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隔离新型细菌菌株假单胞菌CSW01和Stutzerimonas Stutzeri CSW02与甲乙酰氨基生物降解的污泥
摘要：乙酰氨基氨基酚是全球最常用的药物之一，但是由于其广泛使用，它在各种环境矩阵中被发现，例如地表和地面和接地水，沉积物，土壤甚至植物，主要是由于废水的排放以及在农业中的污水污染污泥的使用而引入的。其在某些生物体中的积累可以诱导繁殖，神经毒性或内分泌疾病，因此被认为是一种新兴的污染物。这项研究报告了能够降解扑热息痛的细菌菌株中产生的隔离污泥（WWTPS）。隔离了多达17个细菌菌株，但其中只有两个被鉴定为假单胞菌CSW02和PSEUDOMONAS极australis csw01，能够降解溶液中极高的扑热息痛浓度，是唯一的碳和能源，并且没有以前没有将其描述为ParaceteMol的佩利格拉（Paracetemol）。这些细菌表明，仅在6和4小时中，降解高达500 mg l - 1的能力比文献中描述的任何其他任何其他乙酰氨基氨基糖菌株都要快得多。在降解过程中脱离了高毒性的两个主要的甲酰胺代谢物，4-氨基苯酚和氢喹酮，尽管它们很快消失了，但对于乙酰氨基酚的浓度非常快，高达500 mg l-1。这些发现表明，这两种细菌都是在水和污水污泥中用于扑热息痛生物修复的非常有前途的候选者。还计算了对扑热息痛的IC 50，以实现这两个分离株的生长，表明超级疟原虫CSW01比S. stutzeri csw02对高浓度的扑热息痛和/或其在溶液中的代谢产物的耐受性更高，这是paracetamol DeDgractamol Degradation -s. st. ster c的s. sterz02 ander c的溶液中的原因，这是paracetamol和/或它的代谢物。
铜绿假单胞菌激活凝集素靶向前药，实现自毁性抗生素释放
摘要：慢性铜绿假单胞菌感染的特征是生物膜形成，这是铜绿假单胞菌的主要毒力因子，也是广泛耐药性的原因。氟喹诺酮类药物是有效的抗生素，但与严重的副作用有关。两种细胞外铜绿假单胞菌特异性凝集素 LecA 和 LecB 是关键的结构生物膜成分，可用于靶向药物输送。在这项研究中，几种氟喹诺酮类药物通过可裂解的肽接头与凝集素探针结合，产生凝集素靶向前药。从机制上讲，这些结合物因此在全身分布中保持无毒，并且只有在感染部位积聚后才会被激活以杀死细菌。合成的前药在宿主血浆和肝脏代谢存在下被证明是稳定的，但在体外，在铜绿假单胞菌存在下，会以自毁方式迅速释放抗生素货物。此外，该前药在体外表现出良好的吸收、分布、代谢和消除（ADME）特性和降低的毒性，从而建立了第一个针对铜绿假单胞菌的凝集素靶向抗生素前药。■ 介绍
针对 las 或 pqs 群体感应的抗毒药物对囊性纤维化铜绿假单胞菌分离株的体外活性
铜绿假单胞菌引起的慢性肺部感染是囊性纤维化 (CF) 患者发病和死亡的主要原因。针对铜绿假单胞菌群体感应 (QS) 系统的抗毒力药物作为抗生素替代品或佐剂得到了深入研究。之前在非 CF 铜绿假单胞菌参考菌株中进行的研究表明，旧药物氯硝柳胺和氯福克醇可以成功地重新用作分别针对 las 和 pqs QS 系统的抗毒力药物。然而，CF 肺中频繁出现的 QS 缺陷突变体破坏了 QS 抑制剂在 CF 治疗中的应用。在这里，我们在 100 个铜绿假单胞菌 CF 分离株中研究了 QS 信号的产生和对氯硝柳胺和氯福克醇的敏感性，旨在拓宽目前对抗 QS 化合物在 CF 治疗中的潜力的认识。结果表明，我们收集的 CF 分离株中分别有 85%、78% 和 69% 能够熟练使用 pqs、rhl 和 las QS 系统。氯硝柳胺和氯福克醇在体外抑制 QS 和毒力的能力差异很大且因菌株而异。氯硝柳胺的活性范围总体较低，其对 las 信号产生的负面影响与毒力因子产生的减少无关。另一方面，氯福克醇在 CF 分离株中表现出更广泛的 QS 抑制作用，从而降低 pqs 控制的毒力因子绿脓菌素。总体而言，这项研究强调了在进行进一步的临床前研究之前针对大量铜绿假单胞菌 CF 临床分离株测试新型抗毒力药物的重要性，并证实了先前的证据，即 CF 分离株中存在对 QS 抑制剂具有天然耐药性的菌株。然而，研究还表明，对 pqs 抑制剂的耐药性低于对 las 抑制剂的耐药性，从而支持开发 pqs 抑制剂用于 CF 的抗毒力治疗。
