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World File Search System过继转移
基于电穿孔的 CRISPR/Cas9 基因工程使幼稚原代小鼠 CD8+ T 细胞保留体内免疫反应性
CRISPR/Cas9 技术彻底改变了原代细胞的基因工程。尽管它在 CD8 + T 细胞生物学研究中的应用势头迅猛，但 CRISPR/Cas9 对 CD8 + T 细胞体内功能的影响程度仍不清楚。在这里，我们优化了基于核转染的 CRISPR/Cas9 基因工程，用于幼稚和体外激活的小鼠原代 CD8 + T 细胞，并测试了它们的体内免疫反应。幼稚 CD8 + T 细胞的核转染保留了它们体内抗病毒免疫反应，其程度与未核转染的细胞没有区别，而体外激活的 CD8 + T 细胞的核转染导致在过继转移后的早期时间点扩增/存活率略有受损，收缩更为明显。值得注意的是，不同的靶蛋白在基因编辑后显示出不同的衰减率。这与完成基因失活所需的相当一段时间形成了鲜明对比。因此，为了实现最佳实验设计，确定靶基因产物丢失的动力学以适应基因编辑后的潜伏期至关重要。总之，基于核转染的 CRISPR/Cas9 基因组编辑可高效、快速地生成突变 CD8 + T 细胞，而不会对其体内功能造成不利限制。
伽马射线辐照的无荚膜 B 组链球菌可促进 T 细胞依赖性免疫并提供交叉保护反应
摘要：B 组链球菌 (GBS) 是一种革兰氏阳性菌，常见于泌尿道，也是新生儿败血症和肺炎的主要原因。尽管目前采用抗生素预防 (IAP)，但新生儿晚发型疾病和非妊娠成人感染的疾病负担仍在增加。最近，已证明通过伽玛射线灭活病原体可以消除其复制能力，但对关键表位的抗原性损害较小。在本研究中，我们通过辐射 (Rad-GBS) 或福尔马林 (Che-GBS) 灭活无荚膜 GBS 菌株，并进一步确定其作为疫苗的免疫原性和保护效果。值得注意的是，与 Che-GBS 相比，Rad-GBS 具有更高的免疫原性，并且在 BMDC 中产生更高的共刺激分子表达。流式细胞分析显示，Rad-GBS 在小鼠体内诱导出更强的 CD4 + IFN-γ + 和 CD4 + IL-17A + 群体。通过用高毒力菌株 CNCTC 10/84 进行攻击来测量保护效果，过继转移结果进一步表明，保护作用被功能性中和抗体和 T 细胞逆转。最后，Rad-GBS 诱导了对 GBS 流行血清型攻击的交叉保护。在用 Rad-GBS 免疫的小鼠血清中测定出针对多种血清型的更高调理吞噬杀灭活性。总体而言，我们的结果表明，灭活的全细胞包裹 GBS 可以作为开发针对侵袭性 GBS 感染的通用疫苗的替代策略。
开发抗生长抑素受体 CAR-T 细胞用于治疗神经内分泌肿瘤
摘要 背景 神经内分泌肿瘤 (NET) 过度表达生长抑素受体 (SSTR)。方法 我们开发了一种第二代基于配体的抗 SSTR 嵌合抗原受体 (CAR)，其细胞外部分掺入了生长抑素类似物奥曲肽。结果 抗 SSTR CAR T 细胞在体外对 SSTR+NET 细胞系表现出抗肿瘤活性。杀伤活性具有高度特异性，这通过 CAR T 细胞对通过 CRISPR/Cas9 工程改造以表达 SSTR2/5 突变变体的 NET 细胞缺乏反应性来证明。当在 NSG 小鼠中过继转移时，抗 SSTR CAR T 细胞诱导了对人 NET 异种移植瘤的显著抗肿瘤活性。尽管抗 SSTR CAR T 细胞可以识别小鼠 SSTR，这通过它们对小鼠 NET 细胞的杀伤能力可以看出，但在小鼠中未观察到对表达 SSTR 的器官（例如大脑或胰腺）的明显有害影响。结论总而言之，我们的研究结果确立了抗 SSTR CAR T 细胞是 NET 患者早期临床研究的潜在候选者。更广泛地说，已知肽药物可以指导 CAR T 细胞靶向的证明可能会简化多种肽基序的潜在效用，并为多种癌症的治疗应用提供蓝图。
结核分枝杆菌疫苗载体诱导 CD4+ Th17 和 CD8+ Tc17T 细胞，具有治疗鸟结核分枝杆菌感染的潜力
