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World File Search System单链
使用CRISPR-CAS9，单链DNA寡核苷酸和原生质体再生
基因组编辑需要将DNA序列插入特定位置。涉及定期间隔短的短文重复序列（CRISPRS）和CRISPR相关（CAS）蛋白质的方案依赖于同源性维修，需要费力的矢量构造，并且效率低。DNA寡核苷酸可以通过非同源末端连接用作靶向插入的供体。我们的简单协议通过使用聚乙烯乙二醇将非修饰的单链DNA DNA寡核苷酸和CRISPR-CAS9核糖核蛋白输送到原生质体中，从而消除了对昂贵的设备和矢量结构的需求。，我们在烟草本尼亚娜纳（Nicotiana Benthamiana）中实现了高达50.0％的靶向插入频率，而无需抗生素选择即可快速循环胸腺橄榄石。使用每个同源臂中包含27 nt的60 nt供体，22个再生植物中有6个显示出靶向插入，其中1个包含6 bp Eco RI位点的精确插入。全基因组测序表明，DNA仅插入靶向位置，遗传分析表明，插入到下一代的插入序列。
使用银盐的DNA探针结构。 2。单体和单链DNA
简介。所得的涂漆金属复合物[1]包括具有炸弹 - 形式LOI NC5HI 3 04的低聚乙醇醛醛链，形成与银离子的协调连接。溶液中络合物的颜色的形成（从紫色到咀嚼的奥拉努斯）取决于与kg相关的基本肾脏的数量，紫色的颜色对应于一个协调键，橙色 - 雷德 - 雷德 - 红色 - 从4到6个相似的连接。寡聚链的形成 - 运动金属的主要成分 - 一个相当复杂的过程，显然是两倍指标，具体取决于溶液的pH和乙醇胺的比例:: formaldeydeyde。在其他启动中心的孵化环境中的存在，这些中心是自由氨基的，它们是DNA碱基的非群落中的存在，在启动乙醇胺甲醛层链形成时引入了不确定性，以及在已经形成的链链的阶段或分支的阶段。此外，甲醛的凝结（显然，在访问基本组方面）也可以以二极管的形式表现出来[2]，该形式能够调整我们在[1]中提出的链电路。因此，在开发获得彩绘dnason的最佳状态的一般背景下，我们专门研究了金属络合物组件与其霸道的相互作用的问题。另外，该作品在建立染色的探针方面都呈现了单个包裹的DNA的结果，具体取决于Basia Incle的各种条件，并选择所需的DNZZOND修改水平。材料和方法。1，2）或在0.03 M硼酸缓冲液，pH 8.5（图在“ Silufol UV254”板上的初始和修饰腺嘌呤的色谱法是用军事缓冲液的引用为0.1 m na，pH 7.5（图>在“ Silufol UV254”板上的初始和修饰腺嘌呤的色谱法是用军事缓冲液的引用为0.1 m na，pH 7.5（图4）。所施加的材料的量为1-2μg。在FN1纸（德国）上色谱法期间，它们还使用了0.03 m的浮雕缓冲液。对于颜色绘画，色谱图在干燥后用氮气扇形浸渍在同一缓冲液中的浓度为0.5 mg/ml。在VII1 Chemisk的反射UFSTE ULTRA中，在薄膜“ Mikhitiso Pan”上对板的摄影登记进行了。纸色谱图上荧光斑点W6i'iiggullt *a v'ut *i *w o div>
产品描述产品组分使用指南相关产品无甘油DNA Pol I ...
储存和稳定性： 无甘油 DNA Pol I Klenow 片段（ HC ）采用蓝冰运输，应在到货后储存于 -20°C 下。应避免反复冻融循 环。 .有效期： 在外包装盒标签上的有效期内，在推荐条件下储存并正确处理时，试剂盒可保持完整活性。 安全预防措施： 处理试剂前请阅读并理解 SDS （安全数据表）。首次发货时提供 SDS 的纸质版文件，此后可应要求提 供。 质控： Meridian 遵守 ISO 13485 质量管理体系运行。无甘油 DNA Pol I Klenow 片段（ HC ）活性通过测量引物 延伸单链 DNA 并与参考酶进行比较来测定。无甘油 DNA Pol I Klenow 片段（ HC ）在检测放行前已经 过活性、纯度和核酸酶污染测试。 注： 仅供科研或进一步生产使用。
TN5标记并将寡核酸转移到单链DNA中，以进行链特异性RNA测序
哺乳动物细胞中的遗传筛选通常专注于功能丧失方法。为了评估额外基因拷贝的表型后果，我们使用了辐射杂种（RH）细胞的大量分离分析（BSA）。，我们构建了六个RH细胞池，每个池由约2500个独立克隆组成，并将池放置在带有或没有紫杉醇的培养基中。低通序测序鉴定859个生长基因座，38个紫杉醇基因座，62个相互作用基因座和3个基因座，用于跨基因组的明显限度，用于线粒体丰度。分辨率被测量为约30 kb，接近单基因。差异性特性，反驳了平衡假设。此外，在RH池中，人类丝粒的保留增强表明，这些染色体元素的功能解剖方法是一种新的方法。对RH细胞的合并分析显示出高功率和分辨率，应该是哺乳动物遗传工具包的有用补充。
通过体内产生单链 DNA 进行高通量功能变体筛选
