实验设计•使用黑色素瘤和肺,乳房,宫颈和卵巢癌的组织样品用于本研究。•在用于制造Iovance的TIL(Gen 2)的TIL快速扩张过程中,测试了使用PD-1TALEN®MRNA的TIL电穿孔的几种条件,以优化KO效率。•分别通过NGS和流式细胞仪在基因组和蛋白质水平上评估KO效率。•PD-1 KO对TIL计数/活性,表型和效应子功能的影响通过流式细胞仪和基于细胞的测定法进行了评估,包括混合淋巴细胞反应(MLR),重定向的杀伤测定法和单细胞多路复用细胞因子分析。•通过流式细胞术T细胞受体(TCR)-V(β)曲目分析通过荧光激活的细胞分类(FACS)分离细胞后,通过流式细胞术T细胞受体(TCR)-V(β)曲目分析来监测KO的分布。
主要关键词