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World File Search System供体
使用TALEN，CRISPR-CAS9和CRISPR-CAS12A与AAV6同源性供体组合恢复XLP
X连接的淋巴细胞增生性疾病是一种罕见的遗传免疫疾病，是由SH2D1A基因中的突变或缺失引起的，它编码了细胞内适配器蛋白SAP（SLAM相关蛋白）。SAP对于介导多种关键免疫过程至关重要，并且在缺失的情况下，免疫系统（尤其是T细胞）失调。患者出现了各种临床表现，包括淋巴淋巴细胞增多症（HLH），肿瘤性肿瘤性血症，淋巴瘤和自身免疫性。治疗选择是有限的，患者很少能够在成年中生存，而没有同种异体造血干细胞移植（HSCT）。但是，此过程在不匹配的供体设置中或在有活跃的HLH的情况下会产生较差的结果，从而剩下未满足的临床需求。自体造血干细胞或T细胞疗法可以提供替代的治疗选择，从而消除了为HSCT找到合适的供体的需求，并具有出现同质性的任何风险。SAP具有严格控制的表达方式，即常规的慢病毒基因输送平台可能无法完全复制。一种基因编辑方法可以保留更多控制SAP表达的内源性调节元素，并可能提供更佳的治疗。在这里，我们评估了使用Adeno相关的Serotype 6（AAV6）基于供体模板的adeno相关病毒血清型6（AAV6）的载体，可以在SH2D1A基因座的第一个外显子上推动SAP cDNA的靶向插入SH2D1A基因座的第一个外显子的能力。所有核酸酶平台均能够具有高效率基因编辑，并使用无血清AAV6转导方案进行了优化。我们表明，通过基因编辑工具纠正的XLP患者的T细胞恢复了SAP基因表达的生理水平并恢复了SAP依赖性免疫功能，这表明XLP患者具有新的治疗机会。
供体衍生的多重白血病抗原特异性T细胞疗法，以防止所有
美国路易斯维尔大学医学院肝病学和营养学系医学系，美国肯塔基州路易斯维尔；美国肯塔基州路易斯维尔市路易斯维尔大学医学院B UOFL酒精研究中心； C诺顿神经科学研究所，4915 Norton Healthcare Blvd，美国肯塔基州路易斯维尔； D UOFL HEPATOBIOLOGY COBRE，美国路易斯维尔大学医学院，美国肯塔基州路易斯维尔； E美国路易斯维尔大学医学院解剖科学与神经生物学系；美国德克萨斯州休斯敦市贝勒医学院分子病毒与微生物学系宏基因组学与微生物组研究中心； G，美国路易斯维尔大学医学院生理学系，美国肯塔基州路易斯维尔； H美国路易斯维尔路易斯维尔大学医学院药理学与毒理学系； i路易斯维尔大学医学院神经外科系，美国肯塔基州路易斯维尔；美国肯塔基州路易斯维尔的Robley Rex VA医学中心医学系J
通过三氟甲基氟化聚合物供体用于高性能聚合物太阳能电池
完整作者列表：孟宏；北京大学；姚超；北京大学先进材料学院，北京大学深圳研究生院，深圳；朱亚南；北京大学深圳研究生院；顾凯晨；普林斯顿大学，化学与生物工程系；赵佳；北京大学先进材料学院，北京大学深圳研究生院，深圳；宁骄懿；北京大学先进材料学院，北京大学深圳研究生院；Perepichka, Dmitrii；麦吉尔大学，化学系；卢月林；普林斯顿大学，化学工程系
利用通用供体快速生成可逆和条件等位基因的 HIT 捕获策略
在模型生物中定向诱变是基因功能注释和生物医学研究的关键。尽管 CRISPR-Cas9 系统在基因编辑方面取得了技术进步，但在大型动物模型中快速有效地引入定点突变仍然是一个挑战。在这里，我们开发了一种强大而灵活的插入诱变策略，即同源性独立的靶向捕获 (HIT-trapping)，它是通用的，可以有效地靶向捕获内源性目的基因，而不依赖于同源臂和胚胎干细胞。进一步优化并为 HIT-trap 供体配备位点特异性 DNA 倒置机制，可以在单个实验中一步生成可逆和条件等位基因。作为概念验证，我们成功地在原代猪成纤维细胞中为 21 种疾病相关基因创建了突变等位基因，平均敲入频率为 53.2%，比以前的方法有了很大的改进。这里提出的多功能 HIT 捕获策略有望简化突变等位基因的靶向生成，并促进猪等大型哺乳动物的大规模诱变。
终末期心力衰竭患者的人造心脏移植与供体心脏移植的比较结果是什么？
