质粒载体整合了编码牛 MBL 蛋白 (21-249aa) 的基因,生成重组质粒,然后将其引入杆状病毒细胞。阳性杆状病毒细胞的选择基于其抵抗特定抗生素的能力。随后,在有利于牛 MBL 基因表达的条件下培养含有重组质粒的杆状病毒细胞。该蛋白质带有 N 端 10xHis 标签。表达后,采用亲和纯化从细胞裂解物中分离和纯化重组牛 MBL 蛋白。变性 SDS-PAGE 用于分离所得重组蛋白,从而可以估计其纯度超过 85%。
摘要:利用杆粒重组生成敲除病毒大大加速了杆状病毒基因在各种应用中的审查。然而,与传统的重组和 RNAi 方法相比,CRISPR-Cas9 系统是一种强大的工具,可简化序列特异性基因组编辑和有效的基因转录调控。本文比较了 CRISPR-Cas9 系统在 BEVS 中对基因破坏和转录抑制的有效性。开发了组成性表达 cas9 或 dcas9 基因的细胞系,并评估了递送 sgRNA 的重组杆状病毒对报告绿色荧光蛋白基因的破坏或抑制。最后,针对内源性 AcMNPV 基因进行破坏或下调,以影响基因表达和杆状病毒复制。这项研究提供了一个概念证明,即 CRISPR-Cas9 技术可能成为通过有针对性的基因破坏和转录抑制来有效审查杆状病毒基因的有效工具。
尽管宿主生理调节已被解释为支持杆状病毒传播的重要过程,但不能排除宿主抗病毒反应对能量供应的需求。我们目前的研究表明,家蚕 AcMNPV(芽生病毒)感染后的代谢诱导刺激了病毒清除和抗病毒蛋白 gloverin 的产生。此外,我们证明了腺苷受体信号 (AdoR) 在调节杆状病毒感染后的这种代谢重编程中起着重要作用。通过使用第二个鳞翅目模型草地贪夜蛾 Sf-21 细胞,我们证明了由腺苷信号调节的糖酵解诱导是调节杆状病毒感染允许性的保守机制。我们目前的研究中的另一个有趣发现是,BmNPV 和 AcMNPV 感染都会引起代谢活化,但似乎 BmNPV 感染会缓和 ATP 产生的水平,这与 AcMNPV 感染后的急剧增加形成鲜明对比。我们鉴定出 BmNPV 感染诱导的潜在 AdoR miRNA,并得出结论,BmNPV 可能试图通过抑制腺苷信号传导并进一步降低宿主的抗杆状病毒反应来最大限度地减少代谢活化。我们目前的研究表明,杆状病毒感染后腺苷信号传导激活能量合成是宿主的生理反应,对于支持抗感染的先天免疫反应至关重要。
Novavax COVID-19 佐剂疫苗含有由杆状病毒感染的 Sf9(秋粘虫)昆虫细胞产生的重组 SARS-CoV-2 刺突蛋白和含有皂皮树(Quillaja saponaria Molina)皂苷的 Matrix-M TM 佐剂。其他成分包括胆固醇、磷脂酰胆碱、磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠二水合物、氯化钠、磷酸氢二钠七水合物、磷酸二氢钠一水合物、聚山梨醇酯 80 和注射用水。该疫苗还可能含有少量杆状病毒和昆虫细胞蛋白和 DNA。
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Novavax COVID-19 疫苗佐剂含有由杆状病毒感染的 Sf9(秋粘虫)昆虫细胞产生的重组形式的 SARS-CoV-2 刺突蛋白和含有从皂皮树(Quillaja saponaria Molina)中提取的皂苷的 Matrix-M TM 佐剂。其他成分包括胆固醇、磷脂酰胆碱、磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠二水合物、氯化钠、磷酸氢二钠七水合物、磷酸二氢钠一水合物和聚山梨醇酯80。疫苗中还可能含有少量杆状病毒和昆虫细胞蛋白和DNA。
重组流感疫苗 ( RIV ) 制造利用位于流感病毒表面的血凝素 (HA) 蛋白(一种抗原)来制造流感疫苗。为了制造 HA 蛋白,科学家获取 HA 蛋白的遗传密码并将其与杆状病毒(一种不会感染人类的病毒)相结合。然后将杆状病毒引入实验室培养的细胞,并传递如何制造 HA 蛋白的遗传信息。实验室培养的细胞利用这种遗传物质来制造许多 HA 蛋白。然后在实验室中收集和纯化这些 HA 蛋白。纯化的血凝素蛋白用于制造 RIV。由于 HA 蛋白不是活流感病毒,因此 RIV 不会让您感染流感。此外,RIV 所含抗原的量是标准剂量疫苗的三倍。