XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search System荧光素
circCacna1c 沉默可通过 miR-29b-2-5p/NFATc1 轴抑制 ISO 诱导的心脏肥大
摘要：病理性心脏肥大是心力衰竭的重要原因之一。环状RNA（circRNA）已被研究与心脏肥大有关；然而，circRNA调节心脏肥大的机制仍不清楚。在本研究中，我们在心脏肥大中发现了一种新的环状RNA，命名为circCacna1c。用盐酸异丙肾上腺素（ISO）处理成年雄性C57BL/6小鼠和H9c2细胞以建立肥大模型。我们发现circCacna1c在ISO诱导的肥大心脏组织和H9c2细胞中上调。Western印迹和定量实时聚合酶链式反应表明，沉默circCacna1c可抑制ISO诱导的H9c2细胞中的肥大基因表达。从机制上讲，circCacna1c 在双荧光素酶报告基因检测中与 miR-29b-2-5p 竞争性结合，而 miR-29b-2-5p 在 ISO 诱导的肥大性心脏组织和 H9c2 细胞中下调。miR-29b-2-5p 抑制活化 T 细胞的核因子、细胞质钙调磷酸酶依赖性 1 (NFATc1)，以控制肥大性基因表达。沉默 circCacna1c 后，miR-29b-2-5p 的表达增加，这通过抑制 NFATc1 表达来降低肥大性基因表达。总之，这些实验表明 circCacna1c 通过 miR-29b-2-5p/NFATc1 轴促进 ISO 诱导的病理性肥大。
MicroRNA-362-3p 通过靶向 BCAP31 抑制宫颈癌的迁移和侵袭
宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，转移是患者死亡的重要原因。miRNA（microRNA）已被发现在宫颈癌转移中起关键作用，但miR-362-3p在CC中的作用尚不明确。本研究旨在探讨miR-362-3p在宫颈癌迁移和侵袭中的作用。我们比较了宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中miR-362-3p的表达水平。在CC组织中，miR-362-3p表达显著下调，这与癌症分期和患者生存有关。miR-362-3p能有效抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因检测结果显示，BCAP31（B细胞受体相关蛋白31）是miR-362-3p的直接靶蛋白。临床组织样本免疫组化检测结果显示，BCAP31在宫颈癌中异常高表达，且与临床分期呈正相关。敲减BCAP31的作用与miR-362-3p过表达类似。进一步的GSEA分析显示，BCAP31可能参与多种生物学过程，如蛋白质转运、代谢、细胞器组织等。本研究结果提示，miR-362-3p通过直接靶向BCAP31抑制宫颈癌的迁移和侵袭，恢复miR-362-3p水平可能成为未来宫颈癌的一种新治疗策略。
rs1137070 同义突变导致小鼠 Maoa 基因转录和翻译减少
单胺氧化酶 A ( MAOA ) EcoRV 多态性 (rs1137070) 是 MAOA 基因内独特的同义突变 (c.1409 T > C)，在 Maoa 基因表达和功能中起着至关重要的作用。本研究旨在探索小鼠 Maoa rs1137070 基因型与 MAOA 基因表达差异之间的关系。携带 rs1137070 CC 基因型的小鼠的 Maoa 表达水平明显较低，与 T 携带者相比的优势比为 2.44。此外，MAOA 的野生型 TT 基因型显示 mRNA 表达升高和半衰期更长。我们还深入研究了基因型之间的显著表达和结构差异。此外，很明显，Maoa 内不同的天冬氨酸同义密码子会影响 MAOA 表达和酶活性，突出了 rs1137070 与 MAOA 之间的关联。为了证实这些发现，双荧光素酶报告基因检测证实了 GAC 比 GAT 结合更有效。相反，同义突变改变了个体小鼠的 Maoa 基因表达。RNA 下拉检测表明，这种改变可能会影响与 RNA 结合蛋白的相互作用。总之，我们的结果表明，同义突变确实可以调节基因表达的下调，从而导致 MAOA 功能发生变化，并可能与神经系统相关疾病有关。
二甲双胍通过上调HSA-MIR- ...