香茅假单胞菌WXP-4一氧化二氮还原酶NosZ基因克隆、还原性能及结构
生物降解因条件温和、成本低廉、不产生二次污染等优点而受到广泛关注。6,7全球三分之二以上的N2O排放来源于土壤生态圈和水圈，在微生物反硝化途径的最后一步可以还原为无害的氮气（N2）。8–10一氧化二氮还原酶（N2OR）是唯一进行生物反硝化过程的酶，11,12因此，有效利用N2OR对于通过生物方法有效控制N2O排放至关重要。N2OR是一种周质多铜酶，为头尾相连的同型二聚体，每个单体包括两个结构域：C端的电子转移双核CuA中心和N端的催化四核CuZ中心。 13,14通常，CuA由6个氨基酸残基配体，包括1个蛋氨酸、1个色氨酸、2个半胱氨酸和2个组氨酸；CuZ则由7个组氨酸配体。15,16基于N 2 OR的三维结构，对N 2 O催化还原机理的一致看法是，N 2 O与CuZ的催化活性位点结合，然后电子从CuA转移，将N 2 O转化为N 2 。
高度通用和耐溶剂的假单胞菌 B6-2 (ATCC BAA-2545) 的基因图谱，作为多环芳烃和二恶英类化合物矿化的“超级明星”
多环芳烃 (PAH) 和二恶英类化合物（包括硫、氮和氧杂环）是广泛存在的有毒环境污染物。能够与芳香族多环化合物一起生长的多种微生物对于污染场地的生物修复和地球的碳循环至关重要。在这里，在联苯 (BP) 存在下生长的假单胞菌 B6-2 (ATCC BAA- 2545) 细胞能够同时降解 PAH 及其衍生物，即使它们以混合物的形式存在，并且能够耐受高浓度的剧毒溶剂。对菌株 B6-2 的 6.37 Mb 基因组的遗传分析揭示了负责芳香族化合物中央分解代谢系统和溶剂耐受性的基因簇共存。我们利用功能转录组学和蛋白质组学来识别与 BP 以及 BP、二苯并呋喃、二苯并噻吩和咔唑混合物的分解代谢相关的候选基因。此外，我们观察到 BP 在转录水平上的动态变化，包括芳香化合物的代谢途径、趋化性、流出泵和转运蛋白，这些可能与适应 PAH 有关。这项关于菌株 B6-2 高度多功能活性的研究表明，它
1 假单胞菌的分步遗传工程...
a 威斯康星大学麦迪逊分校化学与生物工程系，美国威斯康星州麦迪逊市 b 威斯康星大学麦迪逊分校细菌学系，美国威斯康星州麦迪逊市 c 威斯康星大学麦迪逊分校化学系，美国威斯康星州麦迪逊市 d 威斯康星大学麦迪逊分校微生物学博士培训项目，美国威斯康星州麦迪逊市 * 通讯作者。威斯康星大学麦迪逊分校化学与生物工程系，美国威斯康星州麦迪逊市。电子邮件地址：brian.pfleger@wisc.edu
定量蛋白质组学揭示了麦芽盐的甘露糖诱导铁的应力反应，并降低了铜绿假单胞菌的群体感应
摘要基于凝胶剂的药物已被重新定义为抗菌治疗候选物，并显示出对抗药性病原体的替代治疗选择的巨大潜力。凝固膜的活性（Ga 3+）是其与铁铁（Fe 3+）的化学相似性，并取代了铁依赖性途径。ga 3+在典型的生理环境中是氧化还原性的，因此使铁代谢对细菌生长至关重要。麦芽盐（GAM）是一种众所周知的凝胶水溶性配方，由中央凝胶阳离子组成，该中央凝胶配位与三个麦芽糖配体配位，[GA（Maltol -1H）3]。这项研究实施了一种无标记的定量蛋白质组学方法，以观察GAM对细菌病原体Pseudomonas铜绿菌的影响。将铁替换为镀具有模拟铁限值的反应，如与铁采集和储存相关的蛋白质的增加所示。还发现了与法定感应和蜂群运动相关的蛋白质的丰度。这些过程是细菌毒力和传播的基本组成部分，因此暗示了GAM在治疗铜绿假单胞菌感染中的潜在作用。
