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World File Search System琼脂糖
使用 Dharmacon Edit- 对斑马鱼胚胎进行显微注射……
图 1：微注射 Edit-R Cas9 核酸酶 mRNA 和合成 crRNA:tracrRNA 的斑马鱼胚胎具有可检测的编辑事件。仅微注射 Edit-R Cas9 mRNA（+/+ 泳道）或微注射 Edit-R Cas9 mRNA 加靶向 GFP 的 crRNA:tracrRNA（+ 泳道）。注射后 2 天制备基因组 DNA，并使用位于切割位点两侧的引物进行 PCR。使用 T7EI 进行 DNA 错配分析，并在 2% 琼脂糖凝胶上分离样品。使用 ImageJ 软件估计由于基因编辑而导致的插入和缺失百分比 (Indel %)，并显示在泳道底部。在所分析的斑马鱼胚胎中，75% 实现了使用靶向 GFP 的 crRNA:tracrRNA 编程的 Cas9 mRNA 的靶向 DNA 切割。
从DNA构造到1天的蛋白质
图2。吉布森组装反应效率和准确性对反应时间的依赖性。（a）与吉布森组装反应混合物转化的大肠杆菌菌落形成的比较。数据代表具有标准偏差的平均CFU计数（n = 9）。（b）RCA反应使用吉布森组装克隆产物作为模板产生。使用Quant-IT PICOGREEN DSDNA测定试剂盒对反应产量进行定量。数据表示标准偏差（n = 3）的平均值。（c）使用插入片段侧面的载体特异性引物对大肠杆菌转化体进行群落PCR筛选。用SYBR安全染料将等量的PCR产物加载在1％的E-E-Gel琼脂糖凝胶上。m：e-gel 1 kb Plus Express DNA梯子用作分子大小标准，NC：由无插入的矢量组成的负对照，NTC：非板块对照。
大师班 1. DNA 分离：样品制备方法和分离程序的基础知识
材料和步骤 微量离心管 20g/l CTAB 研钵和研杵 1.4M NaCl 离心机 0.1M Tris-HCl pH 计 20mM Na2EDTA 称重天平 dH2O 移液器吸头 硼酸 刮铲 Tris 碱 称量皿/纸 EDTA 移液器 DNA 大小标准（Ladder DNA） 烧杯-烧瓶 样品（生菜叶） 6x 凝胶上样缓冲液 琼脂糖 溴化乙锭（0.5 ug /ml） 1X TBE 缓冲液 A. 制备 0.5 M EDTA 原液（500 ml） 称量 93.05 g EDTA 并将其溶解在 200 ml dH 2 O 中，同时用磁力搅拌。用 NaOH 将 pH 值调节至 8.4。用 dH 2 O 将体积调节至 500 ml。
100 bp DNA梯子
描述100bp DNA梯子设计用于对琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶上宽范围双链DNA片段进行尺寸和近似定量。梯子由十个色谱纯化的单个DNA片段（基本对）组成：1000、900、800、700、600、500、500、400、300、300、200和100。它包含一个参考带（500 bp），以方便方向。梯子溶解在te buffer中。存储缓冲区（TE缓冲区）：10mm Tris-HCl（pH 7.6），1mm EDTA。6x Tridye DNA加载溶液10 mM Tris-HCl（pH 7.6），0.03％溴酚蓝，0.03％二甲苯氰醇FF，0.15％橙色G，60％甘油和60 mM EDTA。
高通量筛选与实验鉴定...
