Euroclox可用于治疗呼吸道,耳朵,鼻子和喉咙,尿道,胃肠道,皮肤和软组织,败血病,盆腔感染,心内膜炎和矫形性感染,涉及肌肉纤维蛋白 - 敏感的细菌(例如其他晶状体症状),如麦乳头细胞和骨科感染(例如,骨盆感染),如麦乳头状细胞和骨科感染单核细胞增生和革兰氏阴性有机体,例如M. catarrhalis,N。Gonorrhea,N。Meningitidis,E。Coli,P。mirabilis,Salmonella,Shalmonella,Shigella and Shigella and Shigella and H. acthigella and H. higella and Shigella和H. h. threnza)和克罗西克林(Cloxacellin)敏感的可见谷物阳性有机体,包括cAphylocci。它对金黄色葡萄球菌,化脓性链球菌,Viridans链球菌,肺炎链球菌,N。Meningitidis,H。流感>
水痘是一种全球性高度传染性传染病。1-4 每年,全球约有 420 万人因严重并发症住院。4 在巴西,2012 年至 2017 年期间,报告了 602,136 例水痘病例,共登记与该疾病相关的住院病例 38,612 例,主要影响 1 至 4 岁的年龄组。5 由于原发性水痘-带状疱疹病毒 (VZV) 感染,水痘表现为皮肤和粘膜病变,并伴有非特异性的全身体征和症状。1-3 病变有瘙痒感,具有向心性分布和区域多态性。1,3 最初出现斑点,然后变成丘疹、水疱,后来结痂。1-3 该病是临床诊断。3 通过培养中的病毒分离或通过聚合酶链反应进行确诊。 2 尽管水痘一般是良性的,但它可能导致严重的发病率和死亡率并发症。这些病例在营养不良和免疫功能低下的一岁以下儿童中更为常见。3 化脓性细菌(化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌)的皮肤继发感染是最常见的并发症。6 这种类型的感染使患者面临败血症和局部感染(如肺炎)的风险。3 免疫功能低下的患者发生内脏并发症的风险更高(30-50%),如果不进行治疗,死亡率为 15%。2 在儿童中,与中枢神经系统(CNS)相关的并发症是水痘住院的第二大原因。3,6 其他并发症包括:心肌炎、肾炎、关节炎、雷氏综合征、肝炎和眼科病变。 2 保守估计,水痘每年在全球造成 4,200 人死亡。4,7 无论是在接种疫苗前还是接种疫苗后,死亡率都低于其他疫苗控制疾病。8 尽管如此,该疾病对人群产生了重大影响,因为它会给多个人群带来严重后果。因此,采取行动进行预防非常重要。4 如今,许多国家都采用疫苗作为预防水痘的重要策略。9-17 水痘疫苗由 Takahashi 于 1974 年开发,由 Oka 菌株制成的减毒病毒组成。3,9 疫苗血清转化
CRISPR-Cas9 系统在其自然状态下被认为是细菌和古菌中存在的一种抵抗噬菌体再感染的免疫形式 (2);而在其人工形式下,它是一种设计简单、使用简单、效率高的基因编辑工具 (10)。 1987 年,通过对大肠杆菌(Escherich, 1885)的核苷酸进行测序,首次发现了后来被称为 CRISPR 区域的重复同源 DNA 序列(11)。 21世纪初,它的一些生物学功能被确定(12),然后,这些区域与一组Cas基因相关。 2005 年和 2007 年,这些回文结构针对病毒再感染的免疫作用得到了实验验证(13),一年后,指导抗病毒防御的 RNA 链(crRNA)的参与被联系起来(14)。 CRISPR-Cas9 的基本成分主要在化脓性链球菌 (Rosenbach 1884) 中被描述,这要归功于 Doudna 和 Charpentier (1) 的工作,他们当时建议通过重新设计 Cas9 复合物将其用作基因组编辑工具。后
免疫学家需要在六个月时进行初步检查,并至少每年进行一次持续检查以评估临床益处。临床有效性的记录对于继续免疫球蛋白治疗是必要的。应至少在治疗 12 个月后考虑停止免疫球蛋白治疗。如果血清 IgM 和 IgA 水平呈上升趋势并接近正常水平,这可能表明免疫系统正在恢复,如果患者身体健康,可以考虑进行试验。一旦患者的 IgA 和 IgM 水平恢复正常,IgG 也可能恢复正常,可以进行停药试验。应根据需要延长免疫球蛋白治疗,以便在 9 月/10 月停止治疗,并在重新开始治疗之前重复临床和/或免疫学评估。对于没有活动性支气管扩张和/或化脓性肺病的患者,尤其应考虑这一点。需要 4 至 6 个月的免疫球蛋白清除期才能进行准确评估。可以考虑使用预防性抗生素来覆盖免疫球蛋白治疗停止的时期。
成年患者由于流感嗜血杆菌,卡他氏菌或肺炎链球菌急性急性细菌急性细菌性急性细菌性鼻窦炎引起的慢性支气管炎的急性细菌性急性恶化。或肺炎链球菌社区社区获得的肺炎,肺炎肺炎,流感嗜血藻,嗜血性嗜血杆菌,肺炎肺炎肺炎,肺炎肺炎或链链球菌在适合于口腔治疗的患者中,伴有肺炎症状症患者,伴有py症状症状症状。在不能使用一线疗法的个人中。由于金黄色葡萄球菌,化脓性链球菌或链球菌链球菌而引起的皮肤和皮肤结构不复杂。由于沙眼衣原体或肺炎奈瑟氏菌引起的尿道炎和宫颈炎,因嗜血杆菌(Chancroid)而导致的男性淋病生殖器性溃疡。由于临床试验中包括少数妇女,阿奇霉素在治疗冠状动脉治疗女性中的疗效尚未确定。
