lutropin alfa是一种重组人黄体激素(R-HLH),该激素(R-HLH)源自中国仓鼠卵巢细胞系,已通过添加编码LHα-和β-链的人类基因进行了修改。R-HLH是一种人促性腺营养素激素,由指定为α-和β-亚基的两个非共价,非相同的蛋白质成分组成。这是一种大约29,000 da的分子量(MW)的糖蛋白激素。α-亚基是促性腺激素激素家族的所有四个成员共有的。α-亚基由92个氨基酸形成,并具有两个N-连接糖基化的位点(ASN 52和ASN 78)。五种二硫键有助于其三级结构。激素特异性的β-亚基长度为121个氨基酸,并具有一个N-连接糖基化的单个位点(ASN 30)。它包含六个二硫键。
注意6·通过添加能够破坏二硫键键的还原剂(例如ß-甲醇(ß -me)或二硫代硫醇(DTT))的减少剂,从而污染了污染的RNass。为了促进二硫键的还原,使用前,每1 mL缓冲液DRP加入10 µLß -ME。添加ß -ME后,DRP缓冲液保持稳定1个月。使用前,每1 ml缓冲液在使用前,在RNase无rNase无水中添加10 µl [1 m] DTT的毒性但更昂贵的替代品。dtt在缓冲区DRP中不稳定,因此不得存储DTT-供应的DRP缓冲液等分试样。[1 M] DTT储备溶液在RNase无水酶中的工作等分试样必须存储在-20°C下,以保持稳定性。设置[1 M] DTT储备溶液(MW = 154.25 g mol -1),溶解1.54 g DTT每10 ml RNase无rNase无水,并将其存储在等分试样中以进行一次使用。
图 1 | 葡聚糖水二激酶 (GWD) 1 — gRNA 靶区的结构和完整等位基因序列。上图为外显子(方框)和包含碳水化合物结合模块 (CBM) 的区域的整体基因结构。左图:外显子 1 和内含子的核苷酸序列。右图:外显子 24 和 25,包括内含子。外显子以大写字母表示,并标明氨基酸序列。SPUD 数据库中包含的品种的小核苷酸多态性 (SNP) 以红色标记,Saturna 中发现的 SNP 以下划线表示。灰色箭头表示 gRNA(gA、gB、gC、gD、gE、gI、gJ、gK、gL 和 gM),其中 PAM 位点以粗体标记。红色箭头表示诊断性 IDAA PCR 引物。 “ CFATC ” 区域含有半胱氨酸,据推测该区域参与二硫键间或二硫键内形成,因此推测参与 GWD 活性的氧化还原状态调节,该区域以粗体标记。活性位点组氨酸残基也以粗体标记。
摘要 Proaerolysin 是由嗜水气单胞菌产生的一种细菌毒素,它特异性地与质膜上的 GPI 锚定蛋白结合,形成跨膜孔,导致细胞在几个小时内死亡。利用这种独特的特性,proaerolysin 被广泛用于阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH) 的诊断测试,这是一种由 PIGA 基因体细胞突变引起的疾病,该基因参与 GPI 锚的生物合成。此外,proaerolysin 还可作为基因操作中的反选择剂。尽管之前已经报道过 proaerolysin 的细菌表达和纯化,但由于缺乏对蛋白质稳定性至关重要的内部二硫键,产量较低。在这里,我们证明使用 Shuffle E. coli 菌株(它促进细胞质中二硫键的形成)可显著提高 proaerolysin 的溶解度和正确折叠。我们实现了高产量的 proaerolysin,从 50 ml 细菌培养物中可获得约 3 mg,纯度超过 99%。通过在小鼠胚胎干细胞 (mESC) 中进行测试,证实了重组 proaerolysin 的功能性,表明这种高产量生产方法为广泛的生物技术应用提供了可靠且经济高效的功能性 proaerolysin 来源。
