10。Homrich,M。S.,Wiebke-Strohm,B.,Weber,R。L.和Bodanese-Zanettini,M。H.(2012)。 大豆遗传转化:基因功能研究和农艺改良植物的产生的宝贵工具。 遗传学和分子生物学,35(4(Suppl)),998–1010。 https://doi.org/10.1590/s1415-47572012000600015。Homrich,M。S.,Wiebke-Strohm,B.,Weber,R。L.和Bodanese-Zanettini,M。H.(2012)。大豆遗传转化:基因功能研究和农艺改良植物的产生的宝贵工具。遗传学和分子生物学,35(4(Suppl)),998–1010。https://doi.org/10.1590/s1415-47572012000600015。
Haemonchus contortus是一种高度致病且经济上重要的寄生虫,它影响了全世界的小型反刍动物。虽然OMICS研究具有巨大的希望,但可用于分析随后的基因功能研究的研究工具较少。RNA干扰(RNAI)技术为该问题提供了解决方案,因为它特别允许敲除或关闭特定基因的表达。结果,RNAi技术已被广泛用于探索基因功能和疾病治疗研究。在这项研究中,我们回顾了中国Haemonchus contortus RNAi研究的最新进展,目的是为鉴定参与生长和发育,驱虫抗性,诊断标记物和诊断药物的关键基因的识别提供参考,以治疗Haemonchus fortortus。
基因组学的最新进展揭示了微生物生态系统的多样性和丰富性。现在需要新的功能基因组学方法来高通量地探测基因功能并提供机制见解。在这里,我们回顾了如何使用 CRISPR 工具箱以序列特异性的方式灭活、抑制或过度表达基因,以及这如何提供多种有吸引力的解决方案来高通量地识别基因功能。CRISPR 筛选技术在真核生物和原核生物中都得到了发展,已经为微生物学和宿主-病原体相互作用提供了有意义的见解。在微生物组时代,CRISPR 衍生工具的多功能性和功能多样性有可能显著提高我们对微生物群落及其与宿主相互作用的理解。
操纵基因活性和控制转基因表达的能力对于研究基因功能至关重要。虽然对于秀丽隐杆线虫来说,有几种用于修改基因或分别控制表达的遗传工具,但是没有遗传方法可以产生既能破坏基因功能又能为表达被破坏基因的细胞提供遗传途径的突变。为了实现这一点,我们开发了一种基于 cGAL(一种用于秀丽隐杆线虫的 GAL4-UAS 二分表达系统)的多功能基因陷阱策略。我们设计了一个 cGAL 基因陷阱盒并使用 CRISPR/Cas9 将其插入目标基因中,从而创建一个双顺反子操纵子,该操纵子可同时在表达目标基因的细胞中表达截短的内源蛋白和 cGAL 驱动基因。我们证明我们的 cGAL 基因陷阱策略可以稳健地产生功能丧失的等位基因。将 cGAL 基因陷阱系与不同的 UAS 效应菌株相结合,使我们能够挽救功能丧失的表型,观察基因表达模式,并在时空上操纵细胞活动。我们表明,通过显微注射或基因杂交的重组酶介导的盒式交换 (RMCE),可以进一步在体内设计 cGAL 基因陷阱系,以轻松地将 cGAL 与其他二分表达系统的驱动器(包括 QF/QF2、Tet-On/Tet-Off 和 LexA)交换,以生成在同一基因组位置具有不同驱动器的新基因陷阱系。这些驱动器可以与它们相应的效应物结合以进行正交转基因控制。因此,我们基于 cGAL 的基因陷阱是多功能的,代表了秀丽隐杆线虫基因功能分析的强大遗传工具,这最终将为基因组中的基因如何控制生物体的生物学提供新的见解。
CRE/ LOXP系统是体内基因功能研究的强大工具。CRE重组酶的调节表达以空间和时间控制的方式介导了遗传因素的精确缺失。尽管该系统具有鲁棒性,但仍需要大量精力为每个感兴趣的单个基因创建有条件的敲除模型,在这些基因中,必须同时将两个LOXP位点插入顺式。当前的工作涉及劳动密集型胚胎(ES)细胞 - 基于基因靶向小鼠胚胎的基因和乏味的微观畅通。该工作流的复杂性构成了技术挑战,因此限制了有条件遗传学的更广泛应用。在这里,我们通过将CRISPR供体的独特设计与新的Oviduct电穿孔技术I I -Gonad集成了一种替代方法来生成鼠标LOXP等位基因。显示了这种方法的潜力和简单性,我们在一次尝试中创建了五个基因的FloxErx等位基因,其成本相对较低,设备设置最少。除了条件等位基因外,还获得了本构敲除等位基因作为这些实验的副产品。因此,I -Gonad的更广泛应用可能会使用新型鼠模型促进基因功能研究。
