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基于酶的纸片检测法用于检测非法药物中的乳糖
乳糖通常用作违禁药物的稀释剂。目前，违禁药物的假定现场颜色测试试剂盒无法检测乳糖或其他稀释剂的存在。开发了一种在纸质测试卡上检测乳糖的方法。使用由乳糖酶、葡萄糖氧化酶和过氧化物酶组成的三酶系统将乳糖分解为过氧化物，然后用氧化还原指示剂检测。该测试可以检测固体样品中低至 5% 的乳糖浓度，并且当乳糖与违禁药物或商业药品混合时不会产生干扰。制备好的测试卡在货架上可以稳定保存长达五个月。在对由海洛因、甲基苯丙胺、盐酸可卡因、快克可卡因、填充剂和乳糖混合物组成的样品进行盲法研究中，三种读取器检测乳糖的灵敏度为 100%，特异性为 96.4% (n=96)。当将此测试纳入用于检测非法药物的 12 通道测试卡时，读取器能够正确识别非法药物和乳糖的存在，灵敏度为 99.3%，特异性为 100% (n=54)。此测试是一种可靠且经济实惠的检测非法药物样本中乳糖的方法。
使用TcBuster™ (TcB-M™) 转座酶实现高效...
基因组工程工具的快速发展推动了多种免疫和干细胞疗法进入临床试验，目的是产生自体和同种异体疗法。这些疗法中的许多都使用病毒载体来运送治疗货物。然而，病毒介导的疗法具有免疫原性、货物大小限制、整合位点风险、制造延迟的风险，并且成本极高。虽然有两种已知的非病毒转座酶系统 piggyBac ® 和 Sleeping Beauty ™ ，但两者都被专门授权用于细胞疗法，不能用于商业用途。TcBuster-M ™ (TcB-M ™ ) 是一种可商购的非病毒转座酶编辑平台，可克服当前的病毒限制。TcBuster 存在于赤拟谷盗中，是 hAT 转座酶家族的成员。利用定向进化，我们设计了一种高活性突变体 (TcB-M)，使用更少的 mRNA 转座酶和 Nanoplasmid ™ DNA 转座子提高了转座率。与用于构建 piggyBac 和 Sleeping Beauty 高活性酶的工程努力不同，我们在哺乳动物细胞中使用了一种新型高通量筛选平台。这使我们能够筛选一个包含 >300 万个变体的突变体库，这比用于构建 PiggyBac 或 Sleeping Beauty 的突变体库大得多。这导致构建了用于设计原代免疫细胞的最有效的转座酶系统。TcB-M 允许快速制造细胞，并且细胞制造成本有限。目前，从载体图谱到 GMP 转座子的 TcB-M 时间约为 6-8 个月。由于 TcB-M 受货物尺寸的限制较少，我们可以设计大型多顺反子转座子，以便在各种细胞类型中稳定地递送多种蛋白质，包括原代 T 细胞和 NK 细胞、间充质干细胞和诱导性多能干细胞 (iPSC)。此外，TcB-M 可以轻松与内切酶（如 CRISPR 试剂）结合，以生成组合敲除/过表达编辑细胞产物。改进的 TcB-M 使原代 T 细胞和外周血来源的 NK 细胞中的货物整合率超过 60%，而不会牺牲细胞生长或克隆优势问题。最后，我们对慢病毒、piggyBac 和 Sleeping Beauty 工程化 CAR-T 进行了直接比较，表明 TcB-M 工程化 CAR-T 具有同等或更高的整合百分比。TcB-M 还具有更安全的整合特性，因为与慢病毒相比，它更随机地整合到基因组中，而没有对活性位点的偏好。总体而言，TcB-M 是一种广泛可用、经过验证的非病毒基因编辑技术，可在多种细胞类型中递送大量或难以处理的治疗物质。TcB-M 减少了许多病毒介导的编辑障碍，从而可以更快地生成关键的治疗方法并将其推向市场。
多种酶系统的代谢启动支持早期缺氧的糖酵解，HIF1α稳定和人类癌细胞的存活
适应慢性缺氧是通过蛋白质表达的变化而发生的，蛋白质表达受到低氧诱导因子1α（HIF1α）的控制，对于癌细胞存活是必要的。然而，在HIF1α介导的转录程序完全确定之前，使癌细胞能够适应早期缺氧的机制仍然很少了解。在这里，我们在人类乳腺癌细胞中表明，在缺氧暴露3小时内，糖酵解液以HIF1α非依赖性方式增加，但受NAD +可用性的限制。早期缺氧的糖酵解ATP维持和细胞存活依赖于储备乳酸脱氢酶A的能力以及谷氨酸 - 氧化甲酸乳凝集酸酯酸酯酸酯酶1（GOT1）的活性，该酶是一种燃料的酶，该酶燃料母体脱氢酶1（MDH1）衍生的NAD NAD +。此外，GOT1保持较低的α-酮戊二酸水平，从而限制了早期缺氧中HIF1α稳定的丙酰羟化酶活性，并在后期缺氧中启用强大的HIF1α靶基因表达。我们的发现表明，在北莫西亚中，多种酶系统将细胞保持在启动状态下，准备支持增加糖酵解的糖酵解和HIF1α稳定在氧气限制下，直到其他需要更多时间的自适应过程已完全确定为止。
