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H19/ 位点的基因座特异性和稳定 DNA 去甲基化...
摘要：DNA 甲基化与染色质状态和细胞类型特异性基因表达的调节密切相关。印记控制区 (ICR) 上的等位基因特异性 DNA 甲基化调控母源或父源等位基因的印记基因的独家表达。H19/IGF2 印记位点 ICR1 处的异常 DNA 高甲基化或低甲基化分别是印记障碍 Beckwith-Wiedemann 综合征 (BWS) 和 Silver-Russell 综合征 (SRS) 的特征。在本文中，我们使用 dCas9-SunTag 和 TET1 催化域进行表观基因组编辑，以诱导 HEK293 细胞中 ICR1 处的靶向 DNA 去甲基化。靶位点的 5-甲基胞嘧啶 (5mC) 水平降低高达 90%，瞬时转染 27 天后，仍观察到 >60% 的去甲基化。与 ICR1 内 CTCF 结合位点的稳定去甲基化一致，DNA 甲基化敏感绝缘体 CTCF 蛋白的占有率在 27 天内增加了 2 倍以上。此外，H19 表达稳定增加了 2 倍，而 IGF2 受到抑制，尽管只是暂时的。我们的数据表明，表观基因组编辑能够在一次短暂治疗后实现印迹控制区域 DNA 甲基化的长期变化，这可能为治疗性表观基因组编辑方法在治疗印迹障碍方面铺平了道路。
研究论文系统地阐明了金蛋白颗粒在治疗新型冠状病毒（COVID-19）肺炎中通过网络Pharm
背景：地幔细胞淋巴瘤（MCL）是一种属于非霍奇金淋巴瘤的异质疾病。近年来，MCL的发病率正在上升，预后仍然不利。泛素特异性蛋白酶14（USP14）已证明参与恶性肿瘤的过程。在本文中，讨论了USP14在MCL的恶性过程中的作用和依鲁替尼抗性的机制。方法：通过QRT-PCR和Western印迹，测试了MCL细胞中USP14的mRNA和蛋白质表达。USP14干扰质粒是通过细胞转染技术构建的，然后将CCK8和EDU分析用于评估细胞增殖。细胞周期和细胞凋亡。还研究了MCL细胞对依鲁替尼的敏感性。接下来，使用Western印迹，Co-IP，环己酰亚胺（CHX）测定和其他技术来检测USP14和XPO1之间的关系。最后，讨论了USP14对MCL的恶性过程的影响和过度表达XPO1的同时抑制USP14和过表达的XPO1，并讨论了MCL中Ibrutinib敏感性的调节机制。结果：USP14表达在MCL细胞系中明显强化。USP14的干扰抑制了MCL细胞活力，增强的细胞周期停滞，凋亡和Ibrutinib敏感性。通过增强XPO1稳定性，USP14去泛素化可以实现此过程。结论：USP14可以通过稳定XPO1来促进MCL的恶性进展和ibrutinib敏感性。
SDGI全球大学（SGU）
单元1分子生物学和遗传工程DNA复制，转录和翻译，限制酶，连接酶和分子克隆，PCR，PCR，凝胶电泳和Southern印迹，基因编辑技术（CRISPR- CAS9），质粒，载体，载体和可选标记。生物过程工程和应用发酵过程和生物反应器，下游加工，生物技术的工业应用（农业，药品，环境）。重组DNA技术克隆载体，基因库和cDNA合成，重组蛋白的表达，生物的遗传操纵。
研究人员表明大脑中的星形胶质细胞在记忆检索中发挥作用
“普遍的观点认为，记忆的形成和回忆只涉及由某些经历激活的神经元印迹，并保存和检索记忆，”通讯作者本杰明·德尼恩博士说，德尼恩博士是神经外科系教授、罗素·J 博士和玛丽安·K·布拉特纳主席、癌症神经科学中心主任、贝勒大学丹·L·邓肯综合癌症中心成员、简和丹·邓肯神经学研究所首席研究员。
细胞间CRISPR筛查显示癌细胞吞噬作用的调节剂
✉函数和材料请求应发给迈克尔·C·巴西克（Michael C. Bassik）。bassik@stanford.edu。作者贡献R.A.K.和M.C.B.构思并设计了这项研究。R.A.K. 为全基因组CRISPR筛选设计了癌症 - 巨噬细胞共培养系统。 R.A.K. 在S.L.的帮助下，在Ramos细胞和J774细胞中进行了CRISPR屏幕。 和K.S.和B.M. 在KARPAS-299细胞中进行了CRISPR屏幕。 Y.N. 在J.S.的建议下，在NSG小鼠中进行了体内小鼠实验。 a.m.m. 和A.A.B. 通过I.L.W.的建议进行了合成小鼠实验。 和F.V.-C。 D.F. 生成了APMAP同源模型。 J.A.S. 在C.C.的建议下分析了不同癌症类型中差异表达的TCGA数据。 L.J.-A. 分析了单细胞RNA-sequering数据。 R.A.K. 和M.G. 进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。 