据报道，鸟分枝杆菌 (Mav) 复合群越来越多地导致免疫系统受损个体发生非结核性感染。治疗复杂且没有疫苗可用。先前的研究表明，使用转基因结核分枝杆菌 (Msm) 作为结核病疫苗载体具有一定的潜力，因为它无致病性，因此免疫功能低下个体可以耐受。在本研究中，我们使用了破坏 EspG 3 （ESX-3 分泌系统的一个组成部分）的 Msm 突变株。与感染野生型 Msm 的细胞相比，感染 Msm 1 espG 3 的巨噬细胞和树突状细胞显示抗原呈递增加。给小鼠接种表达 Mav 抗原 MPT64 的 Msm 1 espG 3 疫苗，可与结核病疫苗牛分枝杆菌 BCG 一样，提供针对 Mav 感染的同等保护。然而，在受到 Mav 攻击后，我们观察到在接种 Msm 1 espG 3 :: mpt64 的小鼠中，产生 IL-17 的 CD4 +（Th17 细胞）和 CD8 +（Tc17 细胞）T 细胞的频率很高，而在接种 BCG 的小鼠中则没有看到。从接种 Msm 1 espG 3 的小鼠过继转移细胞表明，来自 T 细胞区室的细胞有助于防止 Mav 感染。进一步的实验表明，富含 Tc17 的 T 细胞并不能提供针对后续 Mav 感染的预防性保护，但是当将富含 Tc17 的细胞转移到已经感染 Mav 的小鼠身上时，观察到了治疗效果。这些初步发现很重要，因为它们表明 Tc17 细胞在分枝杆菌感染中具有以前未知的作用。总之，Msm 1 espG 3 有望成为针对 Mav 以及其他可能 (myco) 细菌感染的疫苗载体。
基于巨噬细胞的癌症治疗方法......
免疫细胞的过继转移已被证实是一种很有前途的癌症治疗方法。虽然最初的研究集中于具有内源性抗肿瘤活性的自体肿瘤浸润淋巴细胞的转移（1、2），但病毒载体设计、分子生物学和淋巴细胞培养方面的进步促进了基因工程 T 细胞治疗领域的快速发展。合成基因整合到淋巴细胞中可以产生大量 T 细胞，这些 T 细胞可以统一靶向特定的肿瘤抗原，从而克服了对内源性 T 细胞受体介导的抗肿瘤功能的依赖，并扩大了可靶向肿瘤抗原的范围。治疗恶性疾病的一种方法是将嵌合抗原受体 (CAR) 引入大量外周自体 T 细胞 (3)。迄今为止，CAR T 细胞疗法的临床疗效主要局限于血液系统恶性肿瘤。截至 2020 年 8 月，FDA 已批准三种用于治疗 B 细胞恶性肿瘤的产品，全球有 200 多项针对各种血液系统恶性肿瘤的活跃/正在招募临床试验。相比之下，CAR-T 细胞治疗实体瘤的进展迄今为止一直很缓慢 (4 – 7)。在实体瘤环境中，CAR-T 细胞疗法反应不佳有几个潜在原因。首先，效应细胞必须运输并渗透到肿瘤中，这个过程需要外渗、趋化性和基质组织渗透。工程淋巴细胞必须穿过粘附分子减少的异常肿瘤血管，经历趋化因子/趋化因子受体不匹配 (8)，并且必须穿过密集的细胞和基质屏障。进入肿瘤微环境 (TME) 后，效应细胞会遇到不利条件，例如
使用电化学酸碱产生的海洋二氧化碳去除途径
利什曼病是由Leishmania属的强制性细胞内原生动物寄生虫引起的一组被忽视的热带媒介传播疾病。目前，由于其细胞毒性，成本，痛苦的给药途径，长期治疗持续时间，局部效率和高耐药性风险，因此标准化学疗法面临挑战。为了克服这个问题，已经制定了新的干预方法来治疗利什曼病。宿主指导的免疫疗法是一种新颖的方法，涉及宿主衍生的生物分子的过继转移，以增强保护性细胞免疫的自然力量。这恢复了效应细胞的功能，使它们能够清除细胞内的杂物并导致患者从感染中恢复。这种方式比常规治疗的优点包括较少的细胞毒性，短暂的住院治疗，可负担性和对耐药寄生虫菌株的效率更好。几项研究报告了该治疗模型对耐药性利什曼原虫物种的效率更好。但是，当前的知识和证据非常不足以实施该代理人来治疗任何形式的利什曼病。本评论旨在表明这种对利什曼病的免疫治疗剂的效率。