抗生素耐药性 作用方式 靶点 常见用途 (mm) 氨苄西林 <21 结合青霉素-细胞壁 (PBPs),抑制肽聚糖的最终转肽状态(大肠杆菌、奇异变形杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌) 杆菌肽B-10 <9 结合脂质载体分子(紫杉醇 A / B-10) 细胞壁窄谱(革兰氏+肽聚糖生物体:构建块、葡萄球菌、链球菌) 氯霉素 <13 结合核糖体亚基 50S 蛋白,防止氨基酸转移到脑膜炎球菌,生长多肽H. influenzae) 链 Novobiocin <17 与酶 DNA 窄谱 (NB) DNA 旋转酶结合,复制 (主要用于防止抗革兰氏阳性菌 S. aureus 复制过程中 DNA 解开) 有关抗生素列表,请参阅单元 5 末尾的完整表 15.1
摘要目前,全基因组测序(WGS)数据尚未显示与常用的β-LAC TAM/β-内酰胺酶抑制剂(BL/BLI)组合的大肠杆菌易感性概况:ampicillin-sulbactam(sam),amoxicil-lin-clavulavulanate(amclavulanate(amc)和pippirclin(ampicillin-sulbactam(sam)和pipperp)和pippober(ampicillin-sulbactam(sam)和pipeper),在没有头孢菌素耐药性的情况下,对这些BL/BLI的进行性抗性(也称为对BL/BLI(ESRI)的延伸谱耐药性)的渐进性主要主要是由于BLA TEM变体的拷贝数增加而引起的,而BLA TEM变体的拷贝数量增加,这在WGS数据中未经常评估。我们试图通过对147个大肠杆菌细菌分离株的WGS分析来提高基因扩增的添加是否可以改善基因型-pheno型关联,而BL/BLI的类别增加了非敏感性,范围从氨苄西林(AMP)(AMP)易感性到对所有三个BLIS的完全抗性。与BLA TEM在ESRI中的关键作用一致,至少具有至少氨苄西林的112/134菌株(84%)非敏感性编码的BLA TEM。在40/112(36%)菌株中存在BLA TEM扩增的证据(即Bla TEM基因拷贝数估计> 2×)。BLA TEM拷贝数与最小抑制浓度的AMC和TZP之间存在正相关(P <0.05),但对于SAM没有(P = 0.09)。在AMC和TZP-NON敏感性的aMC和TZP-NON敏感性中,β-内酰胺抗性机制的多样性(包括非CECF三脱三甲酮水解BLA CTX-M变体),BLA OXA-1,AMPC和BLA TEM强启动子突变更大。我们的研究表明,WGS数据(包括β-内酰胺酶编码基因扩增)的全面分析可以帮助用AMC或TZP非敏感性对大肠杆菌进行分类,但要辨别从SAM易感性到SAM使用遗传数据的SAM非敏感性的过渡。
一名 4 个月大的女婴,最近 2 周出现呼吸窘迫和口服摄入量减少,SpO2 为 84%。开始静脉注射抗生素氨苄西林+氯唑西林和头孢噻肟,并给予补充氧气,使 SpO2 改善至 97%。全血细胞计数显示白细胞计数升高,胸部 X 线摄影显示 RTI 降低。免疫缺陷检查正常。MTB Gene Xpert 和真菌菌丝均为阴性。胸部 HRCT 显示右上叶前段和后段以及双侧下叶上段和基底段呈斑块状亚段/胸膜下肺不张改变。患者的基因研究测试已送往德国。第 21 天,血氧饱和度开始下降。第 38 天,基因研究报告提到 ABCA3 基因中存在纯合的可能致病变异,导致诊断为常染色体隐性 SMDP3。孩子于第45天死亡。
1。复制的起源(ORI):从中开始复制的序列。当DNA链接到该序列时,它可以在宿主细胞中复制,从而控制链接的DNA的拷贝数。2。可选标记:这有助于通过编码对抗生素(例如氨苄西林或四环素)的抗性来识别和选择转化的细胞。这些标记被用来区分非转化剂和转化剂,从而确保只有重组DNA的细胞存活。3。克隆位点:插入异物DNA需要限制酶的单个识别位点。多个限制位点可以生成使克隆过程复杂化的片段。外源DNA的插入通常会破坏一种抗生素抗性基因之一,有助于鉴定成功的重组剂。4。插入灭活:该技术用于识别重组质粒。当插入异物DNA片段时,它会破坏基因的编码顺序,例如蓝白选择过程中的Lac Z基因。重组菌落由于lac z基因的失活而显得白色,而非重组剂显得蓝色。5。植物和动物的载体:在植物中,细菌农杆菌tumefaciens提供T-DNA,转化植物细胞并将其修改为肿瘤细胞。ti
