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World File Search System诱导性
利用动物历史来了解当前关于农场动物基因编辑的争论：系统综述
人们对基因编辑农场动物的兴趣日益浓厚。一些改变可能有利于动物福利（例如，提高携带“slick”基因的牛的耐热性）、环境（例如，减少携带诱导性多能干细胞的牛的甲烷排放量）和生产力（例如，携带“双肌”基因的牛的体重增加更多）。关于此类修改可接受性的现有学术研究已使用多种方法来识别影响该技术伦理和治理的社会因素。我们认为，整合历史方法（特别是来自相对较新且蓬勃发展的动物历史领域）提供了一种“预期知识”，可以帮助指导有关该主题的讨论。我们对英语、德语和西班牙语的动物历史文献进行了系统回顾，以确定政治、科学、经济、社会和文化因素对此类技术的发展和接受的影响。我们在过去关于农场动物的辩论中发现了类似的结构和断层线，为当代关于基因编辑的讨论提供了见解。这些类似的结构包括肉类加工商的市场力量或畜牧业中的种族化规则，以及断层线，例如国家和公民在食品系统方向上的分歧。强调这些相似之处表明外部力量如何影响并将继续影响对应用于农场动物的新兴生物技术的接受或拒绝。
2019 年石油和天然气行业对美国经济的影响
阿拉斯加州 9.3 28.6 $1.7 $2.9 $5.1 $7.3 加利福尼亚州 29.1 399.4 $2.8 $34.1 $7.0 $58.0 科罗拉多州 42.2 235.4 $12.5 $25.2 $10.7 $30.7 路易斯安那州 43.4 153.4 $6.0 $11.9 $8.8 $19.4 蒙大拿州 4.5 21.1 $0.5 $1.3 $0.5 $1.8 新墨西哥州 28.2 72.7 $2.4 $4.6 $9.3 $13.3 北达科他州 23.5 58.4 $2.6 $4.7 $5.8 $9.2 俄亥俄州 17.5 146.0 $0.8 $9.2 $9.9 $23.9 俄克拉荷马州 94.9 257.6 $8.7 $18.4 $21.3 $36.6 宾夕法尼亚州 27.4 188.9 $2.3 $14.2 $13.3 $31.9 德克萨斯州 334.4 1,549.1 $82.9 $162.9 $122.5 $245.4 犹他州 5.9 44.4 $0.4 $2.6 $0.8 $4.6 西弗吉尼亚州 13.2 39.8 $1.1 $2.6 $3.3 $5.9 怀俄明州 16.8 37.2 $1.5 $2.6 $3.3 $5.2 小计 690.5 3,231.9 $126.2 $297.2 $221.6 $493.1 来源：普华永道基于 IMPLAN 模型和 IHS Markit、阿拉斯加自然资源部的数据进行计算资源和能源信息管理局。由于四舍五入，细节可能与总数不符。（1）就业定义为直接、间接和诱导性工资和自营就业岗位的数量，包括兼职岗位。（2）劳动收入定义为年度工资和福利以及业主收入。
释放 iPSC 衍生免疫细胞的潜力
诱导性多能干细胞 (iPSC) 已成为细胞疗法的革命性工具，因为它们能够分化成各种细胞类型、供应无限，并且具有作为现成细胞产品的潜力。iPSC 衍生免疫细胞的新进展产生了强大的 iNK 和 iT 细胞，它们在动物模型和临床试验中表现出对癌细胞的强大杀伤力。随着先进的基因组编辑技术的出现，高度工程化的细胞得以开发，我们在此概述了 12 种设计 iPSC 的策略，以克服当前基于细胞的免疫疗法的局限性和挑战，包括安全开关、隐形编辑、避免移植物抗宿主病 (GvHD)、靶向、减少淋巴细胞耗竭、有效分化、提高体内持久性、干细胞、代谢适应性、归巢/运输以及克服抑制性肿瘤微环境和基质细胞屏障。随着先进基因组编辑技术的发展，现在可以将较大的 DNA 序列插入精确的基因组位置，而无需 DNA 双链断裂，从而实现多重敲除和插入。这些技术突破使得以前所未有的速度和效率设计复杂的细胞治疗产品成为可能。iPSC 衍生的 iNK、iT 和先进的基因编辑技术的结合提供了新的机遇，并可能为下一代细胞免疫疗法开启新时代。
简短的社论 - 稀有的替代品预先引起的模式