The discussion has focused on major pro-in fl ammatory cytokines (interferon-gamma, interleukin-12, and granulocyte-macrophage colony- stimulating factors), immune cells (dendritic and mesenchymal stem cells), and monoclonal-antibodies (anti-interleukin-10, anti-interleukin-4, and immune checkpoint inhibitory分子）。我们的发现表明，这种治疗方法有可能成功地治疗，并通过减少常规治疗的不良影响来改善临床结果。这表明将来将这种治疗方式作为替代策略的未来部署。但是，它需要使用当地动物模型进行广泛的临床试验，以反映典型的宿主免疫学针对利什曼病，以选择最保护性候选药物。
多抗原靶向 T 细胞疗法治疗复发/难治性乳腺癌患者
摘要目的：过继转移、离体扩增的多抗原靶向 T 细胞 (multiTAA-T) 代表了一种新的、潜在有效且无毒的乳腺癌 (BC) 治疗方法。在这项首次人体试验中，我们研究了向复发/难治/转移性 BC 患者施用靶向肿瘤表达抗原 Survivin、NY-ESO-1、MAGE-A4、SSX2 和 PRAME 的多 TAA T 细胞的安全性和临床效果。材料和方法：多 TAA T 细胞产品是从接受过大量治疗的所有亚型转移性或局部复发性不可切除 BC 患者的外周血中生成的，并以 2 × 10 7 /m 2 的固定剂量水平输注。患者间隔 4 周接受两次细胞输注，并确定安全性和临床活性。细胞在门诊环境中施用，并且未经淋巴细胞清除化疗。结果：所有患者均患有雌激素受体/孕激素受体阳性的 BC，其中一名患者还患有人类表皮生长因子受体 2 阳性。没有治疗相关毒性，输注耐受性良好。在接受并输注多 TAA T 细胞的 10 名接受过大量治疗的患者中，9 名病情出现进展，而一名接受过 10 种疗法的患者病情稳定时间延长（5 个月），这与针对靶抗原的 T 细胞体内扩增和持续存在有关。此外，在 7/10 名接受多 TAA 输注后的患者中观察到抗原扩散和针对一系列非靶向肿瘤抗原的 T 细胞内源性激活。结论：多 TAA T 细胞耐受性良好，并可诱导难治性 BC 患者的病情稳定。这与体内 T 细胞扩增、持续存在和抗原扩散有关。这种方法的未来方向可能包括其他策略，以增强多 TAA T 细胞对 BC 患者的治疗效果。
造血干细胞同源基因编辑的进展与障碍
基因修饰或插入最初于 20 世纪 70 年代初提出作为治疗遗传性疾病的方法 [ 1 ]。造血干细胞 (HSC) 是基因治疗的首选目标，因为它们能够维持终生造血，从而能够持久缓解一系列疾病。目前，遗传性血液疾病的基因治疗方法主要包括从患有潜在遗传缺陷的个体中提取造血干细胞和祖细胞 (HSPC)，并在体外进行基因修饰后进行过继转移（图 1 a）。数十年来在临床上进行的同种异体 HSPC 移植为这种新方法的治疗转化提供了路线图。在自体移植基因修饰的 HSPC 时，可以避免同种异体反应性并发症并降低预处理方案的复杂性，与同种异体 HSPC 移植相比，它们具有显著优势。使用基于 γ 逆转录病毒载体的基因递送载体的临床试验最初于 20 世纪 90 年代获得批准，但仅检测到少量校正细胞，并且未观察到潜在缺陷的表型校正。重新关注优化体外转导条件和增加预处理方案以利于转导细胞的植入，导致在原发性免疫缺陷患者中首次获得明确的临床成功[2-4]。然而，随后报告称接受治疗的患者中载体介导的原癌基因插入激活导致恶性肿瘤[5-7]，这鼓励了主要基于 HIV-1 慢病毒亚家族逆转录病毒的替代载体设计的开发（图 1b）。慢病毒载体的独特成分促进其在非分裂的 HSPC 内的核易位，进一步增强这些细胞的转导。这些载体中 3′-LTR 启动子和增强子元件的消除也提供了一个关键的自失活 (SIN) 安全特性，以减轻对可能与内源性 HIV 颗粒重组或载体整合基因组位点附近原癌基因意外激活的担忧。然而，对于这些 SIN 载体，转基因表达的效率高度依赖于添加
使用 CRISPR/Cas9 进行 T 细胞 Nrf2/Keap1 基因编辑和实验性肾脏缺血-再灌注损伤
