摘要我们已经开发了一种无细胞的系统,用于研究哺乳动物细胞中mRNA的合成。该系统由透析和浓缩的全细胞提取物组成,从HeLa细胞,小分子和转录所需的辅助因子和外源添加DNA组成。RNA聚合酶II的准确介绍完全取决于添加含有启动子的真核DNA。在最佳DNA和提取浓度下,易于检测到来自腺病毒血清型2后期启动子的转录起始,并且可以使用超过4000个核苷酸的特定转录本。在体外合成的RNA包含与体内transkipt相同的5'限制RNase T1 Undeclepleotide。RNA合成还可以在早期和中间腺病毒启动子位点准确地启动。
a 意大利帕多瓦大学医学系 - DIMED b 意大利帕多瓦帕多瓦大学医院病理学系 c 意大利特雷维索 Marca Trevigiana ULSS2 医院病理学系 d 意大利帕多瓦威尼托肿瘤研究所 IOV-IRCCS e 意大利帕多瓦帕多瓦大学医院外科、肿瘤学和胃肠病学系(DiSCOG)普通外科 3 f 意大利维罗纳大学与医院信托病理学科诊断与公共卫生系 g 意大利热那亚大学外科科学与综合诊断学系(DISC)解剖病理学 h 意大利热那亚 IRCCS Ospedale Policlinico San Martino,意大利热那亚大学外科科学与综合诊断学系(DISC) i 病理学研究单位,Fondazione IRCCS Ospedale Casa Sollievo della Sofferenza, San Giovanni Rotondo, 福贾, 意大利
TBR225 是越南北部最受欢迎的商业水稻品种之一。然而,该品种极易感染细菌性叶枯病 (BLB),这是一种由水稻白叶枯病 (Xoo) 引起的疾病,会导致严重的产量损失。OsSWEET14 属于编码糖转运蛋白的 SWEET 基因家族。与其他 Clade III 成员一起,它表现为易感性 (S) 基因,该基因由亚洲 Xoo 转录激活因子样效应物 (TALE) 诱导对于疾病是绝对必要的。在本研究中,我们试图在 TBR225 优良品种中引入 BLB 抗性。首先,两种越南 Xoo 菌株被证明在 TBR225 感染后会上调 OsSWEET14。为了研究这种诱导是否与疾病易感性有关,利用 CRISPR/Cas9 编辑系统获得了九个 TBR225 突变体系,这些突变发生在 OsS-WEET14 启动子的 AvrXa7、PthXo3 或 TalF TALEs DNA 靶序列中。T 0 和 T 1 个体的基因分型分析表明,突变是稳定遗传的。三个无转基因 T2 编辑系的所检查农艺性状与野生型 TBR225 的性状均无显著差异。重要的是,其中一个 T 2 系含有最大的纯合 6 bp 缺失,显示 OsSWEET14 表达降低,对越南 Xoo 菌株的易感性显著降低,对另一个菌株完全抗性。我们的研究结果表明,CRISPR/Cas9 编辑赋予了越南商业精英水稻品种更高的 BLB 抗性。
慢性乙型肝炎病毒 (HBV) 感染的治愈性治疗仍是一个遥远的目标,HBV 复制过程中稳定的共价闭合环状 DNA (cccDNA) 的持续存在是目前批准用于治疗 HBV 的药物难以突破的关键障碍。由于基因组编辑的准确性、效率和成本效益,CRISPR/Cas 技术被广泛应用于基因治疗和抗病毒策略。虽然 CRISPR/Cas 可能清除 cccDNA,但确保其安全性是应用的必要条件。在我们的研究中,我们分析了几种启动子的肝脏特异性,并构建了 CRISPR/金黄色葡萄球菌 Cas9 (SaCas9) 系统结合肝嗜性 AAV8(其中 AAV 指腺相关病毒)的候选启动子来验证对抗 HBV 的功效。