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World File Search SystemtracrRNA
IDT Alt-R Sp HiFi Cas9 核酸酶 V3 (CRS-10083-FL 03/19)
图 1. Alt-R Sp HiFi Cas9 Nuclease V3 促进近野生型靶向编辑效力并显著减少脱靶位点编辑。RNP 复合物由 Alt-R Sp Cas9 Nuclease V3 或 Alt-R Sp HiFi Cas9 Nuclease V3 与靶向 EMX1 基因的 Alt-R crRNA:tracrRNA 复合物结合形成。RNP 复合物 (4 µM) 通过 Nucleofection™ 方法 (Lonza) 递送到 HEK-293 细胞中。通过下一代测序 (rhAmpSeq 扩增子测序，IDT) 测量了靶位点和 9 个已知脱靶位点处的插入/缺失形成 (在 y 轴上以对数标度表示)。
crispr/cas9介导的基因编辑
简介评论：引言有效地介绍了CRISPR/CAS9系统的历史背景，从而将其从Escherichia Coli的发现成为其作为基因编辑工具的发展。Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier的贡献得到了充分的详细说明，强调了他们独立的研究工作和最终的合作。CRISPR机制的解释是彻底的，涵盖了关键组成部分，例如Cas9蛋白，引导RNA，tracrrna和crrna。基因编辑过程的分步分解，包括DNA裂解，序列靶向和基因剪接，为理解系统的功能提供了强大的基础。提及PAM序列及其在特异性中的作用可确保在解释目标位点选择方面的清晰度。
2020 年诺贝尔化学奖
研究人员需要修改细胞中的基因才能了解生命的内部运作，这项工作曾经非常耗时，有时甚至不可能完成。细胞基因组就像一本数千卷的巨型百科全书，因此定位特定基因并重写其代码比大海捞针还要困难。然而，多亏了基因剪刀 CRISPR/Cas9，现在只需几周时间就能改变基因代码。正如科学界常常出现的情况一样，这些基因剪刀的发现是出乎意料的。Emmanuelle Charpentier 在研究一种致病细菌化脓性链球菌时发现了一种以前未知的分子 tracrRNA，而这种分子原来是细菌古老的免疫系统 CRISPR/Cas 的重要组成部分。
优化的 HDR 介导的 K-荧光蛋白敲入...
图 2：在 K-562 细胞中通过电穿孔优化 HDR 介导的报告基因敲入。A. LMNA -EGFP 供体质粒单独电穿孔，浓度增加，显示非特异性 EGFP 表达量较低。Cas9 蛋白：crRNA：tracrRNA 电穿孔，LMNA -EGFP 供体质粒浓度增加，显示 EGFP 表达相关增加。B. 放大倍数增加后，HDR 介导的敲入样本中 EGFP 表达的定位与 LMNA 的预期一致，位于细胞核中，并与 Hoechst 染色共定位。C. HDR 介导的敲入细胞群的流式细胞术分析显示，随着 DNA 供体质粒数量的增加，EGFP 表达增加高达 32%。单独 DNA 供体质粒对照的相应分析显示所有剂量的 EGFP 表达均低于 0.5%（未显示数据）。
组合 CRISPR 筛选的比较优化
组合 CRISPR 技术已成为一种变革性方法，可系统地探测冗余基因对的遗传相互作用和依赖性。然而，不同的功能基因组工具在多路复用 sgRNA 方面的表现差异很大。在这里，我们生成并基准测试了十个不同的组合 CRISPR 文库，这些文库以同源物对为目标，以优化双基因敲除筛选。评估了由双化脓性链球菌 Cas9 (spCas9)、正交 spCas9 和金黄色葡萄球菌 (saCas9) 以及 Acidaminococcus 的增强型 Cas12a 组成的文库。我们证明了来自 spCas9 的替代 tracrRNA 序列的组合始终表现出优越的效应大小和 sgRNA 之间的位置平衡，这是一种强大的组合方法来分析多个基因的遗传相互作用。
crispr.pdf的生成