目的：T 细胞在肾脏缺血再灌注损伤 (IRI) 中发挥病理生理作用，核因子红细胞 2 相关因子 2/kelch 样 ECH 相关蛋白 1 (Nrf2/Keap1) 通路调节 T 细胞反应。我们假设成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 介导的 Keap1 敲除 (KO) 增强了 CD4+ T 细胞的 Nrf2 抗氧化潜力，而 Keap1 -KO CD4+ T 细胞免疫疗法可预防肾脏 IRI。结果：CD4+ T 细胞 Keap1-KO 导致 Nrf2 靶基因 NAD(P)H 醌脱氢酶 1、血红素加氧酶 1、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基和谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基显著增加。体外，Keap1-KO 细胞没有显示出衰竭迹象，在常氧条件下白细胞介素 2 (IL2) 和 IL6 水平显著降低，但在缺氧条件下干扰素 γ 水平升高。体内实验中，与接受未编辑对照 CD4+ T 细胞的小鼠相比，IRI 前过继转移 Keap1-KO CD4+ T 细胞可改善 T 细胞缺陷 nu/nu 小鼠的肾功能。与从对照肾脏中分离的未编辑 CD4+ T 细胞相比，IRI 后 24 小时从受体肾脏中分离的 Keap1-KO CD4+ T 细胞活性较低。创新：使用 CRISPR/Cas9 编辑小鼠 T 细胞中的 Nrf2/Keap1 通路是一种创新且有前景的免疫治疗方法，可用于治疗肾脏 IRI 以及其他实体器官 IRI。结论：CRISPR/Cas9 介导的 Keap1 -KO 增加了小鼠 CD4+ T 细胞中 Nrf2 调节的抗氧化基因表达，改变了对体外缺氧和体内肾脏 IRI 的反应。针对 T 细胞中 Nrf2/Keap1 通路的基因编辑是治疗免疫介导肾脏疾病的一种有前景的方法。抗氧化剂。氧化还原信号。38，959–973。
双特异性免疫细胞参与者在体外增强了CD16+ NK细胞和巨噬细胞的抗癌活性，并消除了NK人源化NOG小鼠的癌症转移
抽象背景在肿瘤微环境中发现了多种类型的产生IL-17的免疫细胞。然而，它们在CD8 +肿瘤浸润淋巴细胞（TILS）的肿瘤进展和精疲力尽中的作用尚不清楚。确定17型免疫力在肿瘤中的作用的方法，我们研究了B16F10黑色素瘤的生长以及CD8 + TIL在IL17A - / - 小鼠中的耗尽，IL17A CRE R26 DTA小鼠，RORγT抑制剂造成的小鼠，或其相应的对照组。在B16F10的先天小鼠中进行了肿瘤特异性IL-17产生的T细胞的过继转移。抗CD4或抗Ly6g抗体分别用来耗尽CD4 + T细胞或CD11b + Gr-1 HI髓样细胞的体内。通过询问TCGA数据集，评估了人类癌症中17型免疫力与T细胞衰竭之间的相关性。结果CD4 + T细胞的耗竭促进了CD8 + T细胞的耗尽，而肿瘤中产生IL-17的CD8 + T（TC17）细胞的耗尽。与产生CD8 + T（TC1）细胞不同，肿瘤浸润的TC17细胞表现出CD103 + KLRG1-IL-7RαHIHI组织驻留的记忆样表型，并且细胞溶解度不佳。产生IL-17的肿瘤特异性T细胞的产物转移增加，而产生IL-17的细胞的耗竭降低，肿瘤中PD-1 HI TIM3 + TOX +终末耗尽的CD8 + T细胞的频率。封锁IL-17或RORγT途径抑制CD8 + T细胞的耗尽，还会延迟体内肿瘤的生长。封锁IL-17或RORγT途径抑制CD8 + T细胞的耗尽，还会延迟体内肿瘤的生长。与这些结果一致，人类TCGA分析揭示了多种癌症中17型和CD8 + T细胞耗尽签名基因集之间存在很强的正相关。结论IL-17产生的细胞促进了CD8 + T细胞的末端衰竭和体内肿瘤进展，可以通过IL-17或RORγT途径的阻断来逆转。这些发现揭示了IL-17-产生细胞作为促进CD8 + T细胞耗尽的肿瘤细胞的新作用，并提出17型免疫力作为癌症免疫疗法的有希望的靶标。