摘要:MASP-1 和 MASP-2 是补体凝集素途径的关键激活蛋白酶。第一种特异性甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶 (MASP) 抑制剂已通过噬菌体展示从 14 个氨基酸向日葵胰蛋白酶抑制剂 (SFTI) 肽开发出来,产生了基于 SFTI 的 MASP 抑制剂 SFMI。在这里,我们展示了我们分析的 MASP-1/SFMI1 复合物的晶体结构,并将其与其他现有的 MASP-1/2 结构进行了比较。刚性骨架结构长期以来一直被认为是蛋白酶肽抑制剂的结构先决条件。我们发现围绕 P2 Thr 残基组织的疏水簇对于野生型 SFTI 的结构稳定性至关重要。我们还发现,相同的 P2 Thr 可阻止刚性 SFTI 样肽与两种 MASP 的底物结合裂隙结合,因为裂隙被大型守门酶环部分阻断。定向进化通过将 P2 Thr 替换为 Ser 消除了这一障碍,为 SFMI 提供了高度的结构可塑性,这对 MASP 抑制至关重要。为了更深入地了解基于 SFMI 的 MASP-2 抑制的结构标准,我们系统地修改了 MASP-2 特异性 SFMI2,方法是封端其两个末端并用不同长度的硫醚接头替换其二硫键。通过这样做,我们还旨在生成一种多功能支架,该支架可抵抗还原环境并在含有外肽酶的生物环境中具有更高的稳定性。我们发现,抗还原的二硫键取代的 L-2,3-二氨基丙酸 (Dap) 变体具有接近天然的效力。由于 MASP-2 与 COVID-19 患者危及生命的血栓形成有关,我们的合成、选择性 MASP-2 抑制剂可能成为相关的冠状病毒候选药物。■ 简介
由于其导热系数如此之高(30 W mK 1 ),因此来源广泛、价格低廉并且适合于批量填充。它应用于目前商业化的TIM(例如导热垫片和导热凝胶)以提高导热系数。然而,传统的热固性Al 2 O 3 /PDMS复合材料在使用过程中容易受损出现裂纹,损坏后材料的导热系数或其他功能会降低。自修复的概念来自于自然生物的愈合过程。材料在自我修复之后可以保持其性能。如果这些TIM具有自修复能力,可以自动修复其受到的损伤,将有助于长期使用以及增强可靠性和耐用性。材料固有的自修复能力主要通过动态可逆键实现,例如二硫键、20,21 Diels-Alder 反应、22,23
由于其导热系数如此之高(30 W mK 1 ),因此来源广泛、价格低廉并且适合于批量填充。它应用于目前商业化的TIM(例如导热垫片和导热凝胶)以提高导热系数。然而,传统的热固性Al 2 O 3 /PDMS复合材料在使用过程中容易受损出现裂纹,损坏后材料的导热系数或其他功能会降低。自修复的概念来自于自然生物的愈合过程。材料在自我修复之后可以保持其性能。如果这些TIM具有自修复能力,可以自动修复其受到的损伤,将有助于长期使用以及增强可靠性和耐用性。材料固有的自修复能力主要通过动态可逆键实现,例如二硫键、20,21 Diels-Alder 反应、22,23
硫氧还蛋白还原酶(TRXR)是含硒的吡啶核苷酸 - 二硫键氧化酶,以及与维持细胞氧化还原稳态有关的抗氧化剂硫氧还蛋白系统的一部分。1-3局部位于细胞质的TRXR:TRXR1的三种同工型,TRXR2和TRXR3位于线粒体。4所有TRXR同工型都催化了NADPH依赖性的氧化TRX和其他氧化蛋白二硫化物底物的还原,以及硒酸盐脂质氢过氧化物,维生素K和过氧化氢。1,2,4-7 TRXRS调节了几种氧化还原敏感的生物学过程,包括凋亡和细胞生长,增殖和生存,并与癌症,神经退行性疾病,慢性炎症性疾病,自身免疫性疾病和寄生虫的病理有关。4,8-10