对终末期心力衰竭（ESHF）患者的总人工心脏（TAHS），心室辅助装置（VAD）和原位心脏移植（OHT）的比较分析揭示了一些关键见解。我们的荟萃分析表明，与接受TAHS和VAD的人相比，OHT接受者的一年和五年生存率较高。具体而言，OHT的一年生存率为87％，明显高于TAHS的75％，VAD的生存率高于75％[4]。此外，使用堪萨斯城心肌病问卷（KCCQ）和EQ-5D评估的生活质量（QOL）分数在OHT接受者中最高，表明功能卓越和心理恢复。然而，TAH和VAD显示出很大的进步，血液动力学稳定性的改善和某些并发症率的降低，在没有供体心脏的情况下将它们定位为可行的替代方案[5]。
通过AAV6介导的供体递送在人诱导的多能干细胞中增强的内源基因标记
在人类诱导的多能干细胞（HIPSC）中，系统地对内源性蛋白进行了带有荧光标记的内源性蛋白，可以观察到不同细胞态中的活细胞动力学。然而，通过CRISPR/CAS9诱导的编辑将氟化蛋白的精确插入到活细胞中依赖于同源指导的修复（HDR）。非同源末端连接（NHEJ）DNA修复途径通常胜过HDR，导致不可逆的内部和缺失（Indels）和低敲门效率。识别成功的HDR介导的标记事件是当目标基因在干细胞中未表达并且成功的标记可能不会立即观察到的靶基因是一个额外的挑战。为了解决这些挑战，我们使用了：1）在优化的感染多重性（MOI）下，与腺相关的病毒血清型6（AAV6）介导的DNA供体以最大的效率提供标签有效载荷； 2）滴定的多重CAS9：GRNA核糖核蛋白（RNP）量确保条件之间的HDR/indel频率平衡； 3）长放大液滴数字PCR（DDPCR），以测量编辑池中HDR产生的等位基因的频率； 4）同时推断CRISPR编辑（ICE）以检测并避免与Indels明显饱和（> 50％）。这些方法使我们能够确定有效，准确的编辑条件并恢复带有标记的单元，包括在干细胞中未表达的位点标记的单元。这些步骤共同使我们能够开发出有效的方法和工作流程，直接从具有最佳HDR和最小化indel频率的理想细胞池的克隆分离。使用这种方法，我们同时实现了荧光标记物和双重插入到四个基因中的基因，这些基因在差异过程中被打开，但最初在HIPSC中未表达，在HIPSC中，基于荧光基于荧光的标记细胞的直接选择是不可能的：TBR2，TBR2，TBXT，CDH2，CDH2，CDH2，CDH2，CDH2，CDH2（PROFEFFEREDIATION和MEGREDIATION和MEGREGRIATION和MEGRGIAL egratiation and Moggratial Genes and Cdhees and Cdhh5）and Cdhh5（cdh5）和CDH5（cdh）5（cdh）5（cdh）5（cdh5）。通过对各种GRNA序列和RNP浓度的系统评估，我们确定了达到高HDR频率的每个基因的条件，以38.6％的峰值达到峰值，同时还避免了与Inderels相关的条件，在这种情况下，很难在带有统一的等位基因中具有标记等位基因的克隆的隔离。过度，该方法提高了在hipscs中未表达的基因的荧光敲击的效率，对细胞过程的基于可靠的基于图像的观察，并可以恢复精确编辑的单声道和双重标记的克隆。我们将这些方法标准化，以产生有效且一般的工作流程，以将大型HDR介导的敲入引入HIPSC中。
比较固体器官移植受者的血浆中供体衍生的无细胞DNA定量的方法
在同种异体器官移植受体的同种异体移植监测中，使用供体衍生的无细胞无细胞DNA（DD-CFDNA）在等离子体中的液体活检已成为一种新型方法。尽管对技术进行了早期临床实施和分析验证，但仍缺乏对DD-CFDNA定量方法的直接比较。此外，关于尿液中DD-CFDNA的数据是稀缺的，到目前为止，基于高通量测序的方法尚未利用独特的分子识别剂（UMIS）来实现绝对DDDNNA量化。在肾脏和肝脏受体的尿液和血浆中比较了不同的DD-CFDNA定量方法：a）使用等位基因特异性检测的液滴数字PCR（DDPCR），可检测七个常见的HLA-DRB1等位基因和Y染色体； b）使用定制的QIASEQ DNA面板的高通量测序（HTS），该面板的靶向121个常见多态性； c）商业DD-CFDNA定量方法（Alloseq®CFDNA，Caredx）。dd-cfDNA定量为％dd-cfDNA，用于DDPCR和HTS，并使用UMIS作为供体副本。此外，在临床稳定的受体中比较了尿液和血浆中的相对和绝对DD-CFDNA水平。