摘要 使用改变目标基因组信息的技术进行靶向基因组修饰,已为基础生物学和应用生物学的多项研究做出了贡献。在基因打靶中,使用同源重组将打靶载体整合到靶位点。传统上,携带多个基因突变的小鼠是通过胚胎干细胞中的连续重组和耗时的单基因突变小鼠杂交产生的。然而,这种策略存在几个技术问题。第一个问题是基因打靶的频率极低,这使得获得重组克隆是一项极其耗费人力的任务。第二个问题是可以应用基因打靶的生物材料数量有限。传统的基因打靶几乎不会发生在大多数细胞系中。然而,一种使用设计核酸酶的新方法可以在基因组 DNA 中引入位点特异性双链断裂,提高了受精卵中基因打靶的效率。这种包括 CRISPR-Cas 系统的新方法也扩大了可以应用基因打靶的生物材料的数量。转基因的靶向整合可通过基于同源重组(HR)、微同源介导的末端连接(MMEJ)或非同源末端连接(NHEJ)的策略实现。本文,我们总结了靶基因修饰的各种策略,包括传统基因靶向与设计核酸酶的比较。