。。.N.N.N.N.N.N.N.N.N.N.N。lecce单位。4Qu±云母生物±云母系。II,布宜诺斯艾利斯,CE1428EHA,阿根廷。 II,布宜诺斯艾利斯,CE1428EHA,阿根廷。 。 澳大利亚,澳大利亚,澳大利亚,澳大利亚。II,布宜诺斯艾利斯,CE1428EHA,阿根廷。II,布宜诺斯艾利斯,CE1428EHA,阿根廷。 。 澳大利亚,澳大利亚,澳大利亚,澳大利亚。II,布宜诺斯艾利斯,CE1428EHA,阿根廷。。澳大利亚,澳大利亚,澳大利亚,澳大利亚。
摘要:病毒诱导的基因沉默(VIGS)是一种 RNA 介导的反向遗传学技术,现已发展成为分析基因功能不可或缺的方法。它利用植物的转录后基因沉默(PTGS)机制下调内源基因,以防止系统性病毒感染。根据最近的进展,VIGS 现在可以用作高通量工具,通过暂时抑制目标基因表达,通过病毒基因组在植物中诱导可遗传的表观遗传修饰。由于 VIGS 诱导的 DNA 甲基化进展,植物中正在开发具有所需性状的新型稳定基因型。在植物中,RNA 指导的 DNA 甲基化(RdDM)是一种机制,其中表观遗传修饰物由小 RNA 引导至目标位点,小 RNA 在靶基因的沉默中起主要作用。在这篇综述中,我们描述了 DNA 和 RNA 病毒载体的分子机制,以及通过改变研究植物中通常无法通过转基因技术获得的基因所获得的知识。我们展示了如何使用 VIGS 诱导的基因沉默来表征跨代基因功能和改变的表观遗传标记,从而改善未来的植物育种计划。
一种称为Gapmer反义寡核苷酸(ASO)的专门治疗方法旨在专门靶向和分解故障的核糖核酸(RNA),同时保持正常基因功能完整。使用这种RNA疗法导致在KCNA2基因中编码的有问题的钾通道蛋白中显着降低,这有助于恢复正常的钾流量并减少与癫痫有关的过度神经元活性。
(说明)[背景]试图研究基因的作用时,一种方法是防止基因工作并分析其结果。 CRISPR-CAS9是一种基因组编辑方法之一,被广泛用于停止此类基因的功能。但是,许多生存必不可少的基因很难研究,因为功能障碍可能会产生致命作用。在此类问题的情况下,研究是通过部分抑制基因功能而不是完全停止基因功能来完成的。但是,许多用于此目的的实验方法都是困难且不稳定的,并且希望开发一种简单稳定的方法来抑制基因功能。因此,在这项研究中,我们通过设计CRISPR-CAS9的使用来开发一种简单而稳定的方法,用于产生部分抑制突变体。 [研究含量]基因组DNA是生物生物的蓝图,遵循称为中心教条 *2的基本原理,并产生mRNA和蛋白质以调节细胞的功能。在“真核生物”中,是含有拟南芥 *3的植物,包括人类在当前研究中使用的动物,在从DNA产生mRNA之后,将部分mRNA切除(拼接 *4)形成成熟的mRNA。 DNA包含控制剪接的序列,但是如果在此部分发生异常,则剪接后的mRNA和蛋白质序列将变得异常。 在这项研究中,使用CRISPR-CAS9进行了基因组编辑,以创建这种异常。 CRISPR-CAS9系统旨在针对使用Gene HPY2控制剪接的序列,据报道,该基因在拟南芥中的功能显着降低,据报道,该拟南芥在模型植物的拟南芥中发芽的几天内致死。结果,我们成功地创建了拟南芥,该拟南芥具有一个序列,其中剪接控制顺序按预期去除。此外,我们证实了拟南芥中从HPY2基因产生的成熟mRNA序列比正常生成的成熟mRNA序列略短。与正常的蛋白质相比,由该mRNA产生的蛋白质可能缺乏一些序列。但是,保留了粗糙的结构,表明某些蛋白质的功能可能仍然存在。实际上,本研究中产生的突变体HPY2-CR3能够比完全失去已知HPY2基因的功能并受到致命影响的功能的寿命更长,并且有些人能够成长为可以开花的阶段。