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 279.00 美元 200129 XL1-红色感受态细胞 5 x 0.2 毫升 511.00 美元 200130 XL1-蓝色亚克隆级感受态细胞 8 x 0.5 毫升 105.00 美元 200131 BL21(DE3) 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 141.00 美元 200132 BL21(DE3) pLysS 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 202.00 美元 200133 BL21 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 202.00 美元 200134 TKB1 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 471.00 美元200150 XL2-Blue 超感受态细胞 10 x 0.1 毫升 209.00 美元 200151 XL2-Blue MRF' 超感受态细胞 10 x 0.1 毫升 299.00 美元 200152 SURE 2 超感受态细胞 10 x 0.1 毫升 188.00 美元 200154 BJ5183 电穿孔感受态细胞 5x 100 微升 321.00 美元 200157 BJ5183-AD-1 电穿孔感受态细胞 5x 100 微升 411.00 美元 200158 XL1-Blue MRF' 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 279.00 美元 200159 EletroTen-Blue电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 280.00 美元 200160 ABLE 电穿孔感受态细胞试剂盒 1 套 480.00 美元 200172 ABLE K 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 303.00 美元 200207 Gigapack III XL 包装提取物 4 次反应 441.00 美元 200209 Gigapack III XL 包装提取物 11 次反应 881.00 美元 200221 Transpack 包装提取物，100 次反应 100 次反应 4,234.00 美元 200227 SURE 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 278.00 美元 200228 XL1-Blue 电穿孔感受态细胞 5 x 0.1 毫升 195.00 美元200229 XL1-Blue MR 超级感受态细胞 5 x 0.2 毫升 179.00 美元 200231 SCSI 超级感受态细胞 5 x 0.2 毫升 258.00 美元 200232 AG1 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 186.00 美元 200234 JM101 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 186.00 美元 200235 JM109 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 186.00 美元 200236 XL1-Blue 超级感受态细胞 5 x 0.2 毫升 179.00 美元 200238 SURE 感受态细胞 5 x 0.2 毫升 269.00 美元 200239 JM110 感受态细胞5 x 0.2 mL 219.00 $ 200247 SCS110 感受态细胞 5 x 0.2 mL 219.00 $ 200249 XL1-Blue 感受态细胞 5 x 0.2 mL 124.00 $ 200314 XL10-Gold 超感受态细胞，5 x 100 ul 5 x 0.1 mL 148.00 $ 200315 XL10-Gold 超感受态细胞，10 x 100 ul 10 x 0.1 mL 212.00 $ 200415 脱氧核苷酸混合物，PCR 级 400 ul 151.00 $ 200435 10x Taq DNA 聚合酶缓冲液 10 mL 119.00 $ 200436 AffinityScript 多温度 cDNA 合成试剂盒 50 次反应 242.00 美元 200473 RAT 抗 DYKDDDDK 标签抗体，200 ug 200 ug 235.00 美元 200474 RAT 抗 DYKDDDDK 标签抗体，1 mg 1 mg 399.00 美元 200514 QuikChange 多位点定向诱变试剂盒 30 次反应 1,188.00 美元 200515 QuikChange 多位点定向诱变试剂盒 10 次反应 465.00 美元 200516 QuikChange XL 位点定向诱变试剂盒 30 次反应 855.00 美元 200517 QuikChange XL 位点定向诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元200518 QuikChange 定点诱变试剂盒 30 次反应 608.00 美元 200519 QuikChange 定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200521 QuikChange II XL 定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200522 QuikChange II XL 定点诱变试剂盒 30 次反应 608.00 美元 200523 QuikChange II 定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200524 QuikChange II 定点诱变试剂盒，30 次反应 608.00 美元 200550 GeneMorph II 随机诱变试剂盒 1 套 566.00 美元 200552 GeneMorph II EZClone 域诱变试剂盒 1 套 425.00 美元 200555 QuikChange II-E（电穿孔）定点诱变试剂盒 10 次反应 239.00 美元 200600 DNA 提取试剂盒 1 套 371.00 美元 200820 AccuScript 高保真第一链 cDNA 合成试剂盒 1 套 359.00 美元 201115 Kb DNA Ladder 250 ug 214.00 美元 201190 鲑鱼精子 DNA 1 套 273.00 美元 201222 MiracleHyb高性能杂交溶液，250 mL 250 mL 160.00 $ 204130 GeneJammer 转染试剂，1 mL 1 mL 366.00 $
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