(ssDNA) 是优于 dsDNA 的 HDR 模板。在此,我们报告了一项系统研究,比较了 HEK293 细胞中的 dsDNA HDR 模板和 IDT Ultramer® 寡核苷酸 ssDNA HDR 模板。测试了链选择和同源臂长度,以确定 HDR 在 Cas9 dsDNA 断裂点创建新的限制位点(6 个碱基插入)的效率。使用较长 ssDNA HDR 模板的初步实验表明,与较短 ssDNA 模板具有类似的优势和行为。具有不对称同源臂的模板的 HDR 插入。使用具有不对称同源臂的 HDR 模板导致 EcoRI 插入率与对称同源臂的插入率相似。使用靶向链模板获得了高 HDR 效率,其中