二甲双胍广泛用于治疗2型糖尿病，最近因其潜在抗癌特性而引起了人们的关注。几项研究表明，二甲双胍治疗抑制结肠腺癌（COAD）中的细胞活力。然而，与肿瘤淋巴结（TNM）阶段有关的研究受到限制。作为COAD经常在高级阶段进行诊断，了解调节每个TNM阶段COAD发病机理的遗传因素以及二甲双胍对潜在治疗的影响。因此，我们在二甲双胍处理的COAD细胞中鉴定了TNM阶段的差异表达因子，并使用microRNA（miRNA）研究了其调节机制。通过生物信息学分析，四个连接的盒子激酶1（FJX1）和HSA-MIR-1306-3P被确定为在二甲双胍处理后在COAD中差异表达。二甲双胍治疗显着降低了细胞活力，观察到约50％的降低。使用定量实时PCR进行分析显示，与未经处理的细胞相比，二甲双胍处理后HSA-MIR-1306-3P的增加，FJX1表达降低。荧光素酶测定证实了HSA-MIR-1306-3P与FJX1的序列特异性结合。这些发现通过上调HSA-MIR-1306-3P调节FJX1表达来强调二甲双胍作为COAD的治疗剂的潜力，从而揭示了用于COAD处理的新型途径。
使用人AML细胞研究
同种异体造血细胞移植（Allo-HCT）是高危急性急性髓样白血病（AML）患者的主要治疗方法，但复发率仍然很高，并且与较差的结果相关。因此，应采用新方法来最大程度地提高移植物 - 白血病（GVL）的作用，同时应采用缓解移植物抗宿主病（GVHD）的作用。由于在小鼠中对AML进行建模困难，因此优先研究免疫缺陷NSG小鼠中的患者异种移植（PDX）来研究GVL效应。在PDX中，AML通常是通过静脉注射细胞系或从患者获得的白血病爆炸来诱导的。GVHD和GVL效应由（CO）注射人T细胞或外周血单核细胞（PBMC）诱导。这种方法使全身性白血病诱导，尤其是在动物的脾脏和骨髓中发育，但它也可能与监测疾病的困难有关，尤其是通过流式细胞仪。这可以通过使用表达荧光素酶的AML细胞或将白血病细胞移植在Matrigel中以产生易于监测的实体瘤来规避。在这里，我们提供了有关如何制备人PBMC和白血病细胞，移植它们并监测NSG小鼠疾病的详细说明。
WD40重复蛋白的磷酸化对干旱胁迫下的Camellia Sinensis中的类黄酮生物合成负调节
类黄酮构成茶厂叶片（茶花）的主要营养素。迄今为止，尽管众所周知，干旱应力会对茶叶中类黄酮的生物合成产生负面影响，但这种现象背后的机制尚不清楚。在此，我们报告了一种蛋白质磷酸化机制，该机制对干旱条件下茶叶中类黄酮的生物合成负面调节。转录分析表明，类黄酮生物合成的基因表达下调以及CSMPK4A的上调编码叶片中丝裂原激活蛋白激酶的CSMPK4A。荧光素酶互补和酵母双杂交测定法表明，CSMPK4A与CSWD40相互作用。在体外，特异性蛋白质免疫和蛋白质质谱分析的磷酸化测定法表明CSWD40的SER-216，THR-221和SER-253是CSMPK4A的潜在磷酸化位点。此外，在干旱条件下，蛋白质免疫分析发现了茶叶中CSWD40的磷酸化水平升高。三个磷酸化位点的突变产生了去磷酸化的CSWD40 3A和磷酸化的CSWD40 3D变体，这些变体被引入拟南芥TTG1突变体中。代谢分析表明，TTG1中的花色蛋白蛋白和原蛋白素含量较低：CSWD40 3D
准备。
蛋白酶抑制剂稀释液在Bugbuster®裂解试剂中的稳定性。蛋白酶抑制剂被稀释至规定的工作浓度。抑制剂抑制pronase®试剂的蛋白水解活性的能力（Fisher Scientific Cat。编号53-708-8100KU）通过使用零天的通用HT蛋白酶测定法测量，其中1天（稀释后24小时），三个（72 h）和五个（120 h）。通用HT蛋白酶测定法使用荧光素硫代氨基甲酰胺衍生物（FTCCASEIN）量化蛋白酶活性。蛋白水解活性释放了FTC标记的肽，从而增强了荧光（Ex.Max：495 nm; Em.Max：525 nm）。添加蛋白酶抑制剂鸡尾酒会抑制pronase®试剂的蛋白水解活性，从而减少荧光。在第1天，对于在8°C下孵育的样品，竞争对手片剂抑制了50％的蛋白水解活性，而Calbiochem®鸡尾酒VII抑制了蛋白水解活性的70％。在第5天，对于在8°C下孵育的样品，与Calbiochem®鸡尾酒VII相比，竞争对手片剂导致蛋白水解活性下降29％，这导致蛋白水解活性降低了57％。数据表明，在这项研究中，鸡尾酒的效率仍然高于竞争对手的平板电脑。
