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功能性服装回顾：太空服
制药创新杂志 2023；12(5): 1082-1086 ISSN (E): 2277-7695 ISSN (P): 2349-8242 NAAS 评级：5.23 TPI 2023； 12(5): 1082-1086 © 2023 TPI www.thepharmajournal.com 收稿日期：2023-02-01 接受日期：2023-04-06 Radhika Damuluri 助理教授，服装与纺织品系，社区科学学院，Jayashankar 特伦甘纳邦农业大学教授，拉金德拉纳加尔，海得拉巴，特伦甘纳邦，印度 Sudha babel 博士 教授，纺织与服装设计系，MPUAT 社区与应用科学学院，乌代布尔，拉贾斯坦邦，印度 通讯作者：Radhika Damuluri 助理教授，服装与纺织品系，社区科学学院，Jayashankar 特伦甘纳邦农业大学教授，拉金德拉纳加尔，海得拉巴，特伦甘纳邦，印度
基因组缺失可克服利什曼原虫基因功能的定向丧失
随着被忽视的热带疾病利什曼病在全球范围的蔓延，再加上治疗方法有限，且这些治疗方法都存在耐药性、成本、毒性和/或给药问题，在病原昆虫媒介原生动物利什曼原虫中验证新药物靶点比以往任何时候都更加重要。在 2015 年引入 CRISPR Cas9 技术之前，新靶点的基因验证主要通过同源重组进行靶向基因敲除，其中大多数靶向基因（约 70%）被视为非必需基因。在本研究中，我们利用现成的全基因组测序技术重新分析了这些历史细胞系之一，即 L. major 敲除丝氨酸棕榈酰转移酶 (LCB2) 催化亚基，这会导致鞘脂生物合成完全丧失，但仍具有活力和感染性。结果发现了许多单核苷酸多态性，但也揭示了几个编码区的完全丢失，包括一个编码假定的 ABC3A 直系同源物（假定的固醇转运蛋白）的基因。假设这种转运蛋白的缺失可能促进了 LCB2 催化亚基的定向敲除和从头鞘脂生物合成的完全丧失，我们重新检查了 L. mexicana 品系中的 LCB2，该品系经过工程改造，可直接通过 CRISPR Cas9 定向操作。令人惊讶的是，LCB2 无法被敲除，表明其是必需的。然而，同时删除 LCB2 和假定的 ABC3A 是可能的。这表明假定的 ABC3A 的缺失促进了利什曼原虫中鞘脂生物合成的丧失，并表明我们应该重新检查许多其他基因被视为非必需的利什曼原虫敲除品系。
CRISPR/Cas9 介导的甘蔗多等位基因靶向赋予其除草剂耐受性
甘蔗是全球 80% 糖和 26% 生物乙醇的来源。然而，其复杂的多倍体基因组（2 n = 100 – 120）阻碍了作物改良。本文，我们报告了甘蔗中高效且可重复的基因打靶 (GT)，通过模板介导和同源定向修复 (HDR) 实现多个等位基因的精确共编辑，修复由可编程核酸酶 CRISPR/Cas9 诱导的 DNA 双链断裂。对来自五个独立实验的 146 个独立转化植物的评估表明，靶向核苷酸替换导致 11 个品系中的乙酰乳酸合酶 (ALS) 中的靶向氨基酸替换 W574L 和 S653I，此外还有 25 个或 18 个品系中的单个靶向氨基酸替换 W574L 或 S653I。通过对克隆的长聚合酶链反应 (PCR) 扩增子进行桑格测序，证实了最多三个 ALS 拷贝/等位基因共同编辑，从而赋予除草剂耐受性。这项工作将通过有针对性的核苷酸替换将劣等等位基因转化为优等等位基因，从而实现作物改良。
通过农杆菌介导的基因转移获得的编辑植物的分子表征综合方法
摘要 农杆菌介导的基因转移——实际上是基因改造植物最常用的方法——可能导致植物基因组中整合多个 T-DNA 拷贝，以及形成由改造细胞和野生型细胞组成的嵌合组织。因此，对转化株系进行分子表征是一种很好的做法，可以选出最好的株系进行进一步研究。如今，有几种定量和半定量技术可用于估计转基因植物中 T-DNA 的拷贝数 (CN)。在本研究中，我们比较了基于 (1) 实时聚合酶链式反应 (qPCR)、(2) 液滴数字 PCR (ddPCR) 和 (3) 下一代测序 (NGS) 的三种方法，对葡萄编辑株系进行分子表征。这些株系含有通过 CRISPR/Cas9 技术获得的敲除突变，该突变与植物对两种重要的葡萄霉菌病的易感性有关。根据我们的结果，qPCR 和 ddPCR 的输出在准确性方面基本一致，尤其是对于低 CN 值，而 ddPCR 的结果比 qPCR 更精确。关于 NGS 分析，用这种方法检测到的 CN 通常与 qPCR 和 ddPCR 计算的 CN 不一致，并且 NGS 无法区分十个品系中的三个的整合点。尽管如此，NGS 方法可以肯定地识别 T-DNA 截断或串联/倒置重复的存在，从而提供有关转基因整合资产的独特和相关信息。此外，Cas9 和单向导 RNA (sgRNA) 的表达分析以及靶位点的测序增加了与 CN 数据相关的新信息。这项工作通过报告葡萄编辑品系的实际案例研究，探讨了最先进的诊断技术在早期选择合适的转基因材料方面的优缺点。结果可能对开发新转基因品系的科学家和负责转基因控制的实验室都感兴趣。
透明质酸涂层的壳聚糖纳米颗粒作为乳腺癌细胞α芒果蛋白的活跃靶向载体
Div> 1 Div> 1帕德哈丹大学药学院药物和药品系印度尼西亚帕达贾省大学的科学，万伦大学45363 5功能性纳米粉末大学卓越中心，大学帕德拉杰兰大学，万隆4536 3 nasrul@unpad.ac.id;电话。： +62-2-842-888888（Ext。3510）
小鼠视网膜色素变性相关突变 Prpf8 ...