使用表达人OCT4，KLF4的综合质粒对健康的24岁女供体的人类皮肤成纤维细胞进行了重编程； L-MYC（OSKM），SOX2和LIN28（Okita等，2011），并进行了多个段落。然后使用基于蛋白质的CRISPR/CAS9基因组编辑方法来生成纯合的KIF1C基因敲除线（资源表）生成纯合的KIF1C敲除线（资源表）。首先，IPSC-CO用KIF1C基因的两个核糖核蛋白（RNP）复合物核成核成核。荧光标记的tracrrna（atto550）可用于选择通过荧光激活的细胞分选（FACS）成功地培养RNP复合物的细胞。然后，在单细胞播种后，手动采摘菌落，通过PCR筛选并扩展了几段段落。。
刺激响应指南的化学合成RNA用于有条件控制CRISPR-CAS9基因编辑
作为RNA通常与DNA相比具有较短的半衰期，因此这些递送方法与较低的o级效应相关。9,10，化学修改的GRNA，11 - 15，以单个指南RNA（SGRNA）11的形式或两个成分的CRISPR RNA（crRNA）和反式激活CRRNNA（tracrrna），请积极研究12。为了促进精确的细胞内应用，例如基因编辑和调节，通过将RNA寡核苷酸为刺激性响应性修饰阳离子配备有条件地控制GRNA活性，包括对紫外线（UV）光线（UV）Light，16 - 30 Redox条件，31,32 Redox Cresement，31,32和Bio-orthal ofthalognogalognognognogalognognognognognognognogys和Bio-orthalogansognognognognognognogansognognognognognognognogansognogys。33 - 35这些模拟阳离子可以通过核糖2 0 -OH，18,24 - 26,31,34 - 37个核碱，17,21,27 - 29和内部或末端接头引入RNA。19,20,22,23,30,33,38
Alt -R CRISPR系统 - NET
*我们保证，使用Alt-R-R Crispr-Cas9指南RNA（CRRNA：TRACRRNA DUPLEX或SGRNA）和Alt-R S.P.cas9核酸酶或Alt-R S.P.HIFI Cas9核酸酶。 编辑分析必须在DNA水平上，例如使用Alt-R基因组编辑检测试剂盒或DNA测序。 如果未在成功的指导RNA中观察到成功的编辑，而在适当的阳性控制成功的同时，将批准对先前设计的ALT-R CRISPR-CAS9指南RNA进行一次“无成本”替换。 此保证不会扩展到任何替代产品，或任何其他发生或附带费用或费用。HIFI Cas9核酸酶。编辑分析必须在DNA水平上，例如使用Alt-R基因组编辑检测试剂盒或DNA测序。如果未在成功的指导RNA中观察到成功的编辑，而在适当的阳性控制成功的同时，将批准对先前设计的ALT-R CRISPR-CAS9指南RNA进行一次“无成本”替换。此保证不会扩展到任何替代产品，或任何其他发生或附带费用或费用。
Alt-R CRISPR-CAS9系统： - 核糖核蛋白的输送...
*我们保证，使用Alt-R-R Crispr-Cas9指南RNA（CRRNA：TRACRRNA DUPLEX或SGRNA）和Alt-R S.P.cas9核酸酶或Alt-R S.P.HIFI Cas9核酸酶。 编辑分析必须在DNA水平上，例如使用Alt-R基因组编辑检测试剂盒或DNA测序。 如果未在成功的指导RNA中观察到成功的编辑，而在适当的阳性控制成功的同时，将批准对先前设计的ALT-R CRISPR-CAS9指南RNA进行一次“无成本”替换。 此保证不会扩展到任何替代产品，或任何其他发生或附带费用或费用。HIFI Cas9核酸酶。编辑分析必须在DNA水平上，例如使用Alt-R基因组编辑检测试剂盒或DNA测序。如果未在成功的指导RNA中观察到成功的编辑，而在适当的阳性控制成功的同时，将批准对先前设计的ALT-R CRISPR-CAS9指南RNA进行一次“无成本”替换。此保证不会扩展到任何替代产品，或任何其他发生或附带费用或费用。