开发高产营养水稻是缓解发展中国家微量营养素缺乏问题,特别是涉及锌和铁 (Fe) 缺乏的人类营养不良问题,并实现更好应用的一种方法。Fe 和 Zn 等微量营养素的运输主要通过烟胺合酶 (OsNAS) 基因家族调控,而产量是一种涉及多个基因座的复杂性状。通过 CRISPR (成簇的规律间隔的短回文重复序列)-Cas9 进行基因组编辑,重点关注 OsNAS2 启动子,特别是删除位置 -933 处的顺式调控元件 ARR1AT,以增强籽粒和单株植物中 Zn 的积累。结果表明,我们的启动子编辑增加了单株植物的 Zn 浓度。证据还表明,每个主穗的小穗数量增加可导致单株籽粒增加。这些性状在“无转基因”和纯合植物后代中遗传。需要进行进一步研究来验证田间条件下的性状表现并阐明小穗增加的原因。
Resin Developed Pre-Commercial Designation Year Developed Compostion Penacolite® B1A 1940's Resorcinol - Formaldehyde Penacolite® B16 1950's Resorcinol - Formaldehyde Penacolite® B17 1962 Resorcinol - Formaldehyde Penacolite® B18 1964 Resorcinol - Formaldehyde Penacolite® B18S RDL - 065 1976 RF Resin + RM441 Penacolite® B19S RDL - 095 1978 RF Resin + RM441 Penacolite® B20S*** RDL - 055 1988 R + Styrene + F Resin Penacolite® B21S *** RDL - 516 2004 R + Styrene + F Resin Penacolite® B22 1950's Phenol + Resorcinol + FPenaColite®untipro 100 ***良好的年份代码:“ Rajic” 2003 M-羟基二苯胺Penacolite®I868 C *** CRL -434 2009 RESORCINOL -MDI ADRAUCT -MDI ADRAUCT
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2025年1月9日发布。 https://doi.org/10.1101/2025.01.09.632034 doi:Biorxiv Preprint
摘要 增强子-启动子环路模型长期以来一直主导着基因调控领域,其中增强子通过物理接触激活其靶基因。然而,由于存在替代机制的证据以及缺乏系统验证(主要是由于缺乏合适的实验技术),该模型的普遍性受到了质疑。在本研究中,我们提出了一种新的基于 MNase 的邻近连接方法,称为 MChIP-C,该方法可以在基因组范围内以单核小体分辨率测量蛋白质介导的染色质相互作用。通过应用 MChIP-C 研究 K562 细胞中以 H3K4me3 启动子为中心的相互作用,我们发现与基于限制性内切酶的 C 方法相比,它具有大大提高的分辨率和灵敏度。这使我们能够将 EP300 组蛋白乙酰转移酶和 SWI/SNF 重塑复合物确定为建立和/或维持增强子-启动子相互作用的潜在候选者。最后,利用已发表的 CRISPRi 筛选数据,我们发现大多数经过功能验证的增强子确实与其同源启动子发生物理相互作用,支持增强子-启动子环路模型。
最近,我们描述了一个调节系统,该系统允许在较高的真核细胞系(1),植物(2)和动物(3,4)中严格控制单个基因活性。该系统的基本组件是(i)一个RNA聚合酶H最小启动子,放置在多个操作序列(TETO)的下游,其大肠杆菌tnjo Tetracycline抗性操纵子和(ii)TET抑制剂(TET)(TETR)和Simples Simples Simplex Virus Protein 16(vpp16(vp p p p)(ii)(ii)(ii)融合。在不存在四环素(TC)的情况下,TTA与TET算子结合以激活最小启动子的转录,而在TC存在下,它的关联并因此阻止了其转录激活。在TTA结合后,源自巨细胞病毒IE启动子(PHCMV,5)的最小启动子,并融合到七个TETO序列中,当在短暂性表达测定中进行比较时,在HELA细胞中的父启动子的明显强度达到了显着的强度(6)。TTA的高激活潜力及其结合位点在PHCMV*_1 [(1)中的排列;参见图ia]建议设计双向启动子,该设计将允许同时调节来自中心位置多个TETO序列的两个转录单元(图la)。这样的启动子对于多种实验方法应该有用。首先,它可以允许以化学计量量的两种基因产物的合成,这通常是产生异二聚体(或异源 - 寡聚)蛋白的先决条件。在这里,我们报告了双向启动子的构建(PBI-L;图第二,通过将不同效率的最小启动子融合到中心位置的TETO序列,可以在不同但定义的水平上共同调节两个基因产物。第三,通过在双向启动子的一侧整合适当的报告基因,可以通过报告基因函数来监测对不可读基因的调节。后一种可能性也可能有助于在细胞和有机水平上 - 筛选正确整合的表达单元,以控制感兴趣的基因。1a)表明,该启动子以定量方式共同调节了编码P-半乳糖苷酶和荧光素酶的两个报告基因。此外,我们描述了一个矢量系列,很容易允许将PBI-I用于各种目的。图1a所示的广义发散转录单元由基因X的双向启动子组成,然后是
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结果进行临床前实验,用CRISPR-CAS9和GRNA-68编辑的CD34+ HSPC(从健康的供体和镰状细胞疾病的疾病中获得)持续了靶向编辑,没有脱离靶向突变,并产生了高水平的胎儿血红蛋白,在体外分化或Xenotransplansplansplansplansplansplansationsmunodefi-ccientfi- c ccientfi- cccientfi- c c c cccientfii cantecientfi- c。在研究中,三名参与者在肌电调节后接受了自体OTQ923,并进行了6至18个月的遵循。在随访期结束时,所有参与者都植入和稳定诱导胎儿血红蛋白(胎儿血红蛋白,占总血红蛋白的百分比,19.0至26.8%),胎儿血红蛋白在红细胞中广泛分布在红细胞中(F细胞,红细胞为f,f lys aft y light tym a 69.7至87.8%)。在随访期间镰状细胞疾病的表现减少。
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可证永久有效。它是在预印本(未经同行评审认证)下提供的,作者/资助者已授予 bioRxiv 许可,可以在该版本中显示预印本。此版本的版权持有者于 2023 年 2 月 7 日发布。;https://doi.org/10.1101/2023.02.06.527393 doi:bioRxiv 预印本
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