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抗蛋白酶抑制剂的SARS-COV-2菌株的生成和评估
图3：在仓鼠模型中，针对野生型和抗性SARS-COV-2菌株组的抗病毒活性，该组的6个仓鼠被室内感染了10^4 TCID病毒。动物每天在0（未经处理的组），30或60 mg/kg的情况下每天口服两次。a）基于病毒基因组拷贝/g肺的感染后第3天（使用RT-QPCR分析测量），基于病毒RNA的产量（使用RT-QPCR分析测量）。b）在感染后第3天（使用TCID50测定法测量）在肺中表达的感染性滴度（用TCID50测定法测量）在肺中的病毒复制。c-d）疾病的临床过程（n = 6只动物/组）。在第n天进行的归一化重量如下：动物在第n天的初始体重的百分比。数据代表平均值±SD。双向统计分析，**和****表示和平均显着值低于未处理组的值，p值分别在0.001-0.01范围内，范围为0.001-0.01和较低至0.0001。
甲基强的松龙片 商品名：MEDROL® CDS...
致突变潜力：甲基强的松龙尚未正式评估其遗传毒性。但是，甲基强的松龙磺酸盐与甲基强的松龙结构相似，在鼠伤寒沙门氏菌中，浓度为 250 至 2,000 µg/板，无论是否经过代谢活化，或在使用中国仓鼠卵巢细胞进行的哺乳动物细胞基因突变试验中，浓度为 2,000 至 10,000 µg/mL，均不具有致突变性。甲基强的松龙舒普坦酸酯在浓度为 5 至 1,000 µg/mL 时，不会在原代大鼠肝细胞中诱导非计划 DNA 合成。此外，对已发表数据的审查表明，结构上与甲基泼尼松龙相似的法呢磺酸泼尼松龙 (PNF) 在鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌菌株中，无论是否经过代谢活化，在 312 至 5,000 µg/板的浓度下均不具有致突变性。在中国仓鼠成纤维细胞系中，在最高测试浓度 1,500 µg/mL 下，PNF 在经过代谢活化后，结构染色体畸变的发生率略有增加。
cOVID-19诱导CNS细胞因子表达和海马神经发生的丧失
严重急性呼吸道综合征2（SARS-COV-2）感染与急性和急性认知和神经精神症状有关，包括记忆力受损，浓度，注意力，睡眠和AFECT。这些大脑症状背后的机制仍在研究。在这里，我们报告说，尽管血液异常 - 脑屏障的通透性异常，但SARS-COV-2感染的仓鼠表现出缺乏病毒神经侵袭。Hamsters and patients deceased from coronavirus disease 2019 (COVID-19) also exhibit microglial activation and expression of interleukin (IL)-1 β and IL-6, especially within the hippocampus and the medulla oblongata, when compared with non-COVID control hamsters and humans who died from other infections, cardiovascular disease, uraemia or trauma.在Covid-19仓鼠和人类的海马齿状回中，我们观察到更少的神经爆炸和未成熟的神经元。持续的炎症，血液 - 脑屏障破坏和小胶质细胞激活可能会导致神经传递，神经发生和神经元损害改变，从而解释了Covid-19的神经精神上的表现。海马的参与可能解释了COVID-19患者的学习，记忆和执行功能障碍。
在线监测96深的微量滴定板中的呼吸活动中国仓鼠卵巢培养物的流线杀死曲线实验
1 Biohybrid＆Medical Textiles（Biotex），AME Applied Medical Engineering Institute，Helmholtz Institute，Rwth Aachen University，Forckenbeckstr。55，52074 Aachen，德国； boehm@ame.rwth-aachen.de（C.A.B. ）; Christine.neusser@rwth-aachen.de（C.D. ）; andreas.lubig@rwth-aachen.de（a.l. ）; fernandez@ame.rwth-aachen.de（A.F.-C。）2电子显微镜设施，Pauwelstr Aachen大学医院。 