由于将染料Carbol Fuchsin应用于细菌涂片,因此溶解了存在于细菌细胞壁中的脂质材料。随着热量的施用,Carbol Fuchsin进一步穿透了脂质壁并进入细胞质。此时,所有细胞均为红色。当这些红细胞用酸 - 醇脱色剂(95%酒精中的HCl 3%)脱色时,由于在其细胞壁中存在大量的霉菌酸(一种特定的脂质),因此酸性细胞具有抗抛物性,从而阻止了脱氧溶液的穿透性。非酸脂肪细菌在其细胞壁上缺乏霉菌酸,因此它们很容易被脱色剂穿透并因此变色。这会导致无色细胞。然后用甲基蓝色对涂片进行反染色。只有脱色的细胞才能吸收抗染色,占据其颜色并显得蓝色。酸性细胞不会吸收亚甲基蓝,并保留红色。