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无标记的等离激子生物传感器，用于快速，定量和高度敏感的Covid-19血清学：实施和临床验证
摘要：血清学检验对于控制和管理Covid-19大流行至关重要（诊断和监测，以及流行病学和免疫学研究）。我们引入了一种直接的血清学生物传感器测定，该测定方法采用了基于等离子体学的专有技术，该技术可对严重急性呼吸道综合征2（SARS-COV-2）抗体的快速识别和量化临床样本中的急性急性呼吸综合征2（SARS-COV-2）抗体进行快速（<15分钟）的识别和量化。便携式等离子体设备采用定制设计的多蛋白（RBD肽和N蛋白）传感器生物芯片，并在使用多克隆抗体的低NG ML-1范围内达到检测限。它也采用了WHO批准的抗SARS-COV-2免疫球蛋白标准。具有COVID-19阳性和负样本的临床验证（n = 120）表明其出色的诊断敏感性（99％）和特定的牙齿（100％）。这将我们的生物传感器定位为一种准确且易于使用的诊断工具，用于在实验室和分散环境中使用疾病管理和评估疫苗接种或治疗期间的免疫学状况的快速可靠的Covid-19血清学。
14C 标记的半胱氨酸和蛋氨酸在草原生产力梯度上的快速微生物吸收和矿化
半胱氨酸 (Cys) 和蛋氨酸 (Met) 对陆地 S 循环至关重要，因为它们是植物营养和微生物生长所需的碳 (C)、氮 (N) 和硫 (S) 来源。然而，土壤微生物预计会争夺这些 S-氨基酸中的 C、N 和 S。我们假设，由于植物的 C 输入较低，植物生产力低的土壤中的微生物竞争会更激烈。在这里，我们将 14 C 标记的 Cys 和 Met 添加到从海拔驱动的原始草地生产力梯度收集的 5 种土壤中，然后我们用离心排水程序在 60 分钟内测量微生物吸收，然后用 NaOH 捕集器在 48 小时内测量随后的矿化。我们的结果表明，Cys 和 Met 都被土壤微生物迅速吸收，半衰期从 0.34 到 2.14 分钟不等，比通过测量 14 CO 2 释放确定的半衰期快一个数量级（或更多）。微生物从土壤溶液中去除 14 C 和随后释放 14 CO 2 之间存在相当大的延迟，这表明草原土壤中 Cys 和 Met 的降解主要通过生物过程发生。土壤微生物对 Cys 和 Met 的吸收主要由高亲和力运输系统 (0.01 – 0.1 mM) 控制，而亲和力较低的运输系统在较高底物浓度 (1 – 100 mM) 下变得更为重要。此外，在生产力较低、海拔较高的地区，Cys 和 Met 的微生物吸收和矿化率下降，这表明有机 N 和 S 的周转以及随后植物吸收的有效性可能受土壤肥力控制。我们得出结论，尽管 Cys 和 Met 可能代表土壤中 DON 和 DOS 库的小部分，但由于它们在草原土壤中的快速周转和补充率，它们对土壤微生物和植物营养的重要性可能被低估了。
评估雄性大鼠不同大脑区域中FADD和相关分子标记的每日调节
fi g u r e 2每天调节FADD（A – C）和P-ERK/T-ERK比（D – F）在大鼠脑前额叶前皮层（PFC）（A，D），纹状体（B，E）和Hippocampus（C，F）中。治疗组：Zeitgeber时间（ZT）2，ZT5，ZT8，ZT11，ZT14，ZT17，ZT17，ZT20和ZT23（ZT0，点亮或不活动时期； ZT12； ZT12，Lights-Off或活动期）。有关每个标记的数据点（n）的特定数量和分析时间点的特定数量，请参见表S1。列代表每组N实验的平均值±SD。为每只大鼠显示各个符号。cosinor分析，以评估24小时的节奏性。用两尾学生t检验评估了灯与灯的灯之间的比较。底部面板：为每组实验显示了FADD，β-Actin，p-erk和T-ERK标记的代表性免疫印迹。* p <.05; ** p <.01; *** p <.001; NS：无统计显着性（p> .05）。
评估雄性大鼠不同大脑区域中FADD和相关分子标记的每日调节
