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Alt-R™ HDR ENHANCER V2 提高效率... - NET
Alt-R HDR Enhancer V2 可提高脂质转染细胞的 HDR 效率。使用 0.75 μL Lipofectamine ® RNAiMAX ® 试剂（赛默飞世尔科技）将稳定表达 Cas9 的 HEK-293 细胞反向转染 gRNA 复合物（Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA 与 tracrRNA 复合），靶向人类基因组中的 SAA1、STAT3、SERPINC1 和 HPRT 38087（最终浓度 = 10 nM）和设计用于在 Cas9 裂解位点插入六个碱基的 Alt-R HDR 供体块（最终浓度 = 3 nM）。脂质转染后，立即将细胞培养在含有无处理（深蓝色）、DMSO（载体对照，浅蓝色）、30 μM Alt-R HDR 增强剂（深灰色）、0.5 μM Alt-R HDR 增强剂 V2（浅灰色）或 1 μM Alt-R HDR 增强剂 V2（绿色）的培养基中。24 小时后，移除旧培养基，并用不含 DMSO、Alt-R HDR 增强剂或 Alt-R HDR 增强剂 V2 的新鲜细胞培养基替换。脂质转染 48 小时后从每种样本类型中分离基因组 DNA，并通过 PCR 扩增目标编辑位点。使用 rhAmpSeq ™ CRISPR 分析系统对效率进行量化，该系统使用 NGS 分析来评估目标位置的 HDR 百分比。使用 rhAmpSeq CRISPR 分析工具分析了 NGS 读数。使用最终浓度为 1 μM 的 Alt-R HDR 增强剂 V2 实现了最高的 HDR。
CBAF产生的亚核小体，扩展Oct4结合和功能，超出增强剂的DNA基序
规范BRG/BRM相关因子（CBAF）复合物对于在哺乳动物细胞中增强剂的染色质开放至关重要。但是，开放染色质的性质尚不清楚。在这里，我们表明，除了产生无组蛋白的DNA外，CBAF还会产生稳定的半糖体样中核小体颗粒，这些核小体颗粒含有与50-80 bp的DNA相关的四个核心组蛋白。我们的全基因组分析表明，CBAF通过靶向和分裂脆弱的核小体来制造这些颗粒。在小鼠胚胎干细胞中，这些亚核体成为主转录因子OCT4的体内结合底物，而与OCT4 DNA基序的存在无关。在增强子处，与在无组蛋白DNA上占据的区域相比，OCT4 – subnuceosoms相互作用增加了Oct4占用率，并将OCT4结合的基因组间隔放大至一个数量级。我们提出，CBAF依赖性亚核体策划了一种分子机制，该分子机制在其DNA基序以外的染色质开放中发挥了OCT4功能。
新英格兰生物实验室分析证书
在 250 ng vTPA（截短组织型纤溶酶原激活剂）模板质粒 DNA、1 µl 增强剂 1、1 µl 增强剂 2 和 20 单位 RNase 抑制剂（含有 PURExpress® 体外蛋白质合成试剂盒的成分）存在下进行 25 µl 反应，在 37°C 下孵育 2 小时，通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝检测测定，可得到预期的 40 kDa 产物。
石墨烯的未来潜力
水泥添加剂或水泥研磨助剂 (CGA) 的范围从纯研磨助剂到功能性添加剂和性能增强剂。后者是目前使用最广泛的产品类型。性能增强剂可以提高研磨过程的效率并改善关键的机械性能，例如抗压强度。使用性能增强剂的主要原因之一，除了降低能耗外，是需要降低任何给定水泥的熟料系数。熟料不仅是水泥中最昂贵的成分，也是造成最高相关二氧化碳排放量的成分。如果可以用较低的熟料系数保持相同的水泥性能，那么这是一个双赢的局面。当前的性能增强剂通常依赖于乙二醇和胺化学的组合。这些可使抗压强度提高约 10-20%，同时将熟料系数降低高达 5%，尽管个别情况可能有很大差异。这不仅仅是添加更多产品来获得更大的强度增加或更大的熟料减少的情况。由于这些化学物质在水泥水化过程中相互作用，添加过量会导致性能下降。为了进一步减少熟料，应该研究替代技术，先进材料公司 First Graphene Ltd 与 Fosroc International（一家全球建筑行业高性能化学品制造商和供应商）之间的合作显示出巨大的前景。该合作正在考虑利用添加量极小的石墨烯来实现更高水平的熟料替代。
异常异染色质沉默免疫...