通过APS固有的电不稳定性，在20-30％的患者中出现心房颤动。5房间心律失常的快速AV传导可能会退化为心室纤颤，导致心脏死亡（SCD），WPW综合征最令人恐惧的表现。5症状患者的SCD风险很高，一生中接近4％； 11然而，无症状载体的无效，在包括1869名患者的荟萃分析中每年达到近0.13％。12在接受剧烈运动的患者中，与激发相关的心律不齐事件更为常见。尽管非侵入性标记可能会增加低风险AP的识别，但最近的指南表明，在这些患者中推迟运动训练，直到适当的侵入性风险分层为止。5,13岁的年龄，在编程的电刺激期间，AV诱导心动过速的诱导性，众多附件途径，旁路途径能力在基线时（AF（SPERRI）在AF（SPERRI）≤250ms≤250MS≤250MS的旁路速度（即在Extrade）≤250ms的旁路率（sperra）范围内的旁路能力迅速频率（即有效性）（有效）的250毫秒（sperri）的最短兴奋性RR - 有效性（sperri）的有效性（有效）风险增加。5,13识别WPW ECG模式是强制性的，但并非总是直接的。
6 月 14 日至 16 日
Alicia Guemez-Gamboa 博士在墨西哥国立自治大学获得生物学学士学位和生物医学博士学位。随后，她在加州大学圣地亚哥分校和洛克菲勒大学完成了博士后培训。她的研究旨在通过揭示神经分化、突触形成、细胞死亡及其功能相互作用的基本方式，了解神经回路在发育和疾病过程中如何组装。Guemez-Gamboa 博士目前是西北大学范伯格医学院神经科学系的助理教授。Guemez-Gamboa 博士的实验室专注于研究协调神经回路组装功能障碍导致神经发育障碍的分子和细胞通路。她旨在通过结合人类遗传学、下一代测序和使用动物和干细胞的疾病建模，揭示细胞表面识别分子和体细胞嵌合体决定细胞身份的机制，以确保适当的神经元连接。具体来说，她使用来自患者的诱导性多能干细胞 (iPSC) 以及 CRISPR 编辑的 iPSC 来生成易患神经发育障碍的神经祖细胞、神经元和前脑类器官。这些模型的表征有助于阐明各种脑连接缺陷的发病机制，并为开发新的治疗方法和个性化医疗奠定基础。Guemez-Gamboa 博士是 2022 年神经科学多样性学者 (MINDS) 指导研究所研究员。
suzukii果蝇中的高效诱导型CRISPR-CAS9基因靶向
摘要：斑点的果蝇（果蝇苏木木松木）是东亚的原生，但已成为对水果生产的全球威胁。近年来，在该物种中建立了CRISPR/CAS9靶向，允许进行功能性基因组和遗传控制研究。在这里，我们报告了D. suzukii表达Cas9菌株的产生和表征。使用含有EGFP荧光标记基因的Piggybac构建体生成了五个独立的转基因线，而在D. melanogaster Heat Hote Hote蛋白70启动子和3'UTR的控制下，Cas9基因在CAS9基因下产生。热震（HS）处理的胚胎，揭示了转基因CAS9表达的强热诱导性。通过将靶向EGFP的GRNA注入一条选定的线中，G 0倍的50.0％显示出镶嵌的荧光表型，而G 0倍的G 0倍产生的G 1突变体没有HS。通过应用HS，这种体细胞和种系诱变率分别增加到95.4％和85.7％。接受HS的父母植物导致其后代的突变遗传（92％）。另外，针对内源基因黄色导致色素沉着和男性致死性。我们讨论了这些效率和温度依赖性CAS9菌株的潜在用途用于铃木D. suzukii中的遗传研究。
Tet‑on 系统用于控制...中的基因表达
摘要 Knufia petricola 是一种黑真菌，它在极端和贫营养环境中定殖在暴露在阳光下的表面。作为生态上重要的异养生物和人造表面上的生物膜形成者，黑真菌形成了最抗性的生物腐烂生物群之一。由于其在无菌培养中生长速度适中，并且有可用的转化和 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑方案，K. petricola 被用于研究嗜极黑真菌和耐极端黑真菌共同的形态生理适应性。在本研究中，实施了细菌衍生的四环素 (TET) 依赖性启动子 (Tet-on) 系统，以实现 K. petricola 中的可控基因表达。通过使用 GFP 荧光、色素合成（黑色素和类胡萝卜素）和恢复的尿嘧啶原养型作为报告基因，研究了 TET 调控构建体的功能性，即剂量依赖性诱导性。新生成的包含 Tet-on 构建体的克隆载体以及 K. petricola 基因组中用于颜色选择或中性插入表达构建体的已验证位点完善了反向遗传学工具箱。通过使用 2A 自裂解肽，可以根据需要从不同的基因组位点或从单个构建体表达一个或多个基因，例如，用于在 K. petricola 细胞中定位蛋白质和蛋白质复合物或使用 K. petricola 作为表达异源基因的宿主。
