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医疗政策 - 用同种异体造血细胞移植治疗的恶性肿瘤的供体淋巴细胞输注
具有同种异性造血细胞移植描述/背景供体淋巴细胞输注是一种疗法，其中淋巴细胞（一种白细胞）来自供体的血液的淋巴细胞（一种白细胞），捐赠给了已经从同一供体移植的人移植的接受者。供体淋巴细胞输注可以通过杀死其余的癌细胞来帮助骨髓移植受者，其癌症已经恢复了。供体淋巴细胞输注。接受供体淋巴细胞输注的患者中，大约40-60％的患者会出现移植 - 抗宿主疾病（GVHD），而GVHD的发展预测对供体淋巴细胞输注的反应。供体淋巴细胞输注后与治疗相关的死亡率为5-20％。似乎没有给予供体淋巴细胞输注的血液性恶性肿瘤与GVHD的发展之间存在相关性。（1）GVHD发育的风险部分与供体淋巴细胞输注剂量和供体淋巴细胞输注之前的治疗有关。供体淋巴细胞输注可用于各种适应症，例如同种异体造血细胞移植（HCT）后的复发，以防止在T细胞缺乏的移植物或非层状疗法条件方案的情况下进行疾病复发，或者将混合的供体chimerism转化为完全的供体chimerism。复发的治疗发生在大约40％的所有血液系统恶性肿瘤患者中，是供体淋巴细胞输注的最常见的指示。（1）此外，许多研究包括多种疾病，几乎没有有关疾病特异性（2）在报告细胞收集的方法，指示（例如，在化学疗法后计划，早期复发），使用细胞剂量注入和使用细胞亚型时，文献是异质的。
使用 TrueDesign 基因组编辑器中的长插入工作流程将 GFP 序列插入 TRAC 基因座
8. TrueDesign 基因组编辑器将显示优先设计为最接近预期编辑位置（最多 40 bp 距离）的 gRNA 和供体 DNA。gRNA 距离编辑位置越远，敲入效率越低。所有设计的供体 DNA 序列（现在包括同源臂）都将接受 GeneArt 基因合成制造可行性检查。如果供体 DNA 未通过检查，您将无法选择该 gRNA，并且该行将变灰。在这种情况下，请选择不同的 gRNA 或 TALEN 对（如果可用），或更改插入位置或同源臂长度。对于每个 CRISPR-Cas9 gRNA 和 TALEN 对，可以通过单击供体 DNA 列中的眼睛图标来查看供体 DNA 序列。要在您选择的克隆软件中查看和注释供体 DNA 序列，请单击供体 DNA 列中的下载图标下载 FASTA 文件。确保供体 DNA 位于框架内以实现 GFP 的最佳表达。
在哺乳动物干细胞中利用通用供体进行高效、快速的荧光蛋白敲入
摘要 荧光蛋白 (FP) 标记是细胞生物学的基础方法，因为它可以观察活细胞中的蛋白质分布、动态和与其他蛋白质的相互作用。然而，使用标记蛋白过表达的典型方法可能会扰乱细胞行为并引入定位伪影。为了保持天然表达，可以将荧光蛋白直接插入内源基因中。这种方法在酵母中已经是标准做法几十年了，最近随着 CRISPR/Cas9 的出现，在无脊椎动物模型生物中也成为标准做法。然而，由于同源定向修复 (HDR) 效率低下，内源荧光蛋白标记尚未在哺乳动物细胞中广泛使用。在这里，我们描述了一种简化的方法，用于通过小鼠胚胎干细胞中的非同源末端连接 (NHEJ) 将 FP 标签高效快速地整合到天然基因座中。我们的方案最大限度地减少了使用通用供体的克隆，允许对内源蛋白进行 N 端或 C 端标记，并且从转染到成像只需不到 2 周的时间，从而提高了 FP 敲入在哺乳动物细胞中的适用性。简介荧光蛋白（FP）敲入能够实现内源性标记，从而实现蛋白质可视化，而不会产生过表达伪影1。敲入策略可以让研究人员准确观察和测量活细胞中蛋白质表达、定位和相互作用的动态。自20世纪90年代以来，FP敲入一直是酵母中的标准做法，因为这种生物可以通过同源重组有效地整合FP供体2,3。最近，由于CRISPR/Cas9技术的出现10，FP敲入已在秀丽隐杆线虫4-7和果蝇8,9中得到广泛采用。当由单向导RNA（sgRNA）编程时，Cas9会引入靶向的DNA双链断裂（DSB），细胞可以通过同源定向修复（HDR）或非同源末端连接（NHEJ）11进行修复。HDR因其高保真度而受到青睐12-15。然而，HDR 仅在某些细胞周期阶段 16 活跃，并且需要与靶标匹配的同源臂。因此，基于 HDR 的标记效率要低得多 17,18，并且需要在哺乳动物细胞中费力地克隆。为了规避这些限制，最近已引入 NHEJ 来在哺乳动物细胞中进行 FP 敲入 18–26 。一种名为 CRISPR 辅助插入标记 (CRISPaint) 22 的方法特别精简，因为它使用通用供体质粒，因此唯一需要的克隆是构建基因特异性 sgRNA。供体质粒通过转染引入细胞，与靶基因并行被 Cas9 切割，并通过 NHEJ 以非序列特异性的方式整合到靶基因中。为了允许使用任何基因特异性 sgRNA 同时保持正确的阅读框架，CRISPaint 使用通用的“框架选择器”在三种可能的阅读框架之一中切割通用供体 22 。尽管有这些优势，到目前为止，CRISPaint 仅在少数细胞系中进行了测试。此外，目前形式的 CRISPaint 系统仅可进行 C 端插入，这限制了其应用于蛋白质产物可耐受 C 端标记的基因。在这里，我们描述了一种基于 CRISPaint 的改进方法，该方法可在哺乳动物细胞中灵活、快速地在基因的任一端进行 FP 标记。我们的方法高效，需要的克隆最少，并且可以产生在天然调控元件的控制下表达的功能性内源性标记蛋白。我们在小鼠胚胎干细胞 (mESC) 中测试并优化了这种方法。我们在第一次尝试中成功标记了 5/5 个目标，从转染到成像的时间只有 2 周。此外，我们还构建了一组用于多色标记的质粒。总之，这些进展将促进 mESC 和其他哺乳动物细胞中的细胞生物学研究，并可能提供更快、更简单的快速创建敲入小鼠的途径。