系统和JAVA Codon Adaptation Tool 进行密码子适配。优化后的序列由上海生工生物工程有限公司通过 BamH1 和 XhoI 酶切位点合成并克隆到来自 pGEX-6p-1 质粒（美国 Novagen）的表达载体中。将重组质粒 pGEX-6p-1-Mpro 转化的 E. coli BL21（DE3）细胞（美国 Invitrogen）在 2 L Luria-Bertani 培养基中于 37 ℃ 下生长至 OD600 达到 0.6 后，加入 0.2 mM IPTG，16 ℃ 诱导重组蛋白表达过夜。将菌体悬浮在 PBS 中，超声波破碎。离心收集上清液并与谷胱甘肽 Sepharose 4B 琼脂糖（美国 GE Healthcare）混合，4 ℃ 下孵育 3 h。然后用 PBS 清洗珠子，并加入 preScission 蛋白酶 (GE) 以切割 GST 标签。含有
CRISPR-Cas9：基因组编辑的生物学和技术
质粒 DNA（标记为红色）被选为我们在实验室中制备的单向导 RNA 的靶序列。马丁将这些单向导 RNA 添加到纯化的 Cas9 蛋白中，并将它们与质粒 DNA 分子一起在实验室试管中孵育。为了分析该实验的结果，他在琼脂糖凝胶系统中将不同的切割 DNA 产物彼此分离，如图所示。您可以在该凝胶系统的每个泳道中看到，根据向导 RNA 与质粒 DNA 相互作用的位置，Cas9 会产生切口。通过在不同的位置切割质粒，以便同时将两个双链断裂引入质粒，我们可以将这些切割的 DNA 片段释放到凝胶系统中。如您所见，每个切割的质粒 DNA 片段根据片段的大小迁移到不同的位置。
porphyran降解系统在东亚人群的肠道微生物群中的系统发育和地理上是完整的
图1：A）Porphyran重复部分的化学结构。硫酸化二糖 - 卟啉二糖 - 可以在D-半乳糖的位置呈现甲基，给出甲基化和未甲基化的卟啉成分。通过生物合成期间L-乳糖残基的脱硫/环化获得的琼脂糖单位是相应甲基化的。b）B。plebieus porphyran pul的组织。基于先前的转录组分析，将PUL分为三个段（PUL -PORA，-POR B和-PORC）。当在Porphyran存在下生长B. plebieus时，将BACPLE_01692到BACPLE_01699基因（称为Pul-Pora）被中度上调。这与基因的两个相邻簇：BACPLE_01668到BACPLE_01689（PUL-PORC）和BACPLE_01700到BACPLE_01706（PUL-PORB），它们被高度上调（比PUL-PORA多10倍）[16]。在（1）[16]，（2）[17]，[18]和（4）本研究中确定酶功能。
M.Sc. （分子生物学与生物技术）（AY 2023-24）M.Sc. （分子生物学与生物技术）（AY 2023-24）
V.实践•良好的实验室实践，缓冲液和试剂的准备。•离心和分光光度计原理。•细菌培养的生长和生长曲线的制备，从细菌中分离基因组DNA。•从细菌中分离质粒DNA。•lambda噬菌体的生长和噬菌体DNA的分离。•植物DNA的隔离和限制（例如大米 /月光 /芒果 / Merigold）。•通过（a）琼脂糖凝胶电泳和（b）分光光度法•使用分离的DNA定量DNA。•pagegel电泳。•质粒和噬菌体DNA，结扎，重组DNA构建的限制消化。•大肠杆菌的转化和转化体的选择•色谱技术a。 TLC b。凝胶过滤色谱法，c。离子交换色谱法，d。亲和色谱•点印迹分析，南部杂交，北部杂交。•Western印迹和Elisa。•辐射安全性和非拉迪奥同位素程序。
君主自旋DNA凝胶提取试剂盒T1120手册
•高性能：在从琼脂糖凝胶中提取和纯化DNA时，获得高产量（最高5μg），并具有去除污染物和残留盐的能力。•高浓度：在非常小的体积中洗脱，以低至5μl的洗脱，允许高度浓缩的DNA。•节省时间：仅需10分钟的旋转时间和孵化时间即可完成工作流程。•独特的列设计：自旋柱具有独特的设计，可在低体积中洗脱，并最大程度地减少缓冲液的保留和污染物的结转。•优化的缓冲液：缓冲区系统经过优化，无需调整pH或添加异丙醇。•应用兼容性：纯化的DNA已准备好用于下游分子应用，例如限制消化，DNA测序，连接，扩增和其他酶促反应。