DNAJC6 帕金森病中的神经发育和突触缺陷，可通过基因治疗
DNAJC6 编码辅助蛋白，这是一种参与突触前末端网格蛋白介导的内吞作用 (CME) 的辅助伴侣蛋白。DNAJC6 的双等位基因突变会导致一种复杂的早发性神经退行性疾病，其特征是儿童时期迅速进展的帕金森病-肌张力障碍。该疾病通常与其他神经发育、神经和神经精神特征有关。目前，尚无针对这种疾病的疾病改良治疗方法，导致发病率高且过早死亡的风险高。为了研究儿童期发病的 DNAJC6 帕金森病的潜在疾病机制，我们从三名携带致病性功能丧失 DNAJC6 突变的患者体内生成了诱导性多能干细胞 (iPSC)，随后开发了一种中脑多巴胺能神经元疾病模型。与年龄匹配和 CRISPR 校正的同源对照相比，神经元细胞模型显示出疾病特异性辅助蛋白缺乏以及突触小泡循环和稳态紊乱。我们还观察到影响腹侧中脑模式和神经元成熟的神经发育失调。为了探索病毒载体介导的基因治疗方法的可行性，用慢病毒 DNAJC6 基因转移处理 iPSC 衍生的神经元培养物，从而恢复辅助蛋白表达并挽救 CME。我们的患者衍生神经元模型提供了对辅助蛋白缺乏的分子机制的更深入见解，并为开发有针对性的精准治疗方法提供了强大的平台。
在 ES 细胞中进行 CRISPR 增强靶向后，靶向率和串联风险增加
摘要：法国小鼠诊所 (Institut Clinique de la Souris; ICS) 已生产出 2000 多个用于 C57BL/6N 小鼠“点菜”诱变的靶向载体。尽管大多数载体已成功用于小鼠胚胎干细胞 (ESC) 中的同源重组，但少数载体在多次尝试后仍无法靶向特定位点。我们在此表明，将 CRISPR 质粒与与之前失败的质粒相同的靶向构建体进行共电穿孔可以系统地获得阳性克隆。然而，必须仔细验证这些克隆，因为大量克隆（但不是全部）显示靶向质粒在位点处发生串联。详细的南方印迹分析可以表征这些事件的性质，因为标准的长距离 5′ 和 3′ PCR 无法区分正确和错误的等位基因。我们表明，在 ESC 扩增之前进行简单且廉价的 PCR 可以检测和消除带有串联体的克隆。最后，尽管我们只测试了小鼠 ESC，但我们的结果强调了任何结合使用 CRISPR/Cas9 和环状双链供体的转基因细胞系（如已建立的细胞系、诱导性多能干细胞或用于体外基因治疗的细胞系）存在错误验证的风险。我们强烈建议 CRISPR 社区在使用 CRISPR 增强任何细胞类型（包括受精卵母细胞）中的同源重组时，使用内部探针进行南方印迹。
骨髓干细胞与细胞来源的外泌体对大鼠油酸诱导的肺损伤的比较
摘要背景：急性肺损伤及其并发症急性呼吸窘迫综合征是严重的临床疾病，但治疗方法有限。其中，干细胞似乎是一种很有前途的替代疗法。在本研究中，我们首次研究并比较了骨髓干细胞 (BMSCs) 及其外泌体对油酸诱导的大鼠肺损伤的影响。方法：我们通过静脉注射油酸 (60 mg/kg) 来诱导急性肺损伤；此后，我们在注射油酸两小时后将大鼠 BMSCs (1 x 10 6 ) 和外泌体 (通过市售试剂盒从 1 x 10 6 BMSCs 中获得) 静脉注射到尾静脉。24 小时后，通过深度麻醉处死大鼠，获取肺组织。使用苏木精-伊红染色的样本检查，评估出血、白细胞浸润、水肿和增生等参数。流式细胞仪验证了从干细胞培养基中获得的外泌体。结果：肺损伤后注射干细胞和外泌体组分可恢复所有参数；然而，骨髓间充质干细胞的再生能力优于其外泌体组分（p = 0.004）。结论：干细胞及其外泌体组分可被视为治疗大鼠油酸诱导性肺损伤的替代疗法，其母体来源比外泌体更有效；干细胞似乎更有效。HIPPOKRATIA 2024, 28 (3):100-108。