fi g u r e 2每天调节FADD（A – C）和P-ERK/T-ERK比（D – F）在大鼠脑前额叶前皮层（PFC）（A，D），纹状体（B，E）和Hippocampus（C，F）中。治疗组：Zeitgeber时间（ZT）2，ZT5，ZT8，ZT11，ZT14，ZT17，ZT17，ZT20和ZT23（ZT0，点亮或不活动时期； ZT12； ZT12，Lights-Off或活动期）。有关每个标记的数据点（n）的特定数量和分析时间点的特定数量，请参见表S1。列代表每组N实验的平均值±SD。为每只大鼠显示各个符号。cosinor分析，以评估24小时的节奏性。用两尾学生t检验评估了灯与灯的灯之间的比较。底部面板：为每组实验显示了FADD，β-Actin，p-erk和T-ERK标记的代表性免疫印迹。* p <.05; ** p <.01; *** p <.001; NS：无统计显着性（p> .05）。
基于简单序列重复 (SSR) 标记的南非仙人掌梨品种 (Opuntia spp.) 的遗传多样性和分化
摘要 仙人掌属植物（Opuntia ficus-indica (L.) Mill.）是能够耐受恶劣环境条件的最知名农作物之一。南非是少数拥有大量仙人掌种质资源的国家之一，这些种质资源代表了移地保护种群。然而，人们对该种群的遗传多样性知之甚少。此外，一些基因型在形态上不明显，因此，对于新手农民和研究人员来说，识别种质资源中的样本是一项挑战。本研究旨在使用八个简单序列重复 (SSR) 标记来区分和测量代表南非仙人掌种质资源的 44 个栽培品种的遗传多样性。显然，这些品种具有中等水平的多样性（平均多态性信息含量 PIC = 0.37，Nei 无偏基因多样性 = 0.42），可区分 90% 的品种。使用算术平均数 (UPGMA) 的非加权配对法对品种进行分析，发现主要分为三个聚类，而主坐标分析 (PCoA) 则显示，根据品种在农业中的用途，其聚类不明显。
Microsoft Word-报告标准SRS 332.0费用，投资和交易费用以及咨询以来标记的成本。docx
接收实体是RSE许可人：由RSE（付费实体）； 接收实体是连接的实体：由RSE； RSE许可人或连接的实体（付款实体）；或接收实体不是连接的实体：由RSE或RSE许可人（付款实体）； APRA期望RSE被许可人获得以下信息，以便在表1中报告服务提供商的详细信息，并根据相关费用组类型，费用类型和服务安排参与类型类别在表2和SRF 332.0接收实体的详细信息中分类；接收实体与RSE许可人之间的关系；给予金钱考虑或其他利益的目的（提供给RSE的服务的目的）；以及接收实体以及该实体交易的任何实体（包括RSE许可人或连接的实体，接收实体的利润均可归因于该金钱，考虑或其他收益以在相关费用类型类型类型的相关费用类型和其他福利中分类相关金额，因此，接收实体的利润归因于接收实体的方式。
使用 unc-58 选择标记的混淆凸显了对共 CRISPR 基因进行基因分型的重要性
使用模型遗传生物秀丽隐杆线虫 (C. elegans)，人们在提高 CRISPR/Cas9 编辑效率方面取得了多项进展。我们在此报告了 co-CRISPR“标记”基因的使用：发生过 co-CRISPR 事件的线虫具有明显的、可见的表型，这有助于选择携带目标基因中 CRISPR 事件的线虫。然后通过与野生型杂交去除 co-CRISPR 基因中的突变，但如果 CRISPR 和 co-CRISPR 基因难以分离，则这可能具有挑战性。但是，如果所选线虫呈现野生型并且是从一窝中选出的，则分离出 co-CRISPR 修饰基因可能不那么困难。在这些窝中，单个注射线虫的后代中有很大一部分表现出 co-CRISPR 表型，表明 CRISPR 效率高。这样可以产生在目标基因位点含有所需突变但不带有 co-CRISPR 突变的线虫。使用此方法，我们成功地在秀丽隐杆线虫 nlg-1 基因中产生了离散突变。然而，在对 nlg-1 基因进行测序以验证编辑的过程中，我们发现在 co-CRISPR 基因 unc-58 处发生了基因组重排，通过目测观察，这些重排在表型上是无声的，但却导致以挣扎行为评分的运动能力显著降低。这突出表明，在下游基因功能分析之前，应仔细考虑 co-CRISPR 介导的基因变化的隐藏后果。鉴于此，我们建议在利用表型选择作为流程一部分的 CRISPR 程序之后对 co-CRISPR 基因进行测序。
荧光标记的维多珠单抗可用于可视化炎症性肠病中的药物分布和粘膜靶细胞
