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海报：使用单链 DNA 模板进行高效的同源定向修复
(ssDNA) 是优于 dsDNA 的 HDR 模板。在此，我们报告了一项系统研究，比较了 HEK293 细胞中的 dsDNA HDR 模板和 IDT Ultramer® 寡核苷酸 ssDNA HDR 模板。测试了链选择和同源臂长度，以确定 HDR 在 Cas9 dsDNA 断裂点创建新的限制位点（6 个碱基插入）的效率。使用较长 ssDNA HDR 模板的初步实验表明，与较短 ssDNA 模板具有类似的优势和行为。具有不对称同源臂的模板的 HDR 插入。使用具有不对称同源臂的 HDR 模板导致 EcoRI 插入率与对称同源臂的插入率相似。使用靶向链模板获得了高 HDR 效率，其中
重新组合：使用单链寡聚>的体内基因工程效率高度
重新组合提供了对任何DNA序列进行快速，精确和廉价的遗传改变的能力，无论是在染色体中还是克隆到载体上，以在大肠杆菌（或其他重新组合的培养细菌）中复制的载体，并以高效的方式进行。可以在重新组合的几天内创建不可能用体外基因工程制造的复杂遗传构建体。与单链DNA（ssDNA）重新组合可用于创建单个或多个聚类点突变，小或大（最大或最大（最高10KB）缺失）以及小（10-20个基本）插入（例如序列标签）。使用优化的条件，可以使用如此高的频率进行点突变，以至于无需选择就可以找到它们。这项技术在创建定向和随机突变方面表现出色。
通过双链DNA片段的单链DNA寡桥构建SGRNA-CAS9表达载体
功能活性（粘性终端连接）：20μl含有0.5 µL快速T4 DNA连接酶，12μgHindiii消化的lambda DNA和1x T4 DNA连接酶在37°C下孵育37°C，过夜，由Agarose gelorophoresis确定的片段，在> 95％的片段中，> 95％的片段。重新消化的连接产物，50μl反应，其中含有6μg连接的片段，40个单位Hindiii和1x的Nebuffer 2在37°C下孵育2小时，导致未检测到的未检测到的未发现的片段，因为琼脂糖凝胶电基果实确定。
摘要：人类免疫缺陷病毒类型1（HIV-1）的逆转录酶（RT）是转化单链VIR div>的必需酶
摘要：人免疫缺陷病毒类型1（HIV-1）的逆转录酶（RT）是必需的酶，将单链病毒RNA基因组转化为双链病毒病毒DNA。非核苷逆转录酶抑制剂（NNRTIS）对于开发新型有效抑制剂而引人入胜，因为它们具有很高的敏感性和高特异性。但是，发生突变引起的耐药性的快速发展。如今，影响HIV-1 RT突变的新型nnrtis具有挑战性。在这项研究中，一些新的NNRTI被研究如下。 （1）发现一系列的NNRTIS吡嗪酮可活跃于野生型HIV-1 RT，其中一些也对突变的HIV-1 RT也有效。因此，需要吡唑酮与HIV-1 RT的特异性结合模式，以暗示针对野生和突变的HIV-1 RT的新型有效nnrtis的设计。已经应用了分子对接，3D-QSAR和量子化学计算的组合。选择了每个吡嗪酮的对接构象来构建COMFA和COMSIA模型。这两个模型都表明，在氨基苯基位置处的取代基更喜欢笨重，吸电子，H-copceptor和不利的疏水基团。此外，在化合物No之间获得的相互作用能量。9和量子化学计算的结合口袋显示与GLU138（b）的重要相互作用。使用6-31G（D），6-31G（D，P），6-311G（D）和6-311G（D）和6-311G（D）（D，P）基集，使用B3LYP和MP2方法计算B3LYP和MP2方法之间的相互作用能与BSSE进行。（2）HIV-1逆转录酶抑制剂的相互作用，S-3-乙基-7-氟-4-异丙氧基 - carbonyl-3,4-二氢 - Quinoxalin-2（1H）-Nyoxalin-2（1H）-One（1H） - 酮（GW420867X）（GW420867X），并使用野生型HIV-1 RT结合袋，使用量化量化量。尤其是，使用各种模型计算出与抑制剂结合的最重要氨基酸的相互作用能量，以评估必须考虑哪些终止残基。最佳结果证实了GW420867X通过铵基和Lys101的骨架原子之间的氢键形成了与Lys101最重要的相互作用。结果对于描述NNRTIS的结合模式并提出了新的有效NNRTIS的设计。
abasic位点和DNA单链破裂的影响
抽象的可言位置被认为是最常发生的细胞DNA损伤，并且是自发产生的，也是由于化学或辐射对DNA的损害而产生的。与无碱性位点对DNA聚合酶的影响的丰富信息相反，这些病变与RNA聚合酶如何相互作用知之甚少。使用体外转录系统来确定无碱性位点和单链断裂对转板伸长的影响。DNA模板是构建的，其中包含来自两个不同启动子的独特位置放置在独特位置的单个障碍物或划痕，并由SP6和Escherichia coli RNA聚合酶转录。sp6 RNA聚体最初停滞在Abasic部位，随后，这些病变的有效旁路。大肠杆菌RNA聚合酶也绕过了无碱性位点。相比之下，在无碱性位点引起的单链破裂完全阻断了两个RNA聚合酶的进展。全长转录本的序列分析表明，SP6和大肠杆菌RNA聚合酶插入了原始的，即使不是精心抗拒的腺嘌呤残基与无碱性位点相反。这种FMDing表明，在转录水平上，无碱性位点在体内可能是高度诱变的。