转化生物医学中的 CRISPR/Cas9 技术
摘要 成簇的规则间隔短回文重复序列 (CRISPR) - RNA 引导的 Cas9 内切酶系统为包括人类在内的多种哺乳动物物种的精确基因组编辑提供了一种快速有效的方法。CRISPR/Cas9 技术允许通过进行删除、插入或 DNA 供体指导的精确序列修饰，在一个主要步骤中对所选基因的位点特定位置进行修饰。Cas9 与序列特异性引导 RNA 形成核蛋白复合物，以在互补 DNA 靶中产生双链断裂。此外，双链断裂修复机制可导致预期的基因修饰。CRISPR/Cas9 系统是一种广泛用于基因组修饰、编辑和其他生物技术应用的技术，例如功能注释、用于可视化特定基因组位点的系统和基因的转录控制。CRISPR/Cas9 介导的实验动物基因组操作有助于理解基因功能，并已成为一种模拟人类疾病的流行方法。此外，CRISPR-Cas9 系统在人类基因中的应用日益广泛，成为一种用于人类疾病分子鉴定和治疗的极其强大的技术。在这篇综述中，我们介绍了 CRISPR/Cas9 技术的基本原理及其在转化生物医学中的应用的最新进展。
来自嵌合抗原受体T细胞的临床课程
T细胞修饰，对B细胞恶性肿瘤的治疗表现出了巨大的希望。成功地将CAR-T细胞疗法转化为其他肿瘤类型（包括实体瘤）是下一个重大挑战。随着构成多种遗传修饰的第二代CAR-T细胞的领域进展，正在开发更复杂的方法和工具。病毒载体，尤其是C返回病毒和慢病毒，由于其高转导效率而被用于CAR -T细胞工程。但是，有限的遗传货物，良好的制造实践（GMP）条件下的高生产成本以及高监管要求是广泛临床翻译的障碍。为了克服这些局限性，正在临床前或临床水平探索不同的非病毒方法，包括转座子/转座酶系统以及mRNA电穿孔和非整合DNA纳米摩析器。基因组编辑工具，允许对特定基因的有效敲除和/或将汽车和/或其他转基因的站点指导整合到基因组中进行，也正在评估用于CAR-T细胞工程。在这篇综述中，我们讨论了用于产生CAR-T细胞的病毒和非病毒载体的发展，重点是它们的优势和局限性。我们还使用不同的基因工程工具讨论了从临床试验中学到的经验教训，并特别关注安全性和有效性。
最初发表于：Heeb，Laura V；塔斯科帕兰，贝图尔；卡特苏拉斯（Katsoulas），安东尼奥斯（Antonios）；贝芬格，米哈尔；克拉维恩，皮埃尔-阿兰；狗头人，塞巴斯蒂安；古普塔，
免疫抑制分子程序性细胞死亡配体 1 (PD-L1) 已被证明在自身免疫、感染和癌症等病理中发挥作用。PD-L1 不仅在癌细胞上表达，而且在未转化宿主细胞上的表达也与癌症进展有关。小鼠系统中 PD-L1 缺陷的产生使我们能够专门研究 PD-L1 在生理过程和疾病中的作用。最通用且最易于使用的位点特异性基因编辑工具之一是 CRISPR/Cas9 系统，它基于 RNA 引导的核酸酶系统。与其前身锌指核酸酶或转录激活因子样效应核酸酶 (TALEN) 类似，CRISPR/Cas9 催化双链 DNA 断裂，这可能导致由于非同源末端连接 (NHEJ) 的随机核苷酸插入或缺失而导致的移码突变。此外，尽管不太常见，但 CRISPR/Cas9 可以在存在合适模板的情况下通过同源定向修复 (HDR) 导致插入确定的序列。在这里，我们描述了使用 CRISPR/Cas9 在小鼠 C57BL/6 背景下敲除 PD-L1 的方案。外显子 3 的靶向结合 HindIII 限制位点的插入会导致过早终止密码子和功能丧失表型。我们描述了靶向策略以及创始者筛选、基因分型和表型。与基于 NHEJ 的策略相比，所提出的方法可产生具有与 NHEJ 相当的效率和时间线的确定终止密码子，生成方便的创始者筛选和基因分型选项，并且可以快速适应其他目标。
模拟酸雨对开花中国卷心菜和土壤养分变化的生理反应的影响