30，52074亚兴，德国； sruetten@ukaachen.de 3 Applied Mechanics，RWTH Aachen University，Mies-Van-der-der-Rohe-STR。 1，52074亚兴，德国； mahmoud.sesa@ifam.rwth-aachen.de（M.S. ）; stefanie.reese@ifam.rwth-aachen.de（s.r。） 4 Aachen-Maastricht生物基材料研究所，Maastricht University，Chemelot Campus，Urmonderbaan，Urmonderbaan 22，6167 Geleen，荷兰 *通信：jockenhoevel@ame@ame.rwth-aachen.de;电话。 ： +49-241804747855，52074 Aachen，德国； boehm@ame.rwth-aachen.de（C.A.B.）; Christine.neusser@rwth-aachen.de（C.D.）; andreas.lubig@rwth-aachen.de（a.l.）; fernandez@ame.rwth-aachen.de（A.F.-C。）2电子显微镜设施，Pauwelstr Aachen大学医院。30，52074亚兴，德国； sruetten@ukaachen.de 3 Applied Mechanics，RWTH Aachen University，Mies-Van-der-der-Rohe-STR。1，52074亚兴，德国； mahmoud.sesa@ifam.rwth-aachen.de（M.S.）; stefanie.reese@ifam.rwth-aachen.de（s.r。）4 Aachen-Maastricht生物基材料研究所，Maastricht University，Chemelot Campus，Urmonderbaan，Urmonderbaan 22，6167 Geleen，荷兰 *通信：jockenhoevel@ame@ame.rwth-aachen.de;电话。 ： +49-24180474784 Aachen-Maastricht生物基材料研究所，Maastricht University，Chemelot Campus，Urmonderbaan，Urmonderbaan 22，6167 Geleen，荷兰 *通信：jockenhoevel@ame@ame.rwth-aachen.de;电话。： +49-2418047478
使用复制性且高度减弱的疫苗病毒菌株LC16M8
nipah病毒（NIV）是一种高度致病的人畜共患病毒，会引起严重的脑炎和呼吸系统疾病，人类死亡率高（> 40％）。在各种果蝙蝠物种上的流行病学研究是该病毒的天然储层，已表明NIV广泛分布在整个东南亚。因此，迫切需要开发有效的NIV疫苗。在这项研究中，我们使用LC16M8菌株产生了表达NIV糖蛋白（G）或融合（F）蛋白的重组疫苗病毒，并检查了其抗原性和诱导免疫力的能力。中和对NIV的中和抗体被成功诱导的LC16M8表达NIV G或F的仓鼠，并且抗体滴度高于预见的其他疫苗病毒载体诱导的抗体滴度，以防止致命NIV感染。这些发现表明，与其他基于Poxvirus的疫苗相比，基于LC16M8的疫苗格式作为增殖疫苗具有优越性。此外，在仓鼠三轮疫苗接种期间收集的数据为抗体升高过程中收集的数据为临床使用基于疫苗的病毒疫苗针对NIV疾病提供了重要的基础。试用注册：NCT05398796。
CHO 细胞具有内源性逆转录病毒 DNA 元件，可产生逆转录病毒样颗粒
参考文献 1. Maertens, GN 等人 (2022) 逆转录病毒整合酶的结构和功能。《自然微生物学评论》20，20-34。 2. https://en.wikipedia.org/wiki/Alteplase 3. Ono, M. 等人 (1985) 叙利亚仓鼠体内 A 型颗粒基因的核苷酸序列：A 型颗粒基因与 B 型和 D 型肿瘤病毒基因的密切进化关系。《病毒学杂志》387-394。 4. Wurm, FM 等人 (1989) CHO 细胞中内源性逆转录病毒样 DNA 序列的存在和转录。在：动物细胞生物学和生物过程技术的进展。编辑 RE Spier、JB Griffiths、J. Ste- phenne 和 PJ Crooy，76-81，Butterworths。 5. Anderson, KP 等人(1990) CHO 细胞内池内 A 粒子相关序列的存在和转录。病毒学杂志 64 (5), 2021-2032。 6. Venter, JC 等人 (2001)。人类基因组序列。科学。291 (5507): 1304–1351。 