一组患有视网膜色素变性 (RP) 的患者携带多种剪接体成分的突变，包括 PRPF8 蛋白。在这里，我们确定了小鼠 Prpf8 的两个等位基因，它们可复制或模仿 RP 患者中发现的异常 PRPF8——替代 p.Tyr2334Asn 和扩展蛋白质变体 p.Glu2331ValfsX15。表达异常 Prpf8 变体的纯合小鼠在前 2 个月内因大量颗粒细胞丢失而出现小脑进行性萎缩，而其他小脑细胞则不受影响。我们进一步表明，在两种 Prpf8-RP 小鼠品系的小脑中，一组 circRNA 均失调。为了确定使小脑对 Prpf8 突变敏感的潜在风险因素，我们在前 8 周监测了几种剪接蛋白的表达。我们观察到 WT 小脑中所有选定的剪接蛋白均下调，这与神经退化的开始相吻合。在表达突变 Prpf8 的小鼠品系中，剪接蛋白表达的减少更加明显。总之，我们提出了一个模型，其中在出生后组织成熟过程中，剪接体成分的生理性减少使细胞对异常 Prpf8 的表达敏感，随后 circRNA 的失调会引发神经元死亡。
一种由内源性 Lcn9 启动子驱动的附睾起始节段特异性表达 Cre 重组酶的新型小鼠系
从睾丸释放的精子经历成熟过程并通过附睾运输获得使卵子受精的能力。附睾分为四个区域，每个区域都有独特的形态、基因谱、腔内微环境和截然不同的功能。为了研究附睾起始节（IS）中相关基因的功能，通过 CRISPR/Cas9 技术建立了一种新的 IS 特异性小鼠模型——Lcn9-Cre 敲入（KI）小鼠系。TAG 终止密码子被 2A-NLS-Cre 盒替换，导致 Lcn9 和 Cre 重组酶共表达。从出生后第 17 天首次观察到 IS 特异性 Cre 表达。使用 Rosa26 tdTomato 报告小鼠，Cre 介导的 DNA 重组仅在主细胞中检测到。使用 Lcn9-Cre 小鼠与携带 Tsc1 floxed 等位基因 (Tsc1 flox/+) 的小鼠品系杂交，进一步证实了附睾 IS 特异性 Cre 体内活性。Cre 表达不影响正常发育或雄性生育力。与之前报道的任何附睾特异性 Cre 小鼠不同，新型 Lcn9-Cre 小鼠品系可用于引入整个 IS 特异性条件基因编辑以进行基因功能研究。
鹌鹑的转基因和网络资源
摘要 由于易于操作、易于活体观察且与哺乳动物惊人地相似，鸡胚胎已成为生物医学研究的主要动物模型之一。尽管从技术上讲可以对鸡进行基因组编辑，但鸡的较长繁殖周期（6 个月才能成熟）使其成为不切实际的实验室模型，并阻碍了其在研究中的广泛应用。日本鹌鹑（Coturnix coturnix japonica）是一种有吸引力的替代品，它与鸡非常相似，但决定性的优势是繁殖周期要短得多（1.5 个月）。近年来，已经描述了转基因鹌鹑品系。它们中的大多数是使用复制缺陷型慢病毒生成的，这种技术存在多种局限性。在这里，我们介绍了一种在鹌鹑中进行转基因的新技术，该技术基于在循环原始生殖细胞 (PGC) 中体内转染质粒。该技术简单、高效，并且允许使用在其他模型中开发的无限多种基因组工程方法。此外，我们还建立了一个集中鹌鹑基因组和技术信息的网站，以促进基因组编辑策略的设计，展示过去和未来的转基因鹌鹑品系，并促进鸟类社区内的合作。