与自然界中存在的巨大变异和基因组工程师设想的巨大变异相比，创建和表征单个遗传变异的规模仍然有限。在这里，我们介绍了逆转录子文库重组 (RLR)，这是一种高通量功能筛选方法，其规模和特异性超过了 CRISPR-Cas 方法。我们利用逆转录子的靶向逆转录活性在体内产生单链 DNA (ssDNA)，以 > 90% 的效率整合编辑并实现多路复用应用。RLR 同时引入了许多基因组变异，产生了可通过靶向深度测序寻址的汇集和条形码变异库。我们使用 RLR 对合成的抗生素抗性等位基因进行汇集表型分析，展示了相对增长率的定量测量。我们还使用进化细菌的剪切基因组 DNA 进行 RLR，通过实验查询数百万个序列以寻找因果变异，证明 RLR 特别适合利用大量的自然变异库。使用体内产生的 ssDNA 进行汇集实验为探索整个基因组的变异提供了途径。
单分子多肽拉伸揭示了电荷序列对链构象的影响
摘要：阐明电荷序列对聚电解质构象的影响对于理解许多生物物理过程并推进序列定义的聚合物材料的设计很重要。可以使用多肽研究这种作用，该效应允许与精确的单体序列合成聚合物链。在这里，我们使用单分子力实验来探索电荷间距对多肽构象的影响。我们测试了由亲水性且无带电或负电荷的单体组成的多肽序列。我们发现链持续长度对净电荷和离子强度不敏感。随着溶液的增加离子强度，我们观察到溶剂质量的良好到表面的转变，其theta点随电荷间距而缩放。因此，我们的结果揭示了静电驱动的排除体积效应和不敏感的局部构象柔韧性之间的复杂相互作用，我们认为这与带电组在侧链上的位置有关。■引入生物聚合物，例如核酸和蛋白质，将它们的结构和功能直接编码到其序列中。这激发了序列定义的聚合物材料的设计，其工程结构和功能复杂性接近自然界中的序列和功能复杂性。1-4此类材料的从头设计需要对单体序列如何影响聚合物的结构和结构的基本理解。8，9例如，发现由具有较长电荷块的链形成的复杂凝聚力具有较高的临界盐浓度。8，9例如，发现由具有较长电荷块的链形成的复杂凝聚力具有较高的临界盐浓度。具体而言，已经广泛探索了聚电解质中的静电效应，因为它们可以驱动结构形成以及与环境中其他分子的相互作用。调节聚电解质的电荷序列已显示出显着改变其构象行为5-7以及在许多生物物理过程中的活性。10，11
自配 - - 氨基甲酸酯链链链链接 - cd19-budesonide- ...
抽象抗体 - 药物结合物由与靶抗体相关的有效小分子有效载荷组成。有效载荷必须拥有一个可行的功能组，可以通过该范围连接连接器。连接器 - 附件选项通过羟基连接到有效载荷仍然有限。开发了基于2-氨基吡啶的释放组，以使para-氨基苯甲酸氨基甲酸酯（PABC）连接器稳定地附着到Budesonide的C21-羟基，糖皮质激素受体激动剂。有效载荷释放涉及一系列由蛋白酶介导的二肽-PABC键裂解引发的两个自适应事件。在pH 7.4和pH 5.4的缓冲溶液中的一系列有效载荷中间体确定布德索尼德释放率，从而导致2-氨基吡啶鉴定为首选释放组。 添加聚乙二醇基团改善了接头的亲水性，从而提供了具有合适特性的CD19-甲硝基ADC。 ADC23证明了靶向的布德索德递送到CD19表达细胞，并抑制了小鼠的B细胞激活。布德索尼德释放率，从而导致2-氨基吡啶鉴定为首选释放组。添加聚乙二醇基团改善了接头的亲水性，从而提供了具有合适特性的CD19-甲硝基ADC。ADC23证明了靶向的布德索德递送到CD19表达细胞，并抑制了小鼠的B细胞激活。
海报：使用单链 DNA 模板进行高效的同源定向修复
(ssDNA) 是优于 dsDNA 的 HDR 模板。在此，我们报告了一项系统研究，比较了 HEK293 细胞中的 dsDNA HDR 模板和 IDT Ultramer® 寡核苷酸 ssDNA HDR 模板。测试了链选择和同源臂长度，以确定 HDR 在 Cas9 dsDNA 断裂点创建新的限制位点（6 个碱基插入）的效率。使用较长 ssDNA HDR 模板的初步实验表明，与较短 ssDNA 模板具有类似的优势和行为。具有不对称同源臂的模板的 HDR 插入。使用具有不对称同源臂的 HDR 模板导致 EcoRI 插入率与对称同源臂的插入率相似。使用靶向链模板获得了高 HDR 效率，其中
Rad51 独立通路促进基因编辑中的单链模板修复
。CC-BY 4.0 国际许可（未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2020 年 2 月 24 日发布。；https://doi.org/10.1101/2020.02.24.962423 doi：bioRxiv 预印本
粘度非单调组成依赖性在将单链纳米颗粒添加到纠缠聚合物
摘要：特征良好的单链纳米颗粒（SCNP），通过在稀的条件下从线性聚苯乙烯前体进行合成，通过分子内[4 + 4]热环节交联反应，添加到不同浓度的纠缠聚苯二烯熔体中。从纯线性熔体开始，比SCNP的熔体更具粘性，零剪切粘度在添加纳米颗粒后增加并达到最大值，然后最终降至SCNP熔体的值。分子模拟揭示了这种意外行为的起源，这是两个组成部分动力学截然不同的组成依赖性的相互作用。SCNP的浓度降低，因为它们的浓度降低，因为它们是由线性链拧紧的，达到的最大粘度高于分数约20％的线性链的最大粘度。将这种行为类似于将单环聚合物添加到线性矩阵中的行为。这一发现提供了有关SCNP作为聚合物的有效熵粘度修饰符的设计和使用的见解，并有助于讨论循环结构的物理学。