通过噬菌体介导的治疗方法克服与粪便菌群移植相关的供体变异性和风险
此预印本版的版权持有人于2024年6月21日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.06.20.599976 doi：biorxiv preprint
未来的血液和移植服务
骨髓志愿者威尔士骨髓供体注册中心（WBMDR）是一组供体的小组，他们自愿成为干细胞供体（捐赠骨髓或外周血干细胞）。干细胞移植用于治疗某些类型的癌症，包括血液癌和其他血液，免疫系统和代谢疾病。
年龄较大的捐助者年龄与较高的非利用风险相关
这项研究旨在为主观观察到的非利用捐助者的增加提供客观证据，并调查他们是否共同具有共同的危险因素，假设捐助者人口的老龄化可能是一个可能的解释。所有转介的已故捐助者都在荷兰进行了分析。一个利用的供体被定义为导致至少一个移植器官的推荐供体。一个非利用的供体被定义为供体，由于停止而没有移植器官。总共将2,235名捐助者定义为被称为；使用了1,618个捐助者，而617名未经利用。观察到年龄> 66岁的捐助者的转诊捐赠者显着增加，非利用捐助者的增加了51％。发现不使用捐赠者的最常见原因是在DCD供体中> 2小时的激动期（45％）和筛查中无法接受的病史（22％）。多变量逻辑回归分析表明，供体年龄增加（年龄66 - 75岁或1.81，95％CI 1.09 - 3.00），DCD供体（OR 4.37 95％CI 3.24 - 5.89，p <0.01） 95％CI 1.75 - 3.51，p <0.01）与非利润有关。未利用的捐赠者年龄较大，通常是DCD供体，并且具有更多的合并症，并确定了这些捐助者是更边缘捐助者的假设。
通过供体的体内 - 线性化和DNA聚合酶θ/DNA-PK的瞬时抑制，在小鼠胚胎干细胞中有效双重敲门
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2021年5月30日发布。 https://doi.org/10.1101/2021.05.30.446338 doi：Biorxiv Preprint
单细胞转录组学揭示了NK细胞的动力学
图1：a）在通过流式细胞仪测量的每个天中，不同供体的NK细胞（CD56 +，CD3-）的折叠膨胀。b）在通过流式细胞仪测量的每个天，不同供体的T细胞（CD56 +，CD3 +）的折叠膨胀。c）在通过流式细胞仪测量的每个天，不同供体的T细胞（CD56-，CD3 +）的折叠膨胀。d）在第0-3、3-8和8-15天之间通过流式细胞仪测量的明显生长速率。e）在所有分析的天数中的所有细胞的UMAP投影，每个捐赠者颜色的供体颜色，其中箭头指示的群集C3是唯一基于供体的细胞聚类的区域。f）基于流式细胞仪和转录组注释基于NK细胞的细胞类型测定之间的比较。g）从分析当天着色的每个供体的所有细胞的UMAP投影。h）基于流式细胞仪和转录组注释的T细胞测定细胞类型测定之间的比较。i）在所有分析的天数中所有细胞的UMAP投影，从预测细胞类型的每个供体彩色。
TrueDesign 基因组编辑器
对于使用 CRISPR 技术的敲除富集实验，设计步骤中选择的 gRNA 和 Invitrogen™ TrueTag™ 供体引物将自动包含在内。该工具还将添加 TrueTag Knockout Enrichment Donor DNA Kit，其中包含所需的供体模板、PCR 试剂和清理试剂盒，以生成可用于转染的供体 DNA。还包括 Invitrogen™ TrueTag™ 验证引物，用于进行连接分析，以确保供体模板正确插入。
心脏死亡后通过捐赠安全增加心脏移植
显示了指定的主要结果（移植后6个月的存活）。循环死亡供体的心脏接受者的6个月的未经调整的生存率为95％，而脑死亡供体的心脏受体中的生存率为89％。使用的供体心脏的百分比是一个重要的次要终点 - 最终将循环死亡的心脏中近90％的心脏被移植，这表明，在循环死亡后支持捐赠的计划将有意义地增加移植程序。可预测的问题发生了：循环死亡供体的心脏受体中有15％在头30天内具有严重的移植功能。只有5％的心脏死亡供体的心脏接受者具有相似的功能障碍。这种移植功能障碍似乎是易于管理的；移植失败和转载植入仅发生在两种相关方面，两者都在对照组中（只有在捐赠者的脑死亡后才有资格接受心脏）。