粪肠球菌129 BIO 3B是一种乳酸细菌,已安全用作益生菌产品已有100多年了。最近,由于某些粪肠球菌属于万古霉素的肠球菌。致病潜力较少的粪肠球菌组已被分为一个单独的物种(乳糖肠球菌)。在这项研究中,我研究了粪肠球菌129 Bio 3b以及粪肠球菌129 BIO 3B-R的系统发育分类和安全性,该含有天然对氨苄西林具有抗性。使用特定基因区域的质谱和基本局部比对搜索工具分析无法将3B和3B-R区分为E.粪肠球大肠杆菌或乳酸菌。然而,成功识别3B和3B-R的多焦点序列与乳酸螺旋体相同。总体基因组相关性指数表明,3B和3B-R与乳酸乳乳酵母具有很高的同源性。用E.乳酸性乳核e物种特异性引物证实了3B和3B-R的基因扩增。氨苄青霉素的最低抑制浓度被证实为3B为2 µg/ml,这是欧洲食品安全局设定的粪肠球大肠杆菌的安全标准。基于上述结果,将粪肠球菌129 Bio 3b和E.粪肠球菌129 BIO 3B-R分类为乳酸菌。除了FMS21之外,没有致病基因的缺乏表明这些细菌可安全用作益生菌。
协议#:PI具有38年的尿素发育性大肠杆菌和其他BSL-2细菌物种的经验。过去,PI遵循了有关BSL-2生物安全预防措施的NIH指南。PI使用BSL-2细菌进行了38年的分子操作经验。重组质粒的构建用于创建大肠杆菌重组质粒,毒力因子基因将在4014 PSSC中的大肠杆菌菌株NU149或UTI89 DNA中放大PCR。每种PCR产物的设计将具有限制性核酸内切酶位点,将DNA侧翼的固定在PPP2-6,PCRISPPATHBRICK或PMMB91中。将使用适当的限制性核酸内切酶切割DNA,并与质粒DNA连接,还可以用适当的限制性核酸内切酶切割。连接的DNA将转化为大肠杆菌DH5α细胞,为PPP2-6和PCRISPPHATHBRICK质粒选择PMMB91质粒或氯霉素的氨苄西林抗性。含有正确的毒力因子基因的转化子将通过限制性核酸内切酶消化验证。验证后,将纯化的质粒DNA被电穿孔到大肠杆菌NU149或UTI89中。电穿孔比色杯可单一使用,并将其放入高压釜袋中。菌落将在含有氯霉素或氨苄青霉素的Luria琼脂板(LA)板上选择。使用后,板将被丢入高压釜袋中,用于使用高压灭菌。先前的研究表明,大肠杆菌可以自然对氯霉素和氨苄青霉素产生抗性。
这项研究的重点是从巴格达市的根际土壤中分离出的鲍曼尼杆菌产生和纯化的铁载体,并与所选抗生素进行独立和结合评估其生物活性。使用Chrom琼脂,生化和生理测试进行细菌鉴定,并通过PCR扩增16S rDNA管家基因确认。在培养琥珀酸酯肉汤中的细菌后,使用乙酸乙酯提取铁载体,并通过HPLC纯化,在403 nm的波长下检测到。从下呼吸道感染中获得了总共38种细菌分离株,包括大肠杆菌,肺炎克雷伯氏菌,铜绿假单胞菌,铜绿杆菌,baumanniii,金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌和塞拉蒂亚和srratia marcesencens。用13种抗生素进行的抗生素敏感性测试显示,氨苄西林(65.7%)和头孢曲松(63.1%)的抗性率最高,而使用amikacin(15.7%)观察到最低的耐药性。对铁载体的协同活性与头孢曲松,头孢嗪和庆大霉素相结合,以针对多剂量抗性(MDR)分离株进行了测试。通过铁载体和庆大霉素与金黄色葡萄球菌的结合观察到了最显着的抗菌活性,而对鲍曼尼曲霉的效果最小。总之,从下呼吸道感染中成功鉴定出38种细菌分离株。铁酚与庆大霉素的结合表现出对金黄色葡萄球菌的显着抗菌活性,但对鲍曼尼曲霉的作用无效。
