最近的研究揭示了 RNA 在修复 DNA 双链断裂中的作用。在这里,我们展示了小型 TevSaCas9 双核酸酶产生的不对称 DNA 悬垂为人类细胞中一种简单而强大的编辑策略提供了信息,即招募 Pol θ 和 Rad52 来修复双链断裂。TevSaCas9 的 I-TevI 核酸酶域产生的 2-nt、3' DNA 悬垂与共定位修复模板的 3' 端杂交,引导 RNA 特异性地许可修复。破坏修复双链稳定性的替换会降低编辑效率。靶向 RNA 模板修复(重复编辑)利用基于细胞 RNA 的 DNA 修复途径在人类细胞中引入精确的核苷酸编辑、删除和插入,具有高效率和保真度,与共同传递的修复功能无关。 TevSaCas9 和 RNA 修复模板的尺寸较小,与尺寸受限或多组分编辑系统相比具有传递优势。
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