结果显示,将原始启动子替换为肝脏特异性启动子的重建 CRISPR/SaCas9 系统在体内和体外仍然可以抑制 HBV 复制。 3种功能性向导RNA(gRNA)T 2 、T 3 和T 6 针对不同HBV基因型的保守区域,在不同肝脏特异性启动子的作用下均表现出较好的抗HBV效果,且3种gRNA对A、B、C基因型HBV的复制均有不同程度的抑制作用。在EnhII-Pa1AT启动子和AAV8作用下,SaCas9在其他器官或组织中的表达较肝脏进一步降低。本研究结果有助于确保CRISPR/Cas9系统的作用局限于肝脏,从而降低因非特异性靶向其他器官而产生不良有害作用的可能性,为肝脏的临床应用提供参考。
描述PGBKT7是一种酵母表达载体,旨在表达GAL4 DNA结合结构域(DNA-BD;氨基酸1-147)和诱饵蛋白的融合蛋白。融合蛋白来自培养基ADH1启动子的高水平表达。融合蛋白还包含一个C-MYC表位标签。为了促进体外转录/翻译,PGBKT7包括GAL4 DNA-BD和表位标签之间的T7启动子。
摘要:KRAS 是一种经过充分验证的抗癌治疗靶点,其转录下调已被证明对具有异常 KRAS 信号传导的肿瘤细胞具有致命性。G-四链体 (G4) 是一种非典型核酸结构,可介导中心法则事件,例如 DNA 修复、端粒延长、转录和剪接事件。G4 是极具吸引力的药物靶点,因为它们比 B-DNA 更球形,能够实现更具选择性的基因相互作用。此外,它们的基因组普遍性在致癌启动子中增加,它们的形成在人类癌症中增加,并且它们可以通过小分子或靶向核酸进行调节。文献中描述了多种 G4 的推定形成,但对这些结构具有选择性的化合物尚未能够区分主要结构的生物学贡献。利用无细胞筛选技术、新型吲哚喹啉化合物的合成和 KRAS 依赖性癌细胞的细胞模型,我们描述了在 KRAS 启动子 G4 近区和 G4 中区之间进行选择的化合物,将化合物的细胞毒活性与 KRAS 调节相关联,并强调 G4 中区作为进一步靶向努力的先导分子非规范结构。
摘要:Fallot(TOF)的四边形是新生儿中最常见的氰基先天性心脏病。isl1是第二心脏场发育中的主要转录因子,而ISL1基因启动子在TOF患者中的作用尚未进行遗传研究。从601名人类受试者中提取总DNA,包括308名TOF患者和293例健康对照组,并进行了Sanger测序。仅在TOF患者中发现了ISL1基因启动子中的四种变体(包括一种新型杂合变体)。功能分析,并证明四种变体中的三个显着降低了HL1基因启动子在HL-1细胞中的转录活性(P <0.05)。此外,在线JASPAR数据库和电泳移动性转移测定法显示,这三种变体影响了转录因子的结合和ISL1表达水平的改变。总而言之,当前的第一次研究表明,从ISL1基因启动子区域鉴定的变体可能通过影响转录活性和改变ISL1表达水平而参与TOF的发展。因此,这些发现可能会为TOF的分子病因和潜在的治疗策略提供新的见解。
Zineb Sbihi、Kay Tanita、Camille Bachelet、Christine Bole、Fabienne Jabot-Hanin 等人。鉴定导致 XIAP 缺乏的 XIAP 基因中的种系非编码缺失揭示了关键启动子序列。临床免疫学杂志,2022 年,42 (3),第 559-571 页。�10.1007/s10875-021-01188-z�。�hal-03864194�
体操运动员人民(APA):Norby,R。J.,Loader,N.,Menoral,C.,Ulah,Smith,Smith,Smith,A.木材生物质产生森林体重不足的二氧化碳。气候变化,14(9),983-988。 https://doi.org/10