7。加入8毫升冰冷的PM3缓冲液,并通过将管反转10到15次中和裂解物,立即混合。(不要涡旋!)- 注:•确保培养细胞的密度最佳,缓冲液体积(PM1,PM2,PM3)应与培养体积成比例地增加。(ex。培养体积,60〜120 ml:PM1,8 ml; PM2,8毫升; PM3,8 ml培养体积,120〜240 ml:PM1,16 ml; PM2,16毫升; PM3,16毫升)•处理120〜240 ml细菌时,需要额外的PM1,PM2和PM3的缓冲液体积时,可以单独购买缓冲液。•确保将细胞颗粒完全悬浮在缓冲液PM1中。•添加缓冲液PM2和缓冲液PM3后,完全混合样品混合物。通过离心8。在4°C下以≥5,000xg的距离离心20分钟。(最好在4°C下以15,000〜20,000 xg离心15分钟)。- 如果上清液仍包含悬浮物,则将上清液转移到干净的离心管上,然后重复此离心步骤。质粒的结合9。将上清液从步骤8传递到平衡的PM MIDI列。让其通过重力流动到PM MIDI柱并丢弃滤液。WASH PM MIDI第10列。通过施加12.5 mL PW缓冲液洗涤PM MIDI柱。允许PW缓冲液通过重力流量流经PM MIDI柱并丢弃滤液。