7. Duroy, PO. 等人 (2019) 中国仓鼠卵巢细胞内源性逆转录病毒的表征和诱变以灭活颗粒释放。生物技术生物工程。DOI：10.1002/bit 27200 8. Li, S. 等人 (2019) 中国仓鼠的蛋白质组学注释揭示了大量新的翻译事件和内源性逆转录病毒元件。蛋白质组研究杂志，18(6), 2433–2455。 https://doi. org/10.1101/468181 9. Naville, M., Volff, J.-N. (2016) 鱼类基因组中的内源性逆转录病毒：从过去感染的遗迹到进化创新？微生物学前沿 doi:3389/fmicb.2016.01197 10. Löwer, R. 等人 (1996) 我们所有人体内的病毒：人类内源性逆转录病毒序列的特征和生物学意义。PNAS 93, 5177-5184 11. Patel, MR 等人 (2011) 古病毒学——过去病毒的幽灵和礼物。Curr. Opin.Virol. 1, 304-309 12. Reid, GG 等人(2002)：用于生产生物制剂的小鼠和中国仓鼠细胞系中内源性逆转录病毒计数的电子显微镜技术比较。J. Virol. Meth. 108, 91-96 13. Stocking, C., Kozak, C. (2008) 小鼠内源性逆转录病毒。Cell.Mol. Life Sci. 65, 3383-3398 14. Wurm, FM (2013) CHO 准种 – 对制造工艺的影响。工艺 1,3, 296-311 15. Wurm, FM, Wurm, MJ (2017)：CHO 细胞的克隆、生产力和遗传稳定性 – 讨论。工艺 2017, 5, 20, doi: 103390/pr5020020
CoviWall 是一种全病毒灭活的 B.1.617.2 候选疫苗，可在小鼠体内诱导强大的体液和 Th1 细胞反应，并预防 B.1.617.2
2019 年冠状病毒病 (COVID-19) 疫苗和抗病毒药物的快速发展显著降低了全球的发病率和死亡率。尽管大多数疫苗最初都是用祖先武汉抗原开发的，但在这里，我们报告了一种全病毒灭活候选疫苗 (CoviWall) 的开发和免疫学效果，以对抗致命的 B.1.617.2（Delta 毒株）感染。在当前的研究中，我们展示了在良好生产规范下开发 CoviWall 的一致制造工艺，并使用各种分析方法根据法规要求对其进行表征。此外，我们还提供了 CoviWall 疫苗的临床前免疫原性和保护效果数据。在 C57BL/6 小鼠中接种的所有三个测试剂量（即低剂量、中剂量和高剂量）在第二次加强剂量后均引发了高滴度的抗受体结合域抗体和针对严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 的中和抗体反应。此外，CoviWall 免疫也在免疫动物中产生了显著的 T 细胞反应。我们在叙利亚仓鼠中对 B.1.617.2 毒株的攻击数据表明，免疫的仓鼠表现出 COVID-19 的减毒临床表现，
背景。 2020年，新型冠状病毒感染引起的大流行是过去最关键的全球健康挑战之一
背景。在2020年，新型冠状病毒感染引起的大流行是过去一个世纪最关键的全球健康挑战之一。缺乏疫苗是控制新型感染的最有效方法，它促使科学界开发了大量预防产品。我们已经开发了一种针对由SARS-COV-2引起的新型冠状病毒感染的候选疫苗（Epivaccorona），该感染基于与载体蛋白结合的化学合成肽，并吸附在氢氧化铝上，并研究了开发疫苗的特定活性。的目的 - 研究肽疫苗epivaccorona的免疫原性和保护性。方法。使用标准分子生物学，病毒学和组织学方法进行了工作。结果。可以证明，当施用两次，间隔14天后，将仓鼠，雪貂和非人类灵长类动物（非洲绿色猴子，恒河猴）以260μg的剂量为260μg，这是一个与人类的接种剂量相当于人类的接种剂量。仓鼠的实验表明，这种真空与剂量依赖性免疫原性有关。该疫苗被证明可以加速雪貂中上呼吸道中的病毒从仓鼠和非人类灵长类动物中的肺炎中消除，并在与新型的Coro-Navirus发生呼吸道挑战之后的出现。结论。临床前活动研究的结果表明，epivaccorona的使用具有人类疫苗接种的潜力。