此处介绍的HTS方法表明，％dd-cfDNA与ddpcr（r 2 = 0.98）和Alloseq®CfDNA（R 2 = 0.99）之间的相关性很强，仅显示最小的比例偏见。绝对DD-CFDNA拷贝也与UMI和DDPCR之间的HTS之间也有很强的相关性（τ= 0.78），尽管具有相当比例的偏置（斜率：0.25; 95％-CI：0.19 - 0.26）。在30个稳定的肾脏移植受者中，尿液中的中值％dd-cfDNA为39.5％（四分位数，IQR：21.8 - 58.5％），含36.6份/μmol尿肌氨酸（IQR：18.4 - 109）和0.19％（IQR：0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01 - 0.01-01）： 12.9）在体液之间没有任何相关性的等离子体中。来自八个稳定肝脏受体的血浆中的中位数％DD-CFDNA为2.2％（IQR：0.72 - 4.1％），使用120份/ml（IQR：85.0 - 138），中位DDDNNA拷贝/ml低于0.1，尿液中低于0.1。尿液和等离子体中DD-CFDNA绝对和相对定量的方法的第一个正面比较，支持与方法无关的％DD-CFDNA截止
使用 CRISPR/Cas9 系统和双链 DNA 供体标记荧光报告基因蛋白
Sylvain Geny、Simon Pichard、Alice Brion、Jean-Baptiste Renaud、Sophie Jacquemin 等人。使用 CRISPR/Cas9 系统和双链 DNA 供体标记带有荧光报告基因的蛋白质。Arnaud Poterszman。多蛋白复合物，2247，Springer；Humana，第 39-57 页，2021 年，分子生物学方法，978-1-0716-1125-8。�10.1007/978-1-0716-1126-5_3�。�hal-03092017�
供体粪便的输注会影响人类具有代谢综合征的人类的肠道轴
目的：越来越多的证据表明肠道菌群通过肠道丁酸酯的产生在不同的代谢过程中发挥作用。人类减肥手术数据表明，肠脑轴也参与了这一过程，但潜在的机制仍然未知。方法：我们比较了后鼠后胃旁路（rygb）供体对（123 i-fp-CIT确定）脑多巴胺多巴胺（Date）和丁酸的丁酸酯（Date）和固定剂（Sert）固定型（and Sert）固定型（及其稳定性）的效果24名未经代谢综合征受试者的男性和女性治疗的数周。血浆代谢物和粪便菌群。结果：与口服丁酸酯相比，我们观察到供体FMT后大脑DAT的增加，从而降低了这种结合。然而，在患有代谢综合征的人类中，在乳房后的供体粪便转移后，没有对体重和胰岛素敏感性的影响。粪便水平均均匀的均匀水平与DAT的增加显着相关，而Prevotella spp的增加。显示反向关联。血浆代谢物甘氨酸，甜菜碱，蛋氨酸和赖氨酸（与S-腺苷甲氨酸循环相关的）的变化也与纹状体DAT的改变有关。结论：尽管需要更多和更大的研究，但我们的数据表明，在患有肥胖代谢综合征的人类受试者中，潜在的肠道微生物群驱动的调节脑多巴胺和5-羟色胺转运蛋白。NTR注册：4488。这些数据还表明可以调节的人类存在肠脑轴。2020年作者。由Elsevier GmbH出版。这是CC下的开放访问文章（http://creativecommons.org/licenses/4.0/）。
双作用一氧化氮供体和磷酸二酯酶5抑制剂可促进正常小鼠和糖尿病小鼠的伤口愈合
慢性伤口会影响全球大部分人口，并引起显着的发病率。不幸的是，尚未可用于治疗慢性伤口的有效化合物。内皮功能障碍至少是一氧化氮产生和CGMP水平伴随降低的部分原因，这是慢性伤口的主要病理特征。因此，我们设计和合成了具有独特的双作用活性（TOP-N53）的化合物，充当一氧化氮供体和磷酸二酯酶5抑制剂，并将其局部应用于健康的和疗法受抑制的小鼠中的全粉状皮肤伤口。TOP-N53在健康小鼠中促进了角质形成细胞的增殖，血管生成和胶原蛋白成熟，而无需加速伤口的炎症或疤痕形成。最重要的是，它通过刺激重新上皮化和肉芽组织形成（包括血管生成），部分挽救了用遗传确定的II型糖尿病（DB/DB）的小鼠的愈合障碍。对人和鼠原代细胞的体外研究表明，TOP-N53对角质形成细胞和纤维细胞迁移，角质形成细胞增殖以及内皮细胞迁移和管形成的积极作用。这些结果通过靶向伤口组织中的主要居民细胞，表明了TOP-N53的显着愈合活性。