* 通讯作者;SI Umeh * 电子邮件:elisarahumehsam@yahoo.co.uk 摘要 酸奶是一种由乳酸杆菌和链球菌等细菌作用产生的发酵乳饮料,在世界各地广泛食用。它具有非常好的营养价值,因此对消费者的健康非常有价值。这项研究旨在确定 Owerri 大都市内消费的酸奶的细菌污染情况。从 Owerri 的商店和街头小贩购买了 17 个酸奶品牌(包括品牌产品和本地产品)的三份(共 51 种)。通过营养琼脂上的倾注平板法测定样品的总异养菌计数。样品还将接种在 MacConkey 琼脂和血琼脂平板上,并通过标准形态学和生化技术鉴定分离物。结果表明,样品具有高微生物负荷,范围从 10 2 到 10 7 。 30 个酸奶样品(58.82%)含有 3 种或以上不同的分离菌,10 个样品(19.61%)含有 2 种分离菌,10 个样品(19.61%)仅含有一种分离菌。分离菌包括金黄色葡萄球菌、假单胞菌、乳酸杆菌、链球菌、芽孢杆菌和变形杆菌。药敏试验表明,分离菌对氨苄西林的耐药率为 40% 至 72.7%,对氯霉素的耐药率为 50% 至 90%,对阿莫西林的耐药率为 37.5% 至 72.7%。此外,对阿莫西林/克拉维酸的耐药率为 40% 至 72.7%。对氟喹诺酮类药物的耐药率为 10% 至 54.5%,而对氨基糖苷类药物的耐药率为 5% 至 45.5%。对头孢菌素的耐药率为 25% 至 63.6%。结论是,奥韦里大都市内消费的酸奶细菌污染程度高,抗菌素耐药性程度高,公共卫生风险大
nzyeasy克隆和表达系统旨在将任何PCR生成的片段定向克隆到由Nzyeasy酶混合物介导的单个连接酶独立的反应中,将任何PCR生成的片段定向到线性化的PHTP载体中。向量 - 互补的悬垂物,其中包含由Nzyeasy酶识别的特定序列,通过使用具有适当5'扩展的引物,将其掺入PCR产物中。在存在Nzyeasy酶的情况下与线性化的PHTP载体生成的插入物相结合时,两个DNA分子将通过单链区域的碱基对互补而退火。反应发生在单管沿三个温度依赖的步骤持续80分钟。含有感兴趣片段的圆形重组载体。该系统允许达到高克隆效率(80-100%),并且不需要使用DNA连接酶。此外,没有进一步的治疗(例如限制消化,磷酸化或钝性抛光剂)是需要插入物的。该系统还允许将先前克隆在其他质粒载体中的基因转移到PHTP载体中,只要两个向量具有不同的可选标记,并且要转移的基因侧翼是适当的克隆区域(请参阅第12页)。PCR生成的片段可以克隆到PHTP0克隆载体中(并入到Nzyeasy克隆套件中,CAT。编号MB281),它是一种标准的PUC衍生物,具有赋予大肠杆菌抗氨苄西林的基因。另外,插入物可以直接克隆到耐卡纳米霉素的PHTP表达向量之一中,而无需经过繁琐而费力的中间阶段。PHTP表达载体设计为实现大肠杆菌中高水平的重组基因表达。
由于商业饮用水的成本上涨,居民(尤其是在农村地区)越来越依赖自流井水,而自流井水通常是未经处理的,并且没有经常测试是否有损坏。这可能导致摄入对抗生素耐药性的微生物的摄入风险更高。因此,这项研究的重点是从菲律宾Losbaños,菲律宾的Losbaños中检测出来自选定Barangays(Bayog,Malinta和Mayondon)的自流井水样品的粪便(特别是大肠杆菌)。分离的大肠杆菌以获得抗菌素耐药性。使用多管发酵法确定,在30个水样中,大肠菌群的八个水样呈阳性。在八个样品(MY2-2,ML2-3和ML2-4)中,有三个获得了大肠杆菌分离株,如通过表型和分子表征所识别的。使用磁盘扩散测定法,在分离株中鉴定出抗生素头孢唑酮,Meropenem,loxacinem和甲氧苄啶磺胺甲恶唑的耐药模式。的结果表明,MY2-2对头孢曲松,MeropeNem和甲氧苄啶磺胺甲氧唑具有抗性。 ML2-3对头孢唑酮和MeropeNem具有抗性,而ML2-4对所有四种抗生素具有抗性。聚合酶链与引物检测到TEM基因的反应,这是一种扩展的β-内酰胺酶基因,表明分离株对氨苄西林和青霉素具有抗性。表型和分子方法的结果表明分离株具有多药耐药性。根据家庭访谈,隔离了MY2-2的自流井水被10个家庭用来饮酒。因此,地方政府部门应定期监测自流井水的微生物质量,进行教育和信息运动,以了解可以从消耗不洁的水中染上的疾病,并确保可以使用饮用水,尤其是对于没有净化水的家庭。