R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。R.A.K.为全基因组CRISPR筛选设计了癌症 - 巨噬细胞共培养系统。R.A.K. 在S.L.的帮助下，在Ramos细胞和J774细胞中进行了CRISPR屏幕。 和K.S.和B.M. 在KARPAS-299细胞中进行了CRISPR屏幕。 Y.N. 在J.S.的建议下，在NSG小鼠中进行了体内小鼠实验。 a.m.m. 和A.A.B. 通过I.L.W.的建议进行了合成小鼠实验。 和F.V.-C。 D.F. 生成了APMAP同源模型。 J.A.S. 在C.C.的建议下分析了不同癌症类型中差异表达的TCGA数据。 L.J.-A. 分析了单细胞RNA-sequering数据。 R.A.K. 和M.G. 进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。 R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。R.A.K.在S.L.的帮助下，在Ramos细胞和J774细胞中进行了CRISPR屏幕。和K.S.和B.M.在KARPAS-299细胞中进行了CRISPR屏幕。Y.N. 在J.S.的建议下，在NSG小鼠中进行了体内小鼠实验。 a.m.m. 和A.A.B. 通过I.L.W.的建议进行了合成小鼠实验。 和F.V.-C。 D.F. 生成了APMAP同源模型。 J.A.S. 在C.C.的建议下分析了不同癌症类型中差异表达的TCGA数据。 L.J.-A. 分析了单细胞RNA-sequering数据。 R.A.K. 和M.G. 进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。 R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。Y.N.在J.S.的建议下，在NSG小鼠中进行了体内小鼠实验。a.m.m.和A.A.B.通过I.L.W.的建议进行了合成小鼠实验。和F.V.-C。 D.F.生成了APMAP同源模型。J.A.S. 在C.C.的建议下分析了不同癌症类型中差异表达的TCGA数据。 L.J.-A. 分析了单细胞RNA-sequering数据。 R.A.K. 和M.G. 进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。 R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。J.A.S.在C.C.的建议下分析了不同癌症类型中差异表达的TCGA数据。L.J.-A. 分析了单细胞RNA-sequering数据。 R.A.K. 和M.G. 进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。 R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。L.J.-A.分析了单细胞RNA-sequering数据。R.A.K. 和M.G. 进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。 R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。R.A.K.和M.G.进行了incucyte分析以验证CRISPR淘汰赛。R.A.K，M.G。 和S.L. 克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。 R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。R.A.K，M.G。和S.L.克隆的sgrna载体和产生的基因敲除细胞系。R.A.K. 进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。 M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。R.A.K.进行了蛋白质印迹，共聚焦显微镜和药物滴定。M.G.，S.L。 和R.A.K. 进行了流式细胞仪分析。 R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。M.G.，S.L。和R.A.K.进行了流式细胞仪分析。R.A.K. 和S.L. 执行了RNA-sequest，D.Y. 和K.L. 分析了RNA测序数据。 D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。R.A.K.和S.L.执行了RNA-sequest，D.Y.和K.L.分析了RNA测序数据。D.Y. 帮助设计了寡核苷酸子图和K.S. 克隆了子图。D.Y.帮助设计了寡核苷酸子图和K.S.克隆了子图。R.A.K. 和M.C.B. 写了手稿。 所有作者都讨论了结果和手稿。R.A.K.和M.C.B.写了手稿。所有作者都讨论了结果和手稿。