关键字：冠状病毒，肽疫苗，引文临床前研究：Ryzhikov AB，Ryzhikov EA，Bogryantseva MP，Danalenko ED，Imatdinov IR，Nechaeva EA，Pyankov OV，Pyankova OG，Susloparov IM，Taranov OS，Gudymo AS，Danilchenko NV，Slectsova ES，Bodnev SA，Bodnev SA，Onkhonova GS，Petrov VN，Moiseeeva AA，Moiseeva aa，Moiseeva aa，，Moiseeva aa，，Moiseeva aa，，Moiseeva aa，，Moiseeva AA， Torzhkovapyu，Pyankov SA，Tregubchak TV，Antonets DV，Gavrilova EV，Maksyutov RA。肽疫苗对SARS-COV-2的免疫原性和保护性。俄罗斯医学科学院的年鉴。2021; 76（1）：5-19。doi：https：//doi.org/10.15690/vramn1528
使用 RNAi 在中国仓鼠卵巢细胞中同时敲入/敲除 Caspase 8 相关蛋白 2 基因的时间和成本有效的基因组编辑方案
背景：CHO 细胞是生产生物制药的首选，而基因组编辑技术为提高重组蛋白产量提供了机会。靶向凋亡相关基因，如 Caspases 8 相关蛋白 2 (CASP8AP2)，可提高 CHO 细胞的活力和生产力。将强大的策略与 CRISPR-Cas9 系统相结合使其能够应用于 CHO 细胞工程。目标：本研究旨在开发一种经济有效的方案，使用 CRISPR-Cas9 系统结合 HITI 策略同时在 CHO 细胞中缺失/插入 CASP8AP2 基因，并评估其对细胞活力和蛋白质表达的影响。材料和方法：我们通过将 CRISPR/Cas9 与 HITI 策略相结合，开发了一种有效的 CHO 细胞工程方案。使用 CHOPCHOP 软件设计了两个不同的 sgRNA 序列以靶向 CASP8AP2 基因的 3' UTR 区域。使用经济高效的 PEI 试剂将 gRNA 克隆到 PX459 和 PX460-1 载体中，并转染到 CHO 细胞中。采用手动选择系统简化单细胞克隆过程。MTT 测定评估 24、48 和 72 小时的基因沉默和细胞活力。流式细胞术评估 CASP8AP2 沉默的 CHO 细胞中的蛋白质表达。结果：研究证实了将 CRISPR-Cas9 与 HITI 策略相结合的稳健性，在产生敲除克隆方面实现了 60% 的高效率。PEI 转染成功地将构建体传递给近 65% 的克隆，其中大多数是纯合的。该方案被证明适用于资源有限的实验室，只需要倒置荧光显微镜。 CASP8AP2 敲除 (CHO-KO) 细胞经 NaBu 处理后，与 CHO-K1 细胞相比，其细胞存活率显著延长，48 小时时的 IC50 值分别为 7.28 mM 和 14.25 mM（P 值：24 小时 ≤ 0.0001，48 小时 ≤ 0.0001，P 值：72 小时 = 0.0007）。与天然细胞相比，CHO CASP8AP2 沉默细胞的 JRed 表达增加了 1.3 倍。结论：使用 CRISPR-Cas9 和 HITI 策略有效改造 CHO 细胞，同时进行 CASP8AP2 基因缺失/插入，从而提高细胞存活率和蛋白质表达。
mRNA 疫苗可减轻 SARS-CoV-2 感染和 COVID-19
摘要 新型冠状病毒——严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 于 2019 年 12 月被发现，已导致全球数百万人感染和死亡。接种 SARS-CoV-2 疫苗已被证明可有效遏制病毒传播并减少疾病。这些疫苗的生产和分发以惊人的速度进行，主要是通过使用新型 mRNA 平台。然而，供应链中断和对临床级试剂的高需求阻碍了 mRNA 疫苗的生产和分发，而此时加速疫苗部署至关重要。此外，全球范围内 SARS-CoV-2 变种的出现继续威胁着编码祖先病毒刺突蛋白的疫苗的有效性。在这里，我们报告了使用 GreenLight Biosciences 开发的专有 mRNA 生产工艺开发的 mRNA 疫苗的临床前研究结果。在啮齿动物中评估了两种编码全长非稳定化 SARS-CoV-2 刺突蛋白的 mRNA 疫苗 GLB-COV2-042 和 GLB-COV2-043，分别含有尿苷和假尿苷，以了解它们的免疫原性和对祖先毒株和 Alpha（B.1.1.7）和 Beta（B.1.351）变体的 SARS-CoV-2 攻击的保护作用。在小鼠和仓鼠中，两种疫苗均诱导了强大的刺突特异性结合和中和抗体，在小鼠中，疫苗诱导了显著的 T 细胞反应，具有明显的 Th1 偏向。在仓鼠中，两种疫苗在受到 SARS-CoV-2 攻击后均提供了显著的保护作用，以体重减轻、病毒载量以及肺部和鼻咽中的病毒复制来评估。这些结果支持 GLB-COV2-042 和 GLB-COV2-043 的临床应用开发。