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使用氯化锌沉淀法(7)从高滴度裂解物中提取 DNA,使用 NEBNext Ultra II 试剂盒(New England Biolabs,马萨诸塞州伊普斯威奇)制备用于测序,并使用匹兹堡噬菌体研究所(宾夕法尼亚州匹兹堡)的 Illumina MiSeq 仪器(v3 试剂)进行测序。对总共 1,056,847 个单端 150 bp 读数进行 9,214 倍覆盖度的测序。分别使用 Newbler v2.9 和 Consed v29.0 进行组装和质量控制检查(8, 9)。PineapplePizza 的基因组有 16,662 个碱基对,G + C 含量为 53.6%。没有测序读数超出基因组末端,基因组末端的 101 bp 反向重复与共价结合的末端蛋白一致,如 phi29(10)。使用 NCBI BLASTn (11) 进行全基因组比对,结果显示与其他 Microbacterium 噬菌体无显著的核苷酸序列相似性,PineapplePizza 被归类为单一基因。使用 Glimmer v3.02 (12) 和 GeneMark v2.5 (13) 自动注释 PineapplePizza 的基因组,然后使用 Phamerator (14)、DNA Master v5.23.6 ( http://phagesdb.org/DNAMaster/ )、PECAAN、BLAST (11) 和 HHPred (15) 手动细化。Aragorn v1.2.38 (16) 或 tRNAscan-SE v2.0 (17) 未鉴定出 tRNA 基因。所有分析均使用默认设置进行。

phi29 样 Microbacterium foliorum podovirus 噬菌体的完整基因组序列 PineapplePizza

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