最近的研究表明，与健康对照1、2的B细胞相比，与慢性淋巴细胞性白血病患者（CLL）衍生的克隆B细胞已改变了组蛋白修饰景观。我们还表明，BCR信号通路会影响CLL B细胞3、4的染色质景观，这意味着CLL中的致癌信号传导和表观遗传机械之间的相互作用。然而，CLL中的大多数染色质研究集中于与癌基因表达相关的活性增强子。对CLL中丢失的增强剂的了解非常有限：1）丢失增强剂的功能是什么； 2）这些丢失的增强剂如何在CLL中保持； 3）在CLL的前体状态，单克隆B细胞淋巴细胞增多（MBL）的前体状态下可以检测到这些丢失的增强子； 4）如果这种异常的染色质签名受CLL治疗影响。
认知增强的维度：入侵大脑
在日益复杂的信息文化中，对认知功能的需求正在逐渐增加。近年来，人们开发了几种改善大脑功能的方法。这些方法的有效性（或有效性）和副作用的证据引发了有关其伦理、社会和医学后果的争论。在公共话语中，认知改善经常被描述为一种万能的方法。然而，经过仔细研究，认知增强表明它本身是一个多维概念：没有一种认知增强剂可以改善大脑功能，而是有多种干预措施可以分为生化、物理和行为增强策略。这些认知增强剂在作用机制、针对的认知领域、作用时间尺度、可用性和副作用以及对不同人群的影响方面有所不同。我们揭示了认知改善的各个方面，评估了在这些方面有所不同的认知增强剂的重要例子，并提出了一个理论和实证研究框架。
HIV 疫苗增强剂基于蛋白质而非病毒载体，可驱动 IgG1 偏向的多功能体液免疫反应
RV144 HIV-1 疫苗试验结果显示，接种疫苗者病毒感染率略有下降，并诱导了抗体依赖性细胞毒性和针对 HIV 包膜蛋白可变环区 1 和 2 的疫苗特异性 IgG 和 IgG3 反应。然而，随着 HVTN 702 临床试验最近的失败，全面分析体液免疫反应可能会为这些令人失望的结果提供见解。HVTN 702 研究中包含的一项变化是增加了后期加强，旨在增强峰值免疫力和持久性。配套疫苗试验 RV305 旨在允许评估后期加强的免疫学影响，无论是单独使用加强蛋白抗原、单独使用金丝雀痘病毒载体 ALVAC 还是两者结合。尽管先前的数据显示，无论是否掺入 ALVAC-HIV 载体，两个加强组中的 IgG 抗体水平均升高，但对塑造抗体效应功能的影响仍不清楚。因此，我们在此分析了 RV305 加强方案诱导的抗体和功能特征，发现尽管包括蛋白质加强的两个组中 IgG1 水平均有所增加，但与原始 RV144 疫苗策略相比，IgG3 水平有所降低。无论是否加入病毒载体引发剂，大多数功能反应在蛋白质加强后都会增加。这些数据表明，仅添加晚期蛋白质加强就足以 […]
与神经胶质瘤风险相关的20q13.33的功能变体改变了增强子活性，并调节多个基因的表达。
图1与胶质母细胞瘤风险相关的20染色体区域。使用UCSC基因组浏览器，使用铅SNP rs2297440，r 2> .6的LD块定义的区域，使用UCSC基因组浏览器显示了推定的增强元素，其中包含RS2297440的LD中包含SNP的推定增强元素。SNP在该区域的基因下面观察到。seq轨道，来自SNP以下NHA的H3K4ME1表明潜在的增强子元素。区域1表示在荧光素酶测定中没有增强剂活性的区域。区域2表示等位基因特异性增强子区域，其中包括RS3761124（标有星号）。区域3和4表示表现出增强剂活性但不受单倍型影响的区域。应注意，测试的增强剂活动的区域的大小不是扩展。ld，连锁不平衡； SNP，单核苷酸多态性；加利福尼亚大学圣克鲁斯大学UCSC
体外修饰细胞疗法的进展
英国，伦敦大学学院 GOS 2 号儿童健康研究所，英国伦敦基因疗法使用自体离体基因修饰的 CD34 + 造血干细胞 (HSC) 移植作为治疗一系列单基因疾病的方法，现在已通过多项临床研究和监管部门的批准，因其变革潜力而得到认可。尽管基因疗法的商业化取得了重大进展，但患者可及性的主要障碍是目前制造 GMP 级慢病毒 (LV) 载体的能力有限，以及生产基因和细胞疗法所产生的相应高昂成本。此外，还需要为成年患者（例如患有 X 连锁慢性肉芽肿病 (X-CGD) 的患者）制造更多基因修饰的 HSC，以及用于患者群体较大的适应症。因此，降低载体需求和商品成本是基因疗法商业化的关键挑战。转导增强剂的应用使得可以使用更少量的 LV 载体来实现相同的基因修饰细胞产量。几种增强剂化合物已常规应用于临床基因和细胞治疗制造，以改善病毒在不同细胞水平上的转导过程，例如病毒附着、载体进入和基因组整合。为了开发一种优化的 LV 转导 HSC 方案，我们筛选了 20 多种市售和新型候选化合物，以增强活性，单独使用或组合使用以针对不同的病毒转导途径。我们全面调查了这些增强剂可实现的转导效率 (TE) 和载体拷贝数 (VCN) 的改善情况，使用临床级治疗性 LV 载体，通过缩小高通量和临床规模的转导过程进行 HSC 基因治疗药物产品制造。然后评估了最有效的增强剂组合与其他已知转导培养过程修改的兼容性，以开发一种优化的 HSC 转导方案。对增强剂处理的 HSC 进行了广泛的体外和体内表征，包括 RNAseq 转录分析和小鼠竞争性植入研究。我们在此描述了 J-Boost，它是一类新型转导增强剂（二嵌段共聚物，PCT/US20/56123）中的代表性化合物，可促进病毒进入。当与硫酸鱼精蛋白 (PS) 和高密度培养物结合使用时，J-Boost 可使 VCN 增加约 9 倍，TE 增加约 4 倍，使 HSC 转导至 LV 载体减少 50-70%