原始研究骨髓间充质干细胞衍生的外泌体通过抑制细胞凋亡和炎症
背景和目的：先前的研究证实了骨髓间充质干细胞衍生的外泌体（BMSC-EXO）的抗炎作用。我们旨在研究BMSC-EXO对糖尿病肾脏疾病（DKD）以及基本机制的治疗作用。方法：SD大鼠是通过链唑替辛与高脂饮食结合诱导的，以建立糖尿病疾病模型。bmscs-exo通过尾静脉以每周100 µg的剂量注入12周。使用HE，Masson和Adikicic Acid-Schiff和免疫组织化学染色评估了大鼠肾脏中的病理变化。tunel染色和蛋白质印迹用于评估大鼠肾细胞中与凋亡相关蛋白的表达水平。通过Western印迹通过PCR和NF-κB（p65）检测TNF-α水平，以检查肾脏组织中的炎症反应。结果：BMSCS-EXO显着缓解了糖尿病大鼠中肾脏结构损伤和凋亡细胞的分布。此外，BMSCS-EXO增加了凋亡蛋白Bax的表达，并降低了细胞凋亡的蛋白质裂解caspase 9的表达，并切割了caspase 3。此外，通过BMSCS-EXO处理，肾脏组织和NF-κB（p65）表达的TNF-α的转录水平也降低。此外，BMSC-EXO治疗降低了糖尿病大鼠中葡萄糖（GLU），肌酐（CR）和官僚氮（BUN）的水平。结论：BMSCS-EXO可以通过抑制凋亡和炎症来减轻糖尿病肾脏损害。
归因血清学
弓形虫是一种人畜共患寄生虫，可感染所有温血动物，包括人类。环境弓形虫卵囊污染对感染的影响研究不足。本研究旨在探索弓形虫血清学作为一种使用稳健的逐步方法确定感染源的方法。我们从弓形虫组学数据中计算机识别出 32 种有希望的卵囊特异性抗原，对其进行重组表达和纯化，并验证基于这些蛋白质的血清学是否可以区分卵囊和组织囊肿驱动的实验感染。为此，我们使用了三种特征明确的血清组，这些血清组是在感染后 0 至 6 周从实验感染弓形虫卵囊或组织囊肿的猪和羊身上采集的。候选蛋白最初通过蛋白质印迹法筛选，所用血清来自感染不同时间的猪或羊，这些动物要么感染了卵囊或组织囊肿，要么感染了未感染的动物。只有重组蛋白 TgCCp5A 和 TgSR1 在感染后会引起血清转化，并且似乎可以区分猪血清中卵囊和组织囊肿驱动的感染。随后，它们被用于开发一种针对猪的酶联免疫吸附测定测试。根据该测定和蛋白质印迹分析，所有猪血清均缺乏阶段特异性和低抗原性。当使用整个血清组进行分析时，蛋白质 TgERP、TgSporoSAG、TgOWP1 和 TgOWP8（之前被描述为来源归属抗原）的情况也是如此。我们
在 ES 细胞中进行 CRISPR 增强靶向后，靶向率和串联风险增加
摘要：法国小鼠诊所 (Institut Clinique de la Souris; ICS) 已生产出 2000 多个用于 C57BL/6N 小鼠“点菜”诱变的靶向载体。尽管大多数载体已成功用于小鼠胚胎干细胞 (ESC) 中的同源重组，但少数载体在多次尝试后仍无法靶向特定位点。我们在此表明，将 CRISPR 质粒与与之前失败的质粒相同的靶向构建体进行共电穿孔可以系统地获得阳性克隆。然而，必须仔细验证这些克隆，因为大量克隆（但不是全部）显示靶向质粒在位点处发生串联。详细的南方印迹分析可以表征这些事件的性质，因为标准的长距离 5′ 和 3′ PCR 无法区分正确和错误的等位基因。我们表明，在 ESC 扩增之前进行简单且廉价的 PCR 可以检测和消除带有串联体的克隆。最后，尽管我们只测试了小鼠 ESC，但我们的结果强调了任何结合使用 CRISPR/Cas9 和环状双链供体的转基因细胞系（如已建立的细胞系、诱导性多能干细胞或用于体外基因治疗的细胞系）存在错误验证的风险。我们强烈建议 CRISPR 社区在使用 CRISPR 增强任何细胞类型（包括受精卵母细胞）中的同源重组时，使用内部探针进行南方印迹。
CDK1抑制剂RO-3306通过抑制JAK2/STAT3信号传导
途径在RO-3306的影响下，我们对经过各种治疗的U2932细胞进行了细致的RNA-Seq研究：DMSO，Ibrutinib，RO-3306，以及Ibrutinib和RO-3306的组合。这种方法促进了几种差异表达的RNA的识别，特别是指向与JAK2/STAT3途径激活的关联（图3）。Western印迹和免疫荧光实验，结果表明RO-3306抑制JAK2/STAT3信号，从而抑制了NF-κB的表达和Bcl-2。增强Bax的表达；并影响DLBCL细胞对依鲁替尼的生存，凋亡和药物敏感性。