摘要 目的 改善 IBD 患者选择和生物疗法（如维多珠单抗）的开发需要彻底了解作用机制和靶标结合，从而提供个性化的治疗策略。我们的目的是可视化静脉注射荧光标记的维多珠单抗 vedo-800CW 的宏观和微观分布，并使用荧光分子成像 (FMI) 识别其靶细胞。 设计 进行了 43 次 FMI 程序，包括内窥镜检查期间的宏观体内评估，然后进行宏观和微观体外成像。在 A 期，患者在内窥镜检查前接受 4.5 毫克、15 毫克 vedo-800CW 或无示踪剂的静脉注射。在 B 期，患者接受 15 毫克 vedo-800CW，然后接受未标记的（亚）治疗剂量的维多珠单抗。结果 FMI 定量显示炎症组织中 vedo-800CW 荧光强度呈剂量依赖性增加，15 mg（153.7 au（132.3–163.7））是最适合的示踪剂剂量，而 4.5 mg（55.3 au（33.6–78.2））则为最合适剂量（p=0.0002）。此外，在给予治疗剂量的未标记维多珠单抗后给予 vedo-800CW 时，荧光信号降低了 61%，表明炎症组织中的靶标已饱和。荧光显微镜和免疫染色显示，维多珠单抗渗透到发炎的粘膜中并与几种免疫细胞类型相关，最显著的是与浆细胞相关。结论这些结果表明 FMI 有望确定炎症靶组织中药物的局部分布并识别药物靶细胞，为靶向药物在 IBD 中的应用提供了新的见解。试验注册号 NCT04112212。
使用细胞FAD自动荧光作为无标记的细胞属性，用于产生嵌合抗原受体-T细胞
嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法已成为治疗血液恶性肿瘤的一种有吸引力的方法。但是，这种疗法的可访问性受到复杂制造工艺，有限的制造设施能力以及高技能劳动力的要求，以进行CAR-T细胞生产的手动步骤。为了最大程度地减少手动过程，CAR-T细胞制造场正在向封闭和自动化系统转移，包括分析工具，可提供对生产中细胞的间歇性监测的分析工具。因此，需要在封闭系统中密切监测CAR-T细胞的无标签技术。在这里，我们评估了配备了405nm紫罗兰色激光器的流式细胞仪的使用，用于研究T细胞中NADH和FAD自动荧光。我们的结果表明，NADH和FAD自动荧光的增加与T细胞激活标记，CD25的上调显着相关，并且在T细胞激活后的头三天，在消费培养基中的细胞外乳酸的增加。我们通过建立CAR-T细胞中FAD的平均荧光强度（MFI）的变化速率与使用G-Rex Biorx Biorextor的T细胞增殖速率之间的变化速率之间的关系来确定CAR-T细胞生产的终点的潜在用途。共同表明，自动荧光，尤其是FAD自动荧光，可以用作无标记的生物标志物（细胞属性），用于监测CAR-T细胞生产过程中T细胞激活和扩张。使用405nm可见光代替了遗传毒性紫外线波长来评估NADH和FAD自动荧光，为将自动荧光测量结果铺平了一种方式，以将自动荧光测量纳入封闭和自动化的系统中，以用于对CAR-T细胞制造的过程中的监测。
使用直接检测装置获取的能量滤波器中中间能量损失时标记的生物标本的元素映射
鳗鱼技术已应用于材料中，以绘制单个原子敏感性5-7和生物科学的映射元素，以检测和量化许多内部元素。8–11鳗鱼技术可以在透射电子显微镜（TEM）模式中应用，通常称为能量过滤TEM（EFTEM）12-16或扫描透射透射电子显微镜（STEM）模式，称为Stem-Eels或EELS Spectrum-Imimiganging。17–22尽管EFTEM模式的灵敏度低于Stem-Eels，但它提供了更大的视野，至少要大的数量级，通常为10 5 –10 7像素，而茎 - 茎中的10 3 –10 5像素。10,17对于某些生物学应用，更包含的视野与分辨率或灵敏度一样重要，就像将颜色EM电子探针应用于同时在细胞中标记多个细胞蛋白/细胞器的情况一样。23–25在我们开发的方法中，多个靶向分子的定位是通过序列沉积与二氨基苯胺结合的序列沉积来实现的，二氨基苯胺被正交光泽剂/过氧化物酶选择性地氧化。23然后，通过EFTEM模式获得的LAN比的核心损坏或高损坏（M 4,5边）元素图/地图在伪色中叠加在传统的电子显微照片上，以创建颜色的EM图像。23,26,27