b'/6 511 ... >79 ... ,u ... ... ... ••• ... ••7 ••• ... ••• ... ... ... ... ••• ,\>96 '97 , .. ... 600 601 ... 603 ... ••• 60& 607 608 ••• 610 '" ... 613 61' 615 •1• 617 ,u ... ••• liSltl 8 6S3 8 62-4 l':i 6lU ,4 ••• ... ••• ti.l 6)3 .,.
(A) 果蝇 (Drosophila melanogaster) 和菠萝蜜 (D. ananassae) 中 Myc 基因组邻域的同源性比较。细箭头表示果蝇 (D. melanogaster) (顶部) 和菠萝蜜 (D. ananassae) (底部) 中目标基因 Myc 所在的 DNA 链。指向右侧的细箭头表示 Myc 在菠萝蜜 (D. ananassae) 和果蝇 (D.melanogaster) 中位于正 (+) 链上。指向与 Myc 相同方向的宽基因箭头相对于细箭头位于同一链上,而指向 Myc 相反方向的宽基因箭头相对于细箭头位于相反链上。果蝇 (D. ananassae) 中的白色基因箭头表示与果蝇 (D. melanogaster) 中相应基因的直系同源性。 D. ananassae 基因箭头中给出的基因符号表示 D. melanogaster 中的直系同源基因,而基因座标识符特定于 D. ananassae。(B)GEP UCSC Track Data Hub 中的基因模型(Raney 等人,2014 年)。D. ananassae 中 Myc 的编码区显示在用户提供的 Track(黑色)中;CDS 用粗矩形表示,内含子用细线表示,箭头表示转录方向。后续证据轨迹包括 NCBI RefSeq 基因的 BLAT 比对(深蓝色,D. ananassae 的 Ref-Seq 基因比对)、D. melanogaster 蛋白质的 Spaln(紫色,D. melanogaster 的 Ref-Seq 蛋白质比对)、TransDecoder 预测的转录本和编码区(深绿色)、成年雌性、成年雄性和沃尔巴克氏体治愈胚胎的 RNA-Seq(分别为红色、浅蓝色和粉色;D. ananassae 的 Illumina RNA-Seq 读数比对)以及使用 D. ananassae RNA-Seq 由 regtools 预测的剪接点(Graveley 等人,2011;SRP006203、SRP007906;PRJNA257286、PRJNA388952)。显示的剪接点的读取深度 >1000,支持读取为红色。(C)果蝇 Myc-PB 的点图(x 轴)与
(A) 果蝇 (Drosophila melanogaster) 和果蝇 (D. miranda) 中 Pten 基因组邻域的同源性比较。细箭头表示果蝇 (D. melanogaster) (上) 和果蝇 (D. miranda) (下) 中目标基因 Pten 所在的 DNA 链。指向右侧的细箭头表示 Pten 在果蝇 (D. miranda) 中位于正 (+) 链上,指向左侧的细箭头表示 Pten 在果蝇 (D. melanogaster) 中位于负 (-) 链上。指向与 Pten 相同方向的宽基因箭头相对于细箭头位于同一链上,而指向 Pten 反方向的宽基因箭头相对于细箭头位于反链上。果蝇 (D. miranda) 中的白色基因箭头表示与果蝇 (D. melanogaster) 中相应基因直系同源,而黑色基因箭头表示非直系同源。灰色箭头表示在两个基因组邻域中都存在但不是同源的基因(在本例中为 Ror),在 D. miranda 中位于 Pten 的上游,但在 D. melanogaster 中位于 Pten 的下游。D. miranda 基因箭头中给出的基因符号表示 D. melanogaster 中的直系同源基因,而基因座标识符是 D. miranda 特有的。(B)GEP UCSC Track Data Hub 中的基因模型(Raney 等人,2014)。