嗜水气单胞菌热灭活疫苗候选株的免疫原性
嗜水气单胞菌经常攻击养殖的鲶鱼，并在印度尼西亚南加里曼丹省引起运动性气单胞菌败血症 (MAS) 疾病爆发。嗜水气单胞菌攻击造成的死亡可能达到 100%，因此需要通过接种疫苗进行预防。本研究旨在检查 6 种热灭活嗜水气单胞菌疫苗候选物的潜在免疫原性，该菌株是印度尼西亚南加里曼丹省班加尔地区的一种菌株。嗜水气单胞菌菌株是从印度尼西亚南加里曼丹省班加尔区周围的水产养殖池塘中感染的鲶鱼中获得的。从10条感染MAS的鱼中分离出14株细菌，其中Sungai Batang村分离出8株（AGC-1、AGC-2、AGC-3、AGC-4、AGC-6、AKC-2、AKC-3、AKC-5），Cindai Alus村分离出6株（AGC-8、AGC-9、AKC-7、AKC-8、AKC-9、AKC-10）。AGC表示从鳃中分离出的气单胞菌，AKC表示从肾脏中分离出的气单胞菌。热灭活A.hydrophila疫苗的候选抗原是在100℃加热60分钟使其失活。结果显示，AGC-2和AGC-8菌株的抗原具有较高的免疫原性，因为与其他菌株和对照相比，它们可以提高抗体滴度。加强免疫两周后鲶鱼体内抗体滴度升高并趋于一致。交叉反应试验结果表明AGC-2和AGC-8株抗原能与AGC-1、AKC3、AKC-5株发生交叉反应，但不能与AKC-7发生交叉反应，因此AGC-2和AGC-8可推荐作为印尼南加里曼丹省MAS病的疫苗候选疫苗。
HER2 特异性假单胞菌外毒素 A PE25...
1 KTH 皇家理工学院蛋白质科学系，Roslagstullsbacken 21, 114 17 斯德哥尔摩，瑞典； haozhong@kth.se（高清）； wenyin@kth.se (WY); slindbo@kth.se (SL); haoliu2@kth.se (HL); sophia@kth.se (SH) 2 肿瘤学和病理学系，Barngatan 4，隆德大学，222 42 隆德，瑞典； mohamed.altai@med.lu.se 3 免疫学、遗传学和病理学系，Dag Hammarskjölds väg 20，乌普萨拉大学，751 85 乌普萨拉，瑞典； javad.garousi@igp.uu.se (JG); tianqi.xu@igp.uu.se（德克萨斯州）； vladimir.tolmachev@igp.uu.se (VT) 4 药物化学系，达格·哈马舍尔兹街 14C；乌普萨拉大学，751 23 乌普萨拉，瑞典；anna.orlova@ilk.uu.se 5 肿瘤治疗学研究中心，托木斯克理工大学化学与应用生物医学科学研究院，634050 托木斯克，俄罗斯* 通讯地址：torbjorn@kth.se；电话：+ 46-(0)8-790-9627 † 这些作者对这项工作做出了同等贡献。
通过热诱导 ssDNA 重组技术对假单胞菌进行高效多位点基因组编辑
单链 DNA 重组工程在肠道细菌以外物种的基因组编辑中的应用受到重组酶效率和内源性错配修复 (MMR) 系统作用的限制。在这项工作中，我们建立了一个遗传系统，用于在生物技术相关菌株 EM42 的染色体中输入多种变化。为此，设计了 PL / c I857 系统的控制下，rec2 重组酶和 P. putida 的等位基因 mutL E36K PP 的高水平热诱导共转录。短时间热转移循环，然后用一套诱变寡核苷酸进行转化，可产生不同类型的基因组变化，每次修饰的频率高达 10%。相同的方法有助于超级多样化短染色体部分，以创建功能性基因组片段文库——例如核糖体结合位点。这些结果使得假单胞菌基因组工程的多重化成为可能，这是这种重要合成生物学底盘代谢重编程所必需的。