最近,我们描述了一个调节系统,该系统允许在较高的真核细胞系(1),植物(2)和动物(3,4)中严格控制单个基因活性。该系统的基本组件是(i)一个RNA聚合酶H最小启动子,放置在多个操作序列(TETO)的下游,其大肠杆菌tnjo Tetracycline抗性操纵子和(ii)TET抑制剂(TET)(TETR)和Simples Simples Simplex Virus Protein 16(vpp16(vp p p p)(ii)(ii)(ii)融合。在不存在四环素(TC)的情况下,TTA与TET算子结合以激活最小启动子的转录,而在TC存在下,它的关联并因此阻止了其转录激活。在TTA结合后,源自巨细胞病毒IE启动子(PHCMV,5)的最小启动子,并融合到七个TETO序列中,当在短暂性表达测定中进行比较时,在HELA细胞中的父启动子的明显强度达到了显着的强度(6)。TTA的高激活潜力及其结合位点在PHCMV*_1 [(1)中的排列;参见图ia]建议设计双向启动子,该设计将允许同时调节来自中心位置多个TETO序列的两个转录单元(图la)。这样的启动子对于多种实验方法应该有用。首先,它可以允许以化学计量量的两种基因产物的合成,这通常是产生异二聚体(或异源 - 寡聚)蛋白的先决条件。在这里,我们报告了双向启动子的构建(PBI-L;图第二,通过将不同效率的最小启动子融合到中心位置的TETO序列,可以在不同但定义的水平上共同调节两个基因产物。第三,通过在双向启动子的一侧整合适当的报告基因,可以通过报告基因函数来监测对不可读基因的调节。后一种可能性也可能有助于在细胞和有机水平上 - 筛选正确整合的表达单元,以控制感兴趣的基因。1a)表明,该启动子以定量方式共同调节了编码P-半乳糖苷酶和荧光素酶的两个报告基因。此外,我们描述了一个矢量系列,很容易允许将PBI-I用于各种目的。图1a所示的广义发散转录单元由基因X的双向启动子组成,然后是
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