原创 Axin1通过靶向miR-650抑制肝细胞癌的增殖、侵袭、迁移及EMT
摘要：肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一，死亡率高，生存率低。本研究旨在寻找一种敏感性和特异性高的新型分子，用于HCC的早期诊断和治疗评估。本研究旨在探讨Axin1对肝细胞癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响和重要作用。qRT-PCR结果显示HCC中Axin1表达水平较低，而miR-650表达水平较高。荧光素酶报告基因检测验证Axin1和miR-650 mRNA水平之间呈负相关。CCK-8检测结果显示在SK-HEP-1细胞中Axin1过表达显著抑制细胞增殖能力。划痕愈合实验结果显示Axin1过表达显著抑制细胞迁移能力。跨孔侵袭实验结果显示，过表达Axin1导致SK-HEP-1细胞侵袭能力下降；WB结果显示，过表达Axin1后，E-cad蛋白水平明显升高，N-cad、vimentin、snail蛋白水平明显降低；而过表达Axin1对细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制作用可被miR-650模拟物所消除。本研究结果证实了过表达Axin1可能通过下调miR-650的表达来抑制细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。
SARS-COV-2受体ACE2 ...
抽象血管紧张素转化酶2（ACE2）是严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-COV-2）的主要细胞进入受体。ACE2表达的诱导可以作为SARS-COV-2促进其传播的策略。然而，病毒感染后ACE2表达的调节机制在很大程度上尚不清楚。使用45个不同的荧光素酶报告器，在人肺上皮细胞的转录水平（HPAEPICS）的转录水平上，发现了转录因子SP1和HNF4α分别对ACE2的积极和负调节。SARS-COV-2感染增加了SP1的转录活性，同时抑制HNF4α的转录活性。由SARS-COV-2感染激活的PI3K/AKT信号通路是至关重要的调节节点，通过增强SP1磷酸化（其活性的标志）诱导ACE2表达，并减少了HNF4α的核定位。然而，秋水仙碱处理抑制了PI3K/AKT信号通路，从而抑制了ACE2表达。在感染SARS-COV-2的叙利亚仓鼠（中型Auratus）中，密霉素A或秋水仙碱对SP1的抑制导致病毒复制和组织损伤减少。总而言之，我们的研究发现了SP1在调节ACE2表达中的新功能，并将SP1鉴定为减少SARS-COV-2感染的潜在靶标。
M01 作为一种专门针对血脑屏障的新型药物增强剂。
对于大多数药物来说，血脑屏障 (BBB) 限制了药物向大脑的输送，而血脑屏障中 claudin-5 决定着内皮旁收缩。为了绕过 BBB，我们将化合物 M01 确定为 claudin-5 相互作用的抑制剂。M01 会导致 BBB 暂时通透，具体取决于不同细胞培养模型中 3 到 48 小时内小分子的浓度。在小鼠中，大脑对荧光素的吸收在注射 M01 后的前 3 小时内达到峰值，并在 48 小时内恢复正常。与单独的细胞抑制紫杉醇相比，M01 改善了紫杉醇向小鼠大脑的输送，并减少了原位胶质母细胞瘤的生长。M01 与 claudin-5 相互作用的结果被纳入结合模型，该模型表明其芳香部分与 claudin-5 细胞外结构域和相邻跨膜片段的高度保守残基相关联。我们的结果表明了以下作用模式：M01 优先与细胞外 claudin-5 结构域结合，从而削弱粘附细胞之间的反式相互作用。由于内化和转录下调，膜状 claudin-5 水平进一步降低，使小分子能够通过细胞旁路。总之，这里引入的第一个小分子是作为药物增强剂，它特异性地使 BBB 通透足够长的时间，以允许神经药物进入大脑。