MD,美国。4. DeepSeq,诺丁汉,英国。5. 乌普萨拉大学免疫学、遗传学和病理学系生命科学实验室,瑞典乌普萨拉。6. 莱斯大学计算机科学系,美国德克萨斯州休斯顿主街 6100 号。* 通讯作者;贡献相同摘要单细胞 DNA 测序的出现揭示了基因组变异的惊人动态,但未能表征在种系水平上具有深远影响的较小到中等尺寸的变异。在这项工作中,我们利用单细胞长读测序发现了三个大脑中的新动态。这为了解单个细胞基因组的动态提供了关键见解,并进一步强调了转座因子的大脑特定活动。主要单细胞全基因组扩增(WGA)使通常使用短读在低覆盖率 1 下进行的单细胞全基因组测序(scWGS)成为可能,它通常只能检测 Mb 级 CNV,尽管据报道识别了 > 50kbp 的 CNV 2 。无论如何,许多预期的变体(如 Alu 或 LINE 变体)都被遗漏了。这些转座因子 (TE) 家族是最丰富和活跃的转座子,总共占人类基因组的约 27% 3 ,并有助于健康神经元 4 和神经退行性疾病 5–7 的重组。同时,长读测序的出现使得准确检测 Alu 或其他转座子介导的突变成为可能 8 。最近有报道称,在液滴中使用等温多重置换扩增 (MDA) (dMDA) 进行 WGA 后,在 T 细胞上使用长读 scWGS (scWGS-LR) 来组装单个细胞的一个基因组。然而,它的成本很高,而且由于嵌合体和扩增子大小限制,完整性有限 9 。尽管如此,这为进一步探索类似的方法是否能为单细胞的基因组变异提供新的见解开辟了新领域。
由于旁系同源、复杂的单倍型结构或串联重复,人类基因组的很大一部分难以用短读 DNA 测序技术进行检测。长读测序技术(例如 Oxford Nanopore 的 MinION)能够直接测量复杂的位点,而不会引入短读方法固有的许多偏差,尽管它们的通量相对较低。这一限制促使人们最近努力开发无扩增策略来定位和富集感兴趣的位点,以便随后用长读进行测序。在这里,我们介绍了 CaBagE,这是一种高效且有用的靶标富集方法,可用于对大型、结构复杂的靶标进行测序。CaBagE 方法利用 Cas9 与其 DNA 靶标的稳定结合来保护所需片段不被核酸外切酶消化。然后使用 Oxford Nanopore 的 MinION 长读测序技术对富集的 DNA 片段进行测序。使用健康供体 DNA 对长度为 4-20kb 的五个基因组靶标进行测试时,使用 CaBagE 进行富集可获得 116X 覆盖率(范围为 39-416)的靶标位点中位数。四种癌症基因靶标在单个反应中富集并在单个 MinION 流动槽中进行多路复用。我们进一步证明了 CaBagE 在两名具有 C9orf72 短串联重复扩增的 ALS 患者中的效用,以产生与每个个体的重复引发 PCR 得出的基因型相称的基因型估计值。使用 CaBagE,可以在测序之前对给定样本中的靶标 DNA 进行物理富集。此功能允许跨测序平台进行适应性,并可能用作测序以外应用的富集策略。CaBagE 是一种快速富集方法,可以阐明人类疾病背后的“隐藏基因组”区域。
【产品简介】 本产品是从高度耐热菌 Thermus aquaticus 中克隆其 DNA 聚合酶基因,原核表达后经柱层析纯化获得的超纯、高效、耐热 DNA 聚合 酶, SDS-PAGE 显示为一条 94kD 的蛋白条带。该酶除具有 5 ' -3 ' DNA 聚合活性外,还具有少量的 5 ' -3 ' DNA 外切活性,但不 具有 3 ' -5 ' DNA 外切活性(校读活性),适用于常规 PCR 扩增。 M5 HiPer plus Taq DNA Polymerase 扩增得到的 PCR 产物含有 3'-A 碱基,可直接用于 TA 克隆 ( 聚合美 TOPO-TA 克隆载体货号: MF019 或 MF020) 。
清洁干燥的压缩空气 Sullair SDE 外部加热再活化干燥剂空气干燥器使用高品质活性氧化铝干燥剂床从压缩空气中吸附水分,提供低至 -40°F(标准)或 -100°F(可选)的持续露点。当一个塔干燥空气时,另一个塔使用加热的干燥空气进行再生,将吹扫要求降低至干燥器额定流量的 7%。Sullair SDB 鼓风机吹扫干燥剂空气干燥器使用高品质活性氧化铝干燥剂床从压缩空气中吸附水分,提供低至 -40°F(标准)或 - 65°F(可选)的持续露点。当一个塔干燥空气时,另一个塔通过外部鼓风机使用加热的环境空气进行再生,将吹扫要求降低至仅 2-3%(时间平均值)。
持有中专学历或部分完成副学位学历的申请人可申请入读学士学位课程一年级。根据课程的不同,学生可以在一年级直接入读主修课程,也可以入读未申报主修课程的学院/学校/部门(学习一年后进入主修课程)。
Arrow Pneumatics 外部加热双塔再生干燥机结合了我们“RH”系列干燥剂干燥机的高可靠性,并增加了外部加热器,形成了“RE”系列干燥机。露点通常为 –40°F,可选低至 –100°F。吹扫空气约为额定流量的 7%,因此与无热再生干燥机相比,加热双塔再生干燥机的运行成本更低。“RE”系列中的吹扫空气由安装在外部安装外壳中的 100% 高效 incoloy 护套电加热器加热。恒温器控制加热器的温度,可延长使用寿命并节省能源。加热器和吹扫管道经过绝缘处理,以确保安全并进一步节省能源。Arrow “RE” 系列加热干燥机配有微处理器控制器,安装在 NEMA4 级外壳内。气动阀门使用寿命长,气流速度快。
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可证永久有效。它是在预印本(未经同行评审认证)下提供的,作者/资助者已授予 bioRxiv 许可,可以在该版本中显示预印本。版权持有者于 2023 年 11 月 21 日发布了此版本。;https://doi.org/10.1101/2023.11.15.567180 doi:bioRxiv 预印本
持有中专学历或部分完成副学位学历的申请人可申请入读学士学位课程一年级。根据课程的不同,学生可以在一年级直接入读主修课程,也可以入读未申报主修课程的学院/学校/部门(学习一年后进入主修课程)。
图 1:长读 Ribo-STAMP 的实验和计算方法。(A)LR-Ribo-STAMP 实验系统概览。RPS2 与 APOBEC1 融合,以诱导核糖体-RNA 相互作用位点附近的胞嘧啶到尿嘧啶核苷酸编辑。编辑越多表示翻译越高,编辑越少表示翻译越低。(B)LR-Ribo-STAMP 计算流程概览。输入是未对齐的长读,经过对齐、读过滤、编辑检测、编辑过滤和编辑量化。编辑后的位点输出为 BED 文件。(C)编辑过滤。通过过滤常见位点和注释的 SNP,从长读 APOBEC1 专用(绿色)信号中概述编辑过滤和描绘 LR-Ribo-STAMP(金色),表示为编辑分数(编辑读/总读数)与编辑位点覆盖率之间的关系。灰色部分中的已编辑站点表示过滤掉的读取数少于 20 的站点。