D. miranda 中 Pten 的编码区显示在用户提供的轨道(黑色)中;CDS 用粗矩形表示,内含子用细线表示,箭头表示转录方向。后续证据轨迹包括果蝇 (D. melanogaster) 蛋白质的 Spaln(紫色,果蝇 (D. melanogaster) 的 Ref-Seq 蛋白质比对)、NCBI RefSeq 基因的 BLAT 比对(深蓝色,果蝇 (D. miranda) 的 Ref-Seq 基因比对)、TransDecoder 预测的转录本和编码区(深绿色)、成年雌性和成年雄性的 RNA-Seq(分别为红色和浅蓝色;果蝇 (D. miranda) 的 Illumina RNA-Seq 读段比对)以及使用果蝇 (D. miranda) RNA-Seq (SRP009365) 由 regtools 预测的剪接点。所示的剪接点具有最小读取深度 10,其中 10-49、50-99 和 100-499 支持读取分别以蓝色、绿色和粉色表示。 (C) 果蝇 Pten-PB(x 轴)与果蝇直系同源肽(y 轴)的点图。左侧和底部标明氨基酸编号;顶部和右侧标明 CDS 编号,CDS 也以交替颜色突出显示。点图中的间隙表示序列相似性较低的区域。
(a)果蝇和D. ananassae中eIF4E1基因组社区的同步比较。薄的下面箭头指示了DNA链,其中基因– EIF4E1位于D. melanogaster(顶部)和D. ananassae(底部)基因组中。指向左侧的细箭头表明eif4e1在D. ananassae和D. melanogaster中的负( - )链上。指向EIF4E1的方向相同方向的宽基因箭头相对于薄的下层箭头在相同的链上,而指向EIF4E1相反方向的宽基因箭头相对于薄的底层箭头相反。白色基因箭头D. Ananassae表示与Melanogaster中相应基因的矫形学。D. ananassae基因箭头中给出的基因符号表示D. melanogaster中的直系同源基因,而基因座标识符是特定于D. ananassae的。(b)GEP UCSC轨道数据中心中的基因模型(Raney等,
1农业动物遗传学,育种和繁殖,教育部和猪遗传学和育种部关键实验室,农业和农村事务部,瓦兹洪农业大学,430070 Wuhan,P.R。R.中国。2 Yazhouwan国家实验室(YNL),Sanya Hainan 572025,P。R.China。 3瓦兹胡农业大学的可持续猪生产合作创新中心,430070 Wuhan,P。R.中国。 4 Hubei Hongshan实验室,Huazhong农业大学,Wuhan 430070,P。R.China。 5胰腺疾病实验室,吉安格大学医学院第一家附属医院,杭州310058,P。R.China。 这些作者也同样贡献:Dagang Tao,Bingrong Xu,Sheng Li和Hailong Liu。 *电子邮件:ssxie@mail.hzau.edu.cn; shzhao@mail.hzau.edu.cn; xyli@mail.hzau.edu.cn2 Yazhouwan国家实验室(YNL),Sanya Hainan 572025,P。R.China。3瓦兹胡农业大学的可持续猪生产合作创新中心,430070 Wuhan,P。R.中国。4 Hubei Hongshan实验室,Huazhong农业大学,Wuhan 430070,P。R.China。 5胰腺疾病实验室,吉安格大学医学院第一家附属医院,杭州310058,P。R.China。 这些作者也同样贡献:Dagang Tao,Bingrong Xu,Sheng Li和Hailong Liu。 *电子邮件:ssxie@mail.hzau.edu.cn; shzhao@mail.hzau.edu.cn; xyli@mail.hzau.edu.cn4 Hubei Hongshan实验室,Huazhong农业大学,Wuhan 430070,P。R.China。5胰腺疾病实验室,吉安格大学医学院第一家附属医院,杭州310058,P。R.China。这些作者也同样贡献:Dagang Tao,Bingrong Xu,Sheng Li和Hailong Liu。*电子邮件:ssxie@mail.hzau.edu.cn; shzhao@mail.hzau.edu.cn; xyli@mail.hzau.edu.cn