摘要：开花的中国卷心菜在中国南部广泛种植，经常暴露于酸雨。，酸雨对开花中国白菜的生长的影响尚不清楚。在这项研究中，我们研究了模拟酸雨（SAR）对植物高度，土壤植物分析（SPAD）值的影响（叶绿素含量的指数），脯氨酸，丙二醛（MDA），抗氧化剂酶活性，氮气，氮（N），磷（P）和钾盐（K）和钾盐（K）和钾盐（K）和钾盐（K）我们的结果表明，在pH 5.5处的SAR不会损害植物的发育，因为与pH 7.0时的生长特性，光合作用，超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性相比，在此pH值明显变化。然而，在pH 4.5和pH 3.5时SAR暴露的2至7次导致抗氧化剂酶活性，MDA和脯氨酸含量的增加，以及叶子Spad值和根活性的降低。营养分析表明，在pH下喷洒4至7倍的SAR 3.5可显着降低中国卷心菜的N，P和K的摄取。此外，在pH 3.5处进行SAR处理可降低表面土壤的pH值和碱性水解N的含量，并随时可用K，但在表面土壤中易于使用的P的pH值增加了8.5％至14.9％。在一起，我们的结果表明，pH 3.5的SAR影响了抗氧化剂酶系统和土壤养分的含量，引起了代谢性疾病，并且最终限制了开花的中国卷心菜的发展和生长。
选择性5-羟色胺再摄取抑制剂预防前庭偏头痛的有效性及其对生活质量的影响
选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI）用于一线治疗抑郁症，并在心理药理学方面取得了重大治疗进展。治疗原则是抑制神经递质再摄取。通过阻断长5-羟色胺前再摄取泵，在体体自身受体和轴突中，它们会增加5-羟色胺效应。首先，5-羟色胺水平仅在体育区域上升。随着水平的增加，神经元脉冲电流增加，轴突末端刺激5-羟色胺释放。因此，突触裂隙中的5-羟色胺浓度增加。所有SSRI都是5-羟色胺激动剂。人脑中含有5-羟色胺的神经元在脑干和脊髓中高度局限。这些神经元将其轴突发送到大脑每个区域中含有5-羟色胺的末端。因此，脑部脑部在关键的大脑区域增加。由于这种分布，5-羟色胺神经元的功能障碍与许多疾病有关。因此，5-羟色胺活性药物可以具有许多临床作用。除了抑郁症外，SSRI还用于治疗焦虑症，疼痛障碍，恐慌症，强迫症，酒精中毒，肥胖和偏头痛。有人建议5-羟色胺还调节多巴胺 - 甲肾上腺素和GABA之间的稳态。SSRI是高亲脂性分子，并积聚在富含脂肪的组织（例如CNS细胞）中。它们主要由细胞色素P-450酶系统在肝脏中代谢。SSRI用于防止VM攻击。但是，关于VM预防的功效的数据不足。
在水产养殖中利用药用植物进行疾病治疗一种改善鱼类健康的方法。
植物药越来越多地用于水产养殖中，以促进健康和预防疾病。在这篇综述中，我们讨论了植物养殖在全球水产养殖中的eícacy，并通过其行动方式，可能在这些活动中起关键作用。同样，某些具有据可查的植物，具有广谱抗菌素，免疫调节活性和抗氧化特性。这些可能是有利的，因为艾sh饲料中的补充是刺激α的免疫功能。植物提取物可能通过不同的模式对动物健康产生积极影响，而不是仅依靠单一模式。已显示使用草药作为饮食添加剂可增强免疫力防御机制。最近，植物治疗已被纳入水产养殖中，从而增加了生长速率和抗病性，从而导致了更可持续的实践。在这一领域仍在完成工作，以鉴定新的生物活性化合物，了解它们的工作原理并确定可以确保该化合物在需要时到达细胞的递送系统。可以将它们与可持续的方法（例如水蛋白酶系统）合并，并可能保持有机认可，同时减少食品上的化学残留物和维持环境健康。这些新兴的植物学方法有望在水产养殖中为疾病管理具有可持续的可持续策略，从而支持消费者的转变，以需求安全且可持续生产的海鲜。植物治疗提供的优势表明它们是开发可持续和环保水产养殖业的重要工具。
分裂标记介导的基因组编辑提高了 CTG 分支酵母中间假丝酵母中的同源重组频率
基因组编辑工具箱对于探索和利用非常规酵母物种作为细胞工厂至关重要，因为它们促进了基因组研究和代谢工程。非常规酵母中间假丝酵母 (Candida intermedia) 是一种在生物技术上很有趣的物种，因为它能够将多种碳源（包括林业和奶制品行业废弃物和侧流中的木糖和乳糖）转化为增值产品。然而，由于缺乏针对该物种的分子工具，迄今为止，进行基因操作的可能性有限。我们在此描述了一种针对中间假丝酵母 (C. intermedia) 的基因组编辑方法的开发，该方法基于电穿孔和基因删除盒，其中包含白色假丝酵母 NAT1 显性选择标记，两侧是与目标基因座同源的 1000 个碱基对序列。针对 ADE2 基因的线性删除盒最初导致的靶向效率 < 1%，这表明中间假丝酵母 (C. intermedia) 主要使用非同源末端连接来整合外来 DNA 片段。通过开发一种基于分裂标记的 C. intermedia 缺失技术，我们成功提高了同源重组率，实现了高达 70% 的靶向效率。对于无标记缺失，我们还将分裂标记盒与重组酶系统结合使用，从而能够通过标记回收构建双缺失突变体。总体而言，分裂标记技术被证明是一种快速可靠的 C. intermedia 基因缺失方法，这为揭示和增强其细胞工厂潜力提供了可能性。