摘要 化脓性链球菌的 RNA 引导 Cas9 核酸酶已成为一种重要的基因编辑工具。然而,其固有的脱靶活性是生物医学应用面临的主要挑战。与一些报道的专门针对单个结构域的工程策略不同,考虑到 Cas9 的特异性是由各个结构域协同决定的,我们合理地在酶的多个结构域中引入了多个氨基酸替换,以创建潜在的高保真度变体。我们还利用了我们之前推导的活化 Cas9 复合物结构的原子模型来指导新的修饰。这种方法已鉴定出具有增强的 DNA 切割特异性的 HSC1.2 Cas9 变体。虽然 HSC1.2 变体的特异性增强在体外切割试验中似乎与位置有关,但这种 Cas9 变体的脱靶 DNA 编辑频率远低于人类细胞中的野生型 Cas9。通过分子动力学模拟研究了导致观察到的位置依赖性效应的潜在机制。我们的发现为利用结构和动态信息开发具有高基因编辑特异性的 Cas9 样酶奠定了坚实的基础。
摘要 化脓性链球菌的 RNA 引导 Cas9 核酸酶已成为一种重要的基因编辑工具。然而,其固有的脱靶活性是生物医学应用面临的主要挑战。与一些报道的专门针对单个结构域的工程策略不同,考虑到 Cas9 的特异性是由各个结构域协同决定的,我们合理地在酶的多个结构域中引入了多个氨基酸替换,以创建潜在的高保真度变体。我们还利用了我们之前推导的活化 Cas9 复合物结构的原子模型来指导新的修饰。这种方法已鉴定出具有增强的 DNA 切割特异性的 HSC1.2 Cas9 变体。虽然 HSC1.2 变体的特异性增强在体外切割试验中似乎与位置有关,但这种 Cas9 变体的脱靶 DNA 编辑频率远低于人类细胞中的野生型 Cas9。通过分子动力学模拟研究了导致观察到的位置依赖性效应的潜在机制。我们的发现为利用结构和动态信息开发具有高基因编辑特异性的 Cas9 样酶奠定了坚实的基础。
通过递送预组装的 Cas9 核糖核蛋白 (Cas9 RNP) 进行基因组编辑是一种越来越流行的方法,适用于难以通过传统质粒和病毒方法进行遗传操作的细胞类型。Cas9 RNP 编辑稳健、精确、能够多路复用且不含遗传物质。它在细胞中的短暂存在限制了残留的编辑活性。该方案描述了通过异源表达和从大肠杆菌纯化来制备重组化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 蛋白,以及通过体外转录和 PAGE 纯化合成 CRISPR 向导 RNA。SpCas9 是第一个发现的 CRISPR Cas9(Jinek 等人,2012 年),也是基因组编辑应用中最典型的 Cas 酶之一。使用这种 Cas9 RNP 配方,我们已证明通过电穿孔在原代人类 T 细胞和自然杀伤 (NK) 细胞中以及通过聚乙二醇介导的转化在真菌和植物中实现了高效的基因组编辑。我们的 Cas9 RNP 制备协议是一致且简单的,可用于其他细胞类型和生物体的基因组编辑。
I. 简介 AAVpro CRISPR/SaCas9 系统用于制备腺相关病毒 (AAV) 载体,以将编码 CRISPR/SaCas9 介导的基因组编辑所需成分的基因 [即单向导 RNA (sgRNA) 和 SaCas9 核酸酶] 递送至哺乳动物细胞。这种基于 AAV 的单载体系统使用来自金黄色葡萄球菌的 Cas9 (SaCas9),其编辑效果与更常用的化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 相似,但短约 1 kb。通过使用较小的 SaCas9,可以将 SaCas9 和 sgRNA 序列装入单个载体中,并在体外和体内对多种哺乳动物细胞实现有效的基因组修饰。 AAVpro CRISPR/SaCas9 无辅助系统 (AAV2)(货号 632619)是一个完整的系统,包含用于构建定制设计的 sgRNA 表达质粒和制备 AAV 颗粒的试剂。AAVpro CRISPR/SaCas9 载体系统(货号 632618)包含与货号 632619 相同的组件(包装系统除外);详细信息在第 II 部分“组件列表”中列出。
我们的研究检查了 CRISPR/Cas9 方法对参与生长素生物合成途径的色氨酸氨基转移酶 BnaTAA1 基因的突变效率。我们制作了九种 CRISPR/Cas9 构建体,这些构建体具有不同的启动子,可驱动金黄色葡萄球菌 Cas9 (SaCas9) 或植物密码子优化的化脓性链球菌 Cas9 (pcoCas9) 的表达。我们开发了一种快速有效的系统,用于评估每个构建体使用油菜毛状根引起的突变种类和频率。我们发现 pcoCas9 在突变目标位点方面比 SaCas9 更有效,并且 NLS 信号的存在使诱变机会增加了 25%。在再生系中进一步研究了突变,并确定了转基因植物中 BnaTAA1 基因的表达和基因修饰的遗传性。毛状根转化与 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑相结合,为研究重要油料作物 B. napus 中的靶基因功能提供了一种快速而直接的系统。