研究 [12–15],这使得拟谷盗成为比较遗传学、分子生物学、进化和发育等不同生物过程的绝佳模型 [2, 10, 11]。鉴于果蝇的衍生生物学,拟谷盗也
(A) 果蝇 (Drosophila melanogaster) 和果蝇 (D. yakuba) 中 eIF4E1 基因组邻域的同源性比较。细箭头表示果蝇 (D. melanogaster) (顶部) 和果蝇 (D. yakuba) (底部) 基因组中参考基因 eIF4E1 所在的 DNA 链。指向右侧的细箭头表示 eIF4E1 在果蝇 (D. melanogaster) 中位于正 (+) 链上,指向左侧的细箭头表示 eIF4E1 在果蝇 (D. yakuba) 中位于负 (-) 链上。指向与 eIF4E1 相同方向的宽基因箭头相对于细箭头位于同一链上,而指向与 eIF4E1 相反方向的宽基因箭头相对于细箭头位于相反链上。果蝇 (D. yakuba) 中的白色基因箭头表示与果蝇 (D. melanogaster) 中相应基因的直系同源。 D. yakuba 基因箭头中给出的基因符号表示 D. melanogaster 中的直系同源基因,而基因座标识符特定于 D. yakuba。(B)GEP UCSC Track Data Hub 中的基因模型(Raney 等人,2014 年)。D. yakuba 中 eIF4E1 的编码区显示在用户提供的 Track(黑色)中;CDS 用粗矩形表示,内含子用细线表示,箭头表示转录方向。后续证据轨迹包括 NCBI RefSeq 基因的 BLAT 比对(深蓝色,D. yakuba 的 Ref-Seq 基因比对)、D. melanogaster 蛋白质的 Spaln(紫色,D. melanogaster 的 Ref-Seq 蛋白质比对)、TransDecoder 预测的转录本和编码区(深绿色)、成年雌性和成年雄性的 RNA-Seq(分别为红色和浅蓝色;D. yakuba 的 Illumina RNA-Seq 读段比对)以及使用 D. yakuba RNA-Seq (SRP006203 - Graveley et al, 2010) 通过 regtools 预测的剪接点。显示的剪接点分别具有 232、500-999 和 >1000 的读取深度,支持读取为粉色、棕色和红色。 (C) 果蝇 (D. melanogaster) 中的 eIF4E1-PB (x 轴) 与果蝇 (D. yakuba) 中的直系同源肽 (y 轴) 的点图。左侧和底部表示氨基酸编号;顶部和右侧表示 CDS 编号,CDS 也以交替颜色突出显示。序列相似性降低的区域用红色圈出。 (D) 果蝇 (D. melanogaster) 中的 eIF4E1-PC (x 轴) 与果蝇 (D. yakuba) 中的直系同源肽 (y 轴) 的点图。序列相似性降低的区域用红色圈出。
摘要 RNA 引导的 CRISPR/Cas9 系统是基因组编辑的强大工具,但其靶向范围受到原型间隔区相邻基序 (PAM) 的限制。为了扩大靶向范围,开发能够识别多种 PAM 的 CRISPR 工具箱至关重要。在这里,我们使用 GFP 激活分析测试了与 Nme1Cas9 密切相关的 29 种 II-C 型直系同源物的活性,其中 25 种在人类细胞中有活性。这些直系同源物识别具有不同长度和核苷酸偏好的多种 PAM,包括富含嘌呤、富含嘧啶以及混合嘌呤和嘧啶的 PAM。我们深入表征了 Nsp2Cas9 的活性和特异性。我们还生成了一种识别简单 N 4 C PAM 的嵌合 Cas9 核酸酶,这代表了迄今为止紧凑型 Cas9 最宽松的 PAM 偏好。这些 Cas9 核酸酶显著增强了我们进行等位基因特异性基因组编辑的能力。
研究 [12–15],这使得拟谷盗成为比较遗传学、分子生物学、进化和发育等不同生物过程的绝佳模型 [2, 10, 11